SN/T 5814-2025 进出口化妆品中吡咯里西啶生物碱的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 71.100.70 CCS Y 42

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/ T 5814—2025

　　进出口化妆品中吡咯里西啶生物碱的测定液相色谱 - 串联质谱法

　　Determination of pyrrolizidine alkaloids in cosmetics for import and export—Liquid chromatography tandem mass spectrometry method

　　2025-12-11 发布 2026-07-01 实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5814— 2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：广州海关技术中心、汕头海关技术中心。

　　本文件主要起草人：谢建军、董洁、曾广丰、侯颖烨、王璐、游勇来、蔡翠玲、肖可茵、李菊、陈文锐、王志元、陆奕娜。

　　I

　　SN/T 5814— 2025

　　进出口化妆品中吡咯里西啶生物碱的测定

　　液相色谱 - 串联质谱法

　　1 范围

　　本文件规定了进出口化妆品中 10 种吡咯里西啶生物碱的液相色谱 - 串联质谱检测方法。

　　本文件适用于膏霜乳、液体、凝胶、蜡基、膜等化妆品中千里光菲灵、千里光宁、野百合碱、克氏千里光宁碱、倒千里光碱、立可沙明碱、天芥菜碱、毛果天芥菜碱、倒千里光裂碱、蓝蓟定 10种吡咯里西啶生物碱的测定，其他化妆品基质经充分验证后可参照执行。

　　2 规范性文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本 ( 包括所有的修改单 ) 适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语与定义。

　　4 方法提要

　　试样中加入 0.5% 甲酸 - 乙腈涡旋振荡后超声提取，混合型强阳离子固相萃取柱净化，吡咯里西啶生物碱经液相色谱 - 质谱 / 质谱仪测定，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 中规定的一级水。

　　5.1 乙腈：色谱纯。

　　5.2 甲酸：色谱纯。

　　5.3 甲醇：色谱纯。

　　5.4 盐酸：优级纯。

　　5.5 氨水。

　　5.6 氯化钠。

　　5.7 0.5% 甲酸乙腈溶液(V/V)：准确移取5 mL 甲酸于 1 000 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀。

　　5.8 0.1 mol/L盐酸溶液(V/V)：准确移取 8.33mL盐酸于 1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。 5.9 5% 氨水甲醇溶液(V/V)：准确移取 5 mL 氨水于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。 5.10 10% 甲醇水溶液(V/V)：准确移取 100 mL 甲醇于 1 000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。

　　1

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　　5.11 0.1 % 甲酸水溶液(含 5 mmol/L 甲酸铵)： 称取 0.32g 甲酸铵于 1 000 mL 容量瓶中，加适量水溶解，加入 1 mL 甲酸，用水定容至刻度。

　　5.12 标准品：10 种吡咯里西啶生物碱标准品的分子式和 CAS 号如下：千里光菲灵(C18H23NO5 ， CAS 号：480-81-9)，千里光 宁(C18H25NO5 ，CAS 号：130-01-8)，野百合碱(C16H23NO6 ，CAS 号： 315-22-0)，克氏千里光宁碱(C19H27NO6 ，CAS 号：2318-18-5)，倒千里光碱(C18H25NO6 ，CAS 号： 480-54-6)，立可沙明碱(C15H25NO5 ，CAS 号：10285-07-1)，天芥菜碱(C16H27NO5 ，CAS 号：303- 33-3)，毛果天芥菜碱(C21H33NO7 ，CAS 号：303-34-4)，倒千里光裂碱(C8H13NO2 ，CAS 号：480- 85-3)，蓝蓟定(C20H31NO7 ，CAS 号：520-68-3)。标准品的纯度≥ 95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

　　5.13 标准储备液：准确称取 25 mg(精确到 0.01 mg)吡咯里西啶生物碱标准品于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为 1.0 mg/mL 的标准储备溶液，-20 ℃避光保存，有效期为 6 个月。

　　5.14 混合标准中间液：分别准确移取 0.25 mL 的各吡咯里西啶生物碱标准储备液(5.13)于 25 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制浓度为 10.0 μg/mL 的标准中间液，-20 ℃避光保存，有效期为 1 个月。

　　5.15 标准工作液：准确移取一定体积的混合标准中间液(5.14)，用空白基质液稀释成 5.0 μg/L、 10.0 μg/L、20.0 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L 的系列浓度，现用现配。

　　5.16 混合型强阳离子固相萃取柱：60 mg，3 mL，或相当者。

　　5.17 微孔滤膜：0.22 μm，有机相。

　　6 仪器和设备

　　6.1 液相色谱 - 串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (ESI)。

　　6.2 分析天平：感量分别为 0.01 g 和 0.01 mg。

　　6.3 涡旋混合器。

　　6.4 高速离心机：10 000 r/min。

　　6.5 超声波清洗机。

　　7 分析步骤

　　7.1 样品前处理

　　7.1.1 提取

　　称取 1.0 g(精确到 0.01g)试样置于 50 mL 离心管中，加入 0.5% 甲酸乙腈溶液(5.7)10 mL(霜类样品需要另外加入 1g 氯化钠)，涡旋 2 min，超声提取 20 min，以 10 000 r/min 转速离心 5 min，待净化。

　　7.1.2 净化

　　混合型强阳离子固相萃取柱(5.16)分别用 3 mL 甲醇和 3 mL 0.1 mol/L 盐酸(5.8)活化平衡，然后把全部上清液过柱，3 mL 水和 3 mL 甲醇(5.3)淋洗，5 mL 5% 氨水甲醇(5.9)洗脱。洗脱液氮吹至干，加入 10% 甲醇水溶液(5.10)1 mL， 涡旋 2 min，过 0.22 μm 滤膜后，液相色谱 - 串联质谱仪测定。

　　7.2 测定

　　7.2.1 液相色谱条件

　　由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出液相色谱分析的通用参数。设定的参数应保

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　　SN/T 5814— 2025

　　证色谱分析时被测组分与其他组分能得到有效的分离，下列给出的参数可供参考：

　　a)色谱柱 : C18 柱，150 mm × 3.0 mm(内径)，2.7 μm，或性能相当者;

　　b)流动相 : A：0.1 % 甲酸水溶液(含 5 mmol/L 甲酸铵)(5.11);B：乙腈，参考洗脱程序见表 1; c)流速 : 0.5 mL/min ;

　　d)进样量 : 5 μL ;

　　e)柱温 : 40 ℃。

　　表 1 梯度洗脱程序

　　时间(time)

　　A/%

　　B/%

　　0.00

　　90

　　10

　　2.00

　　90

　　10

　　7.00

　　5

　　95

　　9.00

　　5

　　95

　　10.00

　　90

　　10

　　13.00

　　90

　　10

　　7.2.2 质谱条件

　　由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出质谱分析的通用参数。设定的参数应保证质谱分析时被测组分与其他组分能得到有效的分离，下列给出的参数可供参考：

　　a)离子化模式：电喷雾正离子模式 (ESI+) ;

　　b)检测方式：多反应监测 (MRM) ;

　　c)参考定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量参数见表 A.1。

　　7.2.3 定性测定

　　在上述液相色谱 - 串联质谱条件下测定样品和标准工作溶液，如果样品中检测的质量色谱峰保留时间与吡咯里西啶生物碱标准品相差在 ±5% 以内，并且所选择的两对离子对与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，其相对丰度允许偏差不超过表 2 的范围，则可判定样品中存在吡咯里西啶生物碱。

　　表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差

　　相对离子丰度 /%

　　>50

　　>20~50(含)

　　>10~20(含)

　　≤ 10

　　允许的相对误差 /%

　　±20

　　±25

　　±30

　　±50

　　7.2.4 定量测定

　　按照液相色谱 - 质谱 / 质谱条件(7.2.1 和 7.2.2)采用单点或多点校正方式进行样品和标准工作溶液测定，标准曲线法测定样液中吡咯里西啶生物碱的含量。样品中被测物的量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应适当稀释至标准曲线范围之内进行检测。吡咯里西啶生物碱标准溶液的多反应监测色谱图参见图 B.1。

　　7.3 空白试验

　　除不称取试样外，均按上述测定条件和步骤进行。

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　　8 结果计算和表述

　　采用外标法定量，单点校正按公式(1)计算：

　　式中：

　　X —— 样品中待测物含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　A ——试样溶液对应的色谱峰面积响应值;

　　As ——被测物质标准溶液中对应的色谱峰面积响应值;

　　Cs ——标准工作溶液中被测物质的浓度，单位为微克每毫升( μg/mL);

　　C0 ——样品空白溶液中被测物质的浓度，单位为微克每毫升( μg/mL) ;

　　V ——试样测定液的最终定容体积，单位为毫升(mL);

　　m ——试样质量，单位为克(g);

　　f —— 稀释倍数(如未稀释则为 1)。

　　多点校正用公式(2)计算：

　　式中：

　　X —— 样品中待测物含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　Cx ——由标准工作曲线而得的样液中被测物质的浓度，单位为微克每毫升( μg/mL);

　　C0 ——样品空白溶液中被测物质的浓度，单位为微克每毫升( μg/mL);

　　V ——试样测定液的最终定容体积，单位为毫升(mL);

　　m ——试样质量，单位为克(g);

　　f —— 稀释倍数(如未稀释则为 1)。

　　计算结果大于 1 mg/kg 时，保留 3 位有效数字;小于等于 1 mg/kg 时，保留 2 位有效数字。

　　9 定量限和回收率

　　9.1 检出限和定量限

　　本方法千里光菲灵、千里光宁、野百合碱、克氏千里光宁碱、倒千里光碱、立可沙明碱、天芥菜碱、毛果天芥菜碱、倒千里光裂碱、蓝蓟定 10 种吡咯里西啶生物碱检出限均为 0.007 mg/kg，定量限均为 0.02 mg/kg。

　　9.2 回收率

　　本方法分别以面霜、爽肤水、唇膏、精油、面膜和乳液为空白样品基质，进行三个浓度水平的添加回收试验，每个浓度水平进行六次重复实验，测得各种基质中吡咯里西啶生物碱的回收率和相对标准偏差范围参见附录 C 中表 C.1。

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　　附 录 A (资料性)

　　参考质谱条件①

　　参考质谱条件如下：

　　a)电喷雾电压：5 000 V ;

　　b)离子源温度：500 ℃ ;

　　c)气帘气：30 psi ;

　　d)雾化气：50 psi ;

　　e)加热辅助气：50 psi。

　　表 A.1 多反应监测条件

　　化合物

　　母离子m/z

　　子离子m/z

　　去簇电压

　　V

　　碰撞能量eV

　　千里光菲灵

　　334.2

　　120.2a

　　113.1

　　34.8

　　306.2

　　38.6

　　千里光宁

　　336.2

　　120.2a

　　113.1

　　40.9

　　138.2

　　39.5

　　野百合碱

　　326.2

　　120.1a

　　102.1

　　50.1

　　94.2

　　73.4

　　克氏千里光宁碱

　　366.2

　　168.2a

　　109.8

　　41.4

　　122.2

　　46.5

　　倒千里光碱

　　352.3

　　120.2a

　　116.3

　　40.9

　　138.2

　　40.3

　　立可沙明碱

　　300.2

　　94.2a

　　98.8

　　36.5

　　156.2

　　39.6

　　天芥菜碱

　　314.2

　　138.1a

　　90.9

　　22.8

　　156.2

　　37.6

　　毛果天芥菜碱

　　412.4

　　120.1a

　　102.5

　　30.9

　　220.2

　　23.8

　　倒千里光裂碱

　　156.2

　　108.2a

　　100.1

　　27.9

　　80.1

　　40.2

　　蓝蓟定

　　398.3

　　120.1a

　　103.1

　　35.0

　　220.1

　　24.1

　　a 为定量离子。

　　① 非商业性声明 : 附录 A 所列参考质谱条件是在 API 4000 型液质联用仪上完成的 , 此处列出试验用仪器型号仅为提供参考 , 并不涉及商业目的 , 鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。

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　　附 录 B

　　(资料性)

　　10 种吡咯里西啶生物碱标准物质谱图

　　10 种吡咯里西啶生物碱标准物质的多反应监测色谱图如图 B.1 所示。

　　图 B.1 10 种吡咯里西啶生物碱标准物质(50.0 μg/L)的多反应监测色谱图

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　　SN/T 5814— 2025

　　附 录 C

　　(资料性)

　　吡咯里西啶生物碱回收率和精密度数据

　　10 种吡咯里西啶生物碱回收率和精密度数据如表 C.1 所示。

　　表 C.1 化妆品中 10 种吡咯里西啶生物碱的添加回收率和精密度数据(n=6)

　　化合物

　　0.02mg/kg、0.04mg/kg 和 0.10mg/kg 添加水平下回收率(%)/ 相对标准偏差(%)

　　面霜

　　爽肤水

　　唇膏

　　精油

　　面膜

　　乳液

　　千里光菲灵

　　76.8~96.3/1.57~8.23

　　82.5~96.5/

　　2.77~3.86

　　84.0~100/

　　5.32~6.94

　　82.3~93.3/

　　1.25~4.79

　　82.5~100/

　　2.32~6.42

　　81.5~97.8/

　　4.15~8.18

　　千里光宁

　　80.0~102/1.99~4.11

　　82.5~92.3/

　　2.79~4.05

　　88.7~100/

　　2.09~3.79

　　84.7~105/

　　3.61~7.40

　　82.1~99.8/

　　3.00~5.20

　　81.5~97.5/

　　4.76~5.18

　　野百合碱

　　78.8~98.5/2.72~5.67

　　86.5~101/

　　1.77~4.42

　　88.8~99.6/

　　2.62~4.24

　　80.0~94.0/

　　2.53~3.22

　　84.6~96.0/

　　1.99~4.28

　　82.0~98.4/

　　5.26~6.09

　　克氏千里光宁碱

　　82.0~103/2.95~9.18

　　86.3~103/

　　4.07~5.32

　　82.3~101/

　　2.53~6.35

　　84.0~105/

　　2.78~6.63

　　84.5~102/

　　4.48~6.04

　　82.5~98.8/

　　4.13~5.86

　　倒千里光碱

　　85.2~101/2.59~3.69

　　81.5~105/

　　2.25~4.84

　　75.5~95.5/

　　5.82~6.16

　　83.5~103/

　　2.35~5.70

　　84.8~100/

　　3.40~6.05

　　83.5~98.0/

　　3.97~5.52

　　立可沙明碱

　　81.5~101/3.74~8.14

　　82.3~97.0/

　　1.93~4.33

　　82.0~100/

　　2.55~4.11

　　83.8~94.9/

　　2.44~3.93

　　83.0~93.6/

　　3.76~3.86

　　84.0~97.3/

　　3.15~5.11

　　天芥菜碱

　　81.0~103/2.40~7.05

　　82.0~104/

　　3.41~9.76

　　77.5~99.3/

　　2.65~5.80

　　81.0~98.5/2.75~5.86

　　81.4~102/3.42~5.67

　　83.6~97.5/

　　2.77~5.46

　　毛果天芥菜碱

　　81.8~99.8/5.45~8.42

　　85.9~100/

　　1.97~5.13

　　81.4~104/1.93~8.39

　　81.5~106/2.51~5.37

　　82.5~101/2.87~8.04

　　81.5~96.5/

　　3.19~5.34

　　倒千里光裂碱

　　78.5~94.9/4.28~6.01

　　80.6~102/

　　2.28~5.79

　　77.0~105/3.26~6.50

　　76.0~95.5/

　　1.29~5.19

　　80.5~99.0/

　　3.70~4.40

　　79.5~98.5/

　　4.09~7.10

　　蓝蓟定

　　81.3~99.5/5.32~8.95

　　83.0~96.5/

　　2.90~7.10

　　81.4~102/1.81~6.47

　　81.0~98.5/

　　5.15~6.77

　　92.0~103/2.02~2.96

　　84.5~98.5/

　　3.43~5.95

　　7