SN/T 5727.6-2025 出口林下三七检验规程 第6部分：三七素的测定 高效液相色谱法

　　ICS 67.050 CCS X 04

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5727.6—2025

　　出口林下三七检验规程

　　第6部分：三七素的测定 高效

　　液相色谱法

　　Rules for the inspection of panax notoginseng cultivated in forest for export —

　　Part 6: Determination of dencichine of panax notoginseng cultivated in forest

　　for export — High performance liquid chromatography

　　2025-12-11发布 2026-07-01实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　前 言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件是SN/T 5727—2025《出口林下三七检验规程》的第6部分。SN/T 5727—2025 已经发布了以下部分：

　　——第 1部分：总则;

　　——第2部分：林下三七鉴别 近红外光谱法;

　　——第3部分：三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法;

　　——第4部分：稳定氮同位素比值(15N/14N)测定 同位素比质谱法;

　　——第5部分：5种皂苷的测定 高效液相色谱法;

　　——第6部分：三七素的测定 高效液相色谱法;

　　——第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法;

　　——第8部分：多元素的测定 电感耦合等离子体质谱法;

　　——第9部分：有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定 气相色谱-质谱/质谱法。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：天津海关动植物与食品检测中心、天津师范大学、云南农业大学、中华人民共和国昆明海关、厦门海关技术中心、西南林业大学、通标标准技术服务有限公司。

　　本文件主要起草人：李淑静、刘伟、郭力维、郑文杰、马兴、赵良娟、叶辰、何霞红、徐敦明、关鼎儒、施蕊、杨敏、季超、李娟、朱书生、朱有勇。

　　I

　　引 言

　　SN/T 5727—2025《出口林下三七检验规程》旨在建立适用于林下三七成分特征和质量安全检测方法，拟由9个部分构成(各部分之间关系如图 1所示)。

　　——第 1部分：总则;目的在于确定适用于出口林下三七的贮藏要求、抽样、检验、结果判定、不合格货物处置和存查样品的要求。

　　——第2部分：林下三七鉴别 近红外光谱法;目的在于确定适用于林下三七与农田三七的快速鉴别方法。

　　——第3部分：三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法;目的在于确定适用于药食同源植物林下三七中三七成分的定性检测方法。

　　——第4部分：稳定氮同位素比值( 15N/14N)测定 同位素比质谱法;目的在于确定适用于三七中的稳定氮同位素比值(15N/14N)的测定方法。

　　——第5部分：5种皂苷的测定 高效液相色谱法;目的在于确定适用于林下三七中的5种皂苷Rb1、Rb3、Re、Rg1 和 R1 的测定方法。

　　——第6部分：三七素的测定 高效液相色谱法;目的在于确定适用于林下三七中的三七素的测定方法。

　　——第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法;目的在于确定适用于林下三七中多糖组分 D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定方法。

　　——第8部分：多元素的测定 电感耦合等离子体质谱法;目的在于确定适用于林下三七中硼(B)、钠(Na)、镁(Mg)、铍(Be)、铝(Al)、钾(K)、钙(Ca)、钛(Ti)、钒(V)、铬(Cr)、锰(Mn)、铁(Fe)、钴(Co)、铯(Cs)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、砷(As)、硒(Se)、锶(Sr)、钼(Mo)、镉(Cd)、锡(Sn)、锑(Sb)、钍(Th)、钡(Ba)、汞(Hg)、铊(TI)、铀(U)、铅(Pb)的测定方法。

　　——第9部分：有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定 气相色谱 -质谱/质谱法;目的在于确定适用于三七中 115种有机磷、有机氯及拟除虫菊酯农药及相关化学品的定性鉴别及定量测定方法。

　　II

　　林下三七鉴别 近红外光谱法

　　鉴别试验

　　三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法

　　稳定氮同位素比值

　　(15N/14N)测定 同位素比质谱法

　　5种皂苷的测定 高效液相色谱法

　　总则

　　成分测定

　　三七素的测定 高效液相色谱法

　　D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、 D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法

　　多元素的测定 电感耦合等离子体质谱法

　　安全检测

　　有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定 气相色谱-质谱/质谱法

　　图 1 SN/T 5727—2025各部分之间关系

　　III

　　出口林下三七检验规程

　　第6部分：三七素的测定 高效液相色谱法

　　1 范围

　　本文件规定了林下三七中三七素的高效液相色谱测定方法。

　　本文件适用于三七中三七素的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。

　　GB/T 8303—2013 茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定

　　SN/T 5727.1 出口林下三七检验规程 第 1部分：总则

　　3 术语和定义

　　SN/T 5727.1界定的术语和定义适用于本文件。

　　4 原理

　　用水提取林下三七中的三七素，经高效液相色谱柱分离，紫外检测器检测，以保留时间和紫外吸收光谱图定性，外标工作曲线法定量。

　　5 试剂和材料

　　除另有规定外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682 中一级水的要求。

　　5.1 试剂

　　5.1.1 乙腈(CH3CN)：色谱纯。

　　5.1.2 甲酸铵(NH4HCO2 )：色谱纯。

　　5.2 耗材

　　微孔滤膜：0.22 μm，水相。

　　5.3 标准物质

　　标准物质：三七素(CAS号：5302-45-4，C5H8N2O5 )。

　　1

　　5.4 试剂配制

　　80 mmol/L 甲酸铵：准确称取2.52 g 甲酸铵，加水溶解，用水定容为500 mL。置于4℃冰箱保存30 d。

　　5.5 标准溶液配制

　　5.5.1 标准储备溶液：称取三七素 10 mg置 10 mL量瓶中，用 10 mL纯水溶解至刻度，摇匀，配制成质量浓度为 1.0 mg/mL 的标准溶液。置于4 ℃冰箱保存30 d。

　　5.5.2 标准工作液：将标准储备溶液用乙腈稀释至浓度为20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL、 200.0 μg/mL、400.0 μg/mL 的标准系列溶液，待用，现用现配。

　　6 仪器和设备

　　6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。

　　6.2 分析天平：感量为0.1 mg和0.01 g。

　　6.3 超声清洗仪。

　　6.4 高速离心机，转速不小于 10 000 r/min。

　　6.5 粉碎机。

　　6.6 标准网筛：孔径大小为 180 μm。

　　7 样品的处理

　　7.1 试样制备

　　样品按 GB/T 8303—2013 中6.1和6.2规定制样，过80 目筛。充分混匀，装入洁净的容器内，作为试样，标明标识。

　　7.2 试样提取

　　称取0.1 g(精确至0.01 g)样品，置 1.5 mL离心管中，加 1 mL纯水，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，振荡提取60 min，10 000 r/min离心5 min，提取两次后将上清液合并混匀，经0.22 μm滤膜过滤，取混合上清液300 uL加乙腈定容至 1 mL，再振荡 15 min后 12 000 r/min离心3 min，取上清液作为待测溶液备用。

　　8 测定

　　8.1 液相色谱参考条件

　　8.1.1 色谱柱：HILIC柱，150 mm×2.1 mm(内径)，5 μm，或相当者。

　　8.1.2 柱温：30 ℃。

　　8.1.3 流动相：乙腈(A)和80 mmol/L 甲酸铵(B)，75%A和25%B 的等度洗脱。

　　8.1.4 流速：0.4 mL/min。

　　8.1.5 检测波长：215 nm。

　　8.1.6 进样量：10 μL。

　　8.2 液相色谱测定

　　按设定的色谱条件(8.1)，取标准工作液系列(5.5.2)进样，进行液相色谱分析，记录各色谱峰

　　2

　　相应的保留时间和紫外吸收光谱图。根据保留时间以各色谱峰面积与其对应的标准溶液浓度作图，绘制标准工作曲线。取待测溶液(7.2)进样分析，若样品色谱图中，在与三七素标准品相应保留时间处有相同色谱峰出现，且具有相同的紫外吸收光谱，则可以初步定性鉴别相应成分的存在，如有必要，可采用其他方法进一步确证。用标准工作曲线对待测样品中检出的成分进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，色谱图及标准品保留时间见附录A。

　　8.3 空白试验

　　除不称取样品外，均按上述条件和步骤进行。

　　9 结果计算与表述

　　试样中标准品的含量由色谱数据处理软件或按公式(1)计算获得：：

　　A ×cs × V

　　103 ×As ×m

　　X= ……………………………(1)

　　式中：

　　X——试样中待测物的含量，单位为毫克每克(mg/g);

　　A ——样液中待测物色谱峰面积;

　　cs ——标准工作溶液中的标准品的浓度，单位为微克每毫升( μg/mL);

　　V ——样液定容的体积，单位为毫升(mL);

　　As ——标准工作溶液中待测物色谱峰面积;

　　m ——最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。

　　计算结果应扣除空白值，结果保留小数点后三位。

　　10 测定低限和回收率

　　10.1 测定低限

　　本方法对三七素定量限为0.33 mg/g。

　　10.2 回收率

　　分别在三七主根、须根、茎、叶样品粉末中添加标准品，添加浓度及回收率数据见附录B。

　　3

　　附 录 A

　　(资料性)

　　三七素标准品的液相色谱图、紫外吸收光谱图(215 nm，浓度为0.3 mg/mL)

　　A.1 三七素标准品的液相色谱图见图A.1。

　　图A.1 三七素标准品的液相色谱图

　　A.2 三七素标准品的紫外吸收光谱图见图A.2。

　　图A.2 三七素标准品的紫外吸收光谱图

　　4

　　附 录 B

　　(资料性)

　　样品的添加浓度及回收率的结果

　　样品的添加浓度及回收率的结果见表B.1。

　　表B.1 样品的添加浓度及回收率的结果

　　基质

　　化合物

　　添加量/mg

　　回收率/%

　　三七主根

　　三七素

　　0.02

　　107～ 116

　　0.05

　　115～ 119

　　0.1

　　106～ 117

　　三七须根

　　三七素

　　0.02

　　88～ 103

　　0.05

　　93～ 100

　　0.1

　　108～ 120

　　三七茎

　　三七素

　　0.02

　　83～97

　　0.05

　　78～ 103

　　0.1

　　107～ 121

　　三七叶

　　三七素

　　0.02

　　81～ 104

　　0.05

　　75～84

　　0.1

　　83～88

　　注：添加物浓度为 1.0 mg/mL

　　。

　　5