SN/T 5870-2025 出口保健食品中烟酰胺单核苷酸含量的测定

　　ICS 67.050 CCS X 04

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5870—2025

　　出口保健食品中烟酰胺单核苷酸

　　含量的测定

　　Determination of the content of nicotinamide mononucleotide

　　in health foods for export

　　2025‑12 ‑ 11 发布 2026‑07‑01 实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5870—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：拱北海关技术中心、珠海粤港食品安全检测有限公司、广州市食品检验所、中国标准化研究院、合肥海关技术中心、深圳海关食品检验检疫技术中心。

　　本文件主要起草人：冯家望、钱振杰、徐振林、陈敬、刘佳、何咏欣、唐食明、王宇、曾俊洁、宋伟、游淑珠、康海宁、云振宇、兰韬。

　　Ⅰ

　　SN/T 5870—2025

　　出口保健食品中烟酰胺单核苷酸

　　含量的测定

　　1 范围

　　本文件描述了保健食品中烟酰胺单核苷酸的液相色谱检测及液相色谱-质谱/质谱确证方法。

　　本文件适用于片剂、粉剂、糖果制品、胶囊剂及口服液等保健食品中烟酰胺单核苷酸的测定和确证，其他类型保健食品参照执行。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　烟酰胺单核苷酸 β‑nicotinamide mononucleotide

　　由核糖和烟酰胺衍生而来的核苷酸，存在于各种生物体内，是辅酶 Ⅰ(NAD+)合成的关键中间体。注：简称 NMN。

　　4 方法提要

　　样品用水超声提取、经固相萃取柱净化，用液相色谱测定，峰面积外标法定量。阳性样品需经液相色谱-质谱/质谱法确证。

　　5 试剂和材料

　　除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。

　　5.1 甲醇：色谱纯。

　　5.2 甲酸。

　　5.3 氯化铵。

　　5.4 氨水。

　　5.5 乙酸铵。

　　5.6 甲酸铵：色谱纯。

　　5.7 正己烷。

　　5.8 甲醇水溶液(50∶50，体积比)：分别量取等量的甲醇(5.1)和水，混合均匀。

　　1

　　SN/T 5870—2025

　　5.9 0.5% 甲酸水溶液：准确量取 5.0 mL 甲酸，以水定容至 1 000 mL，混匀。

　　5.10 氯化铵- 氨水缓冲溶液(0.20 mol/L)：称取氯化铵 10.7 g，加水约 500 mL 使其溶解，再加入 85 mL氨水，微调 pH 至 10(±0.1)再加水定容至 1 000 mL 。

　　5.11 乙 酸 铵 缓 冲 溶 液(0.20 mol/L)：称 取 乙 酸 铵 15.4 g，加 水 约 800 mL 使 其 溶 解 ，用 氨 水 调 pH 至

　　8.5(±0.1)再加水定容至 1 000 mL 。

　　5.12 10 mmol/L 甲酸铵溶液(0.1% 甲酸)：准确称取 0.631 g 甲酸铵，用水溶解，再加入 1.00 mL 甲酸，稀释至 1 000 mL 。

　　5.13 烟 酰 胺 单 核 苷 酸(β-Nicotinamide Mononucleotide，分 子 式 ：C11H15N2O8P ，CAS 号 ：1094-61-7)，含量≥99.5% ，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。

　　5.14 烟 酰 胺 单 核 苷 酸 标 准 储 备 液(1.000 mg/mL)：准 确 称 取 烟 酰 胺 单 核 苷 酸 标 准 品 10 mg(精 确 至0.01 mg)，用甲醇水溶液(5.8)溶解并定容至 10 mL，摇匀后得到质量浓度为 1.000 mg/mL 的烟酰胺单核苷酸标准储备液。于-18 ℃下避光保存，有效期 1 个月。

　　5.15 烟酰胺单核苷酸标准工作溶液：分别准确吸取适量烟酰胺单核苷酸标准储备液至 10 mL 棕色容量瓶中，用 0.5% 甲酸水溶液(5.9)逐级稀释，得到烟酰胺单核苷酸的质量浓度分别为 0.20 µg/mL、0.50 µg/mL、 1.00 µg/mL 、5.00 µg/mL 、10.0 µg/mL 、50.0 µg/mL 、100 µg/mL 、250 µg/mL 、500 µg/mL 的标准工作溶液系列，临用现配。

　　5.16 苯硼酸固相萃取柱：100 mg/3 mL，或者相当者;使用前依次用 2 mL 甲醇(5.1)，2 mL 0.5% 甲酸水(5.9)，3 mL 氯化铵- 氨水缓冲溶液(5.10)活化，并保持柱体湿润。

　　5.17 滤膜：孔径 0.22 µm，水系。

　　6 仪器和设备

　　6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。

　　6.2 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾电离(ESI)源。

　　6.3 分析天平：感量分别为 0.001 g 和 0.000 01 g。

　　6.4 超声波水浴锅。

　　6.5 高速离心机：最大转速不低于 8 000 r/min。

　　6.6 pH 计：精度为±0.1 pH 。

　　7 试样制备与保存

　　7.1 片剂、粉剂、糖果制品等固体样品

　　取代表性样品，用粉碎机捣碎并混合混匀，分成两份，分别装入洁净的容器中，密封并标识，将试样置于-18 ℃以下保存。

　　7.2 胶囊剂

　　7.2.1 硬胶囊

　　取代表性样品，连胶囊壳一起用粉碎机捣碎并混合混匀，分成两份，分别装入洁净的容器中，密封并标识，将试样置于-18 ℃以下保存。

　　7.2.2 软胶囊

　　取代表性样品，将胶囊壳与内容物分离，胶囊壳用粉碎机捣碎，与内容物一起混合混匀，分成两份，分

　　2

　　SN/T 5870—2025

　　别装入洁净的容器中，密封并标识，将试样置于-18 ℃以下保存。

　　7.3 口服液等液体样品

　　取代表性样品混匀，分成两份，分别装入洁净的容器中，密封并标识，将试样置于-18 ℃以下保存。

　　8 测定步骤

　　8.1 提取

　　8.1.1 片剂、粉剂、糖果制品、硬胶囊等固体样品

　　称 取 0.1 g~1.0 g 均 质 化 的 试 样(精 确 至 0.001 g)于 50 mL 具 塞 离 心 管 中 ，加 入 20.0 mL 水 ，振 荡混匀，超声提取 5 min，8 000 r/min 下离心 3 min，取水相清液 1.00 mL 用乙酸铵缓冲溶液(5.11)定容至5.0 mL，混匀待净化。

　　注：操 作 者 能 根 据 试 样 中 烟 酰 胺 单 核 苷 酸 的 声 称 含 量 ，在 不 低 于 标 准 曲 线 测 定 范 围 要 求 的 条 件 下 ，调 整 称 样 量 ，下同。

　　8.1.2 软胶囊

　　称取 0.1 g~1.0 g 均质化的试样(精确至 0.001 g)于 50 mL 具塞离心管中，先加入 10 mL 正己烷分散试样，再加入 20.0 mL 水，振荡混匀，超声提取 5 min，8 000 r/min 下离心 3 min，弃去上层有机相，取水相清液 1.00 mL 用乙酸铵缓冲溶液(5.11)定容至 5.0 mL，混匀待净化。

　　8.1.3 口服液等液体样品

　　准确移取 0.1 g~1.0 g 口服液(精确至 0.001 g)于 10 mL 比色管中，用水定容至刻度，混匀，8 000 r/min下离心 3 min，取水相清液 0.50 mL 用乙酸铵缓冲溶液(5.11)定容至 5.0 mL，混匀待净化。

　　8.2 净化

　　取 2.0 mL 待净化液上样到苯硼酸固相萃取柱(5.16)中，用 1.0 mL 乙酸铵缓冲溶液(5.11)淋洗，弃去淋洗液，再真空抽干 3 min。加入 1.0 mL 0.5% 甲酸水溶液(5.9)洗脱，抽干，并重复上述过程一次，收集两次的洗脱溶液，混匀，过 0.22 μm 水相滤膜，供液相色谱测定。

　　注：待净化液中所含烟酰胺单核苷酸理论浓度低于 500 µg/mL，若大于此值则需用乙酸铵缓冲溶液(5.11)稀释后再上柱净化。

　　8.3 测定

　　8.3.1 液相色谱参考条件

　　液相色谱参考条件如下：

　　a) 色谱柱：经极性封端修饰的 C18 柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm，或相当者;

　　b) 流动相：A 为 10 mmol/L 甲酸铵溶液(含 0.1% 甲酸)(5.12)，B 为甲醇(5.1)，梯度洗脱，淋洗程序如表 1 所示;

　　c) 流速：0.3 mL/min;

　　d) 进样量：1.0 μL;

　　e) 柱温：40 ℃ ;

　　f) 测定波长：265 nm 。

　　3

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　　表 1 液相色谱的梯度洗脱程序

　　时间/min

　　流动相 A/%

　　流动相 B/%

　　0.0

　　100

　　0

　　2.0

　　100

　　0

　　4.0

　　50

　　50

　　6.0

　　50

　　50

　　6.1

　　100

　　0

　　8.0

　　100

　　0

　　8.3.2 定量测定

　　在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液进样，通过标准工作曲线外标法定量。试样溶液中目标物的响应值应在仪器测定的线性范围内。若检测结果超出线性范围，将上机提取液以 0.5% 甲酸水溶液(5.9)稀释浓度至线性范围内测定。在 8.3.1 的色谱条件下，烟酰胺单核苷酸的液相色谱图见附录 A中图 A.1。阳性样品按照 8.4 条件使用液相色谱- 质谱/质谱仪进行定性确证。

　　8.4 确证

　　8.4.1 液相色谱-质谱/质谱确证条件

　　8.4.1.1 液相色谱条件同 8.3.1。

　　8.4.1.2 质谱条件见附录 B 。

　　8.4.2 定性测定

　　按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品保留时间相差不超过±5%，定性离子对的相对丰度(是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示)与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。多反应监测(MRM)色谱图见附录 C 中图 C.1。

　　表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度/%

　　>50

　　>20~50

　　>10~20

　　≤10

　　最大允许偏差/%

　　±20

　　±25

　　±30

　　±50

　　9 结果计算和表述

　　试样中烟酰胺单核苷酸的含量以液相色谱法定量结果计算，单点校正按式(1)计算：

　　X n …………………………( 1 )

　　式中：

　　X ——试样中烟酰胺单核苷酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　A ——试样溶液对应的色谱峰面积响应值;

　　CS ——标准工作液中烟酰胺单核苷酸的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　4

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　　V ——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL);

　　AS ——烟酰胺单核苷酸标准溶液对应的色谱峰面积响应值;

　　m ——试样质量，单位为克(g);

　　n ——稀释倍数。

　　多点校准时，可用液相色谱数据处理软件或按式(2)计算：

　　X = × n …………………………( 2 )

　　Cx × V × 1 000

　　m × 1 000

　　式中：

　　X ——试样中烟酰胺单核苷酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　Cx ——从标准工作曲线得到的烟酰胺单核苷酸的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　V ——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL);

　　m ——试样质量，单位为克(g)。

　　n ——稀释倍数。

　　计算结果保留 3 位有效数字。

　　10 定量限、回收率和精密度

　　10.1 定量限

　　当取样量为 1.000 g、稀释体积为 100 mL 时，本方法中烟酰胺单核苷酸的定量限为 20.0 mg/kg。

　　10.2 回收率和精密度

　　本方法不同添加水平、回收率范围和精密度数据见附录 D 中表 D.1。

　　5

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　烟酰胺单核苷酸的液相色谱图

　　烟酰胺单核苷酸的液相色谱图见图 A.1。

　　6

　　0.060

　　强度/AU

　　0.040

　　0.020

　　0.000

　　

　　1.40

　　0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00时间/min

　　图 A.1 烟酰胺单核苷酸的液相色谱图(50.0 μg/mL)

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　　附 录 B (资料性)

　　参考质谱条件

　　参考质谱条件如下：

　　a) 离子源：电喷雾电离源(ESI);

　　b) 扫描方式：正离子模式;

　　c) 监测方式：多反应监测(MRM);

　　d) 气帘气压力(CUR)：30 psi(1 psi=6.89 kPa);

　　e) 雾化气压力(GS1)：55 psi;

　　f) 辅助气压力(GS2)：55 psi;

　　g ) 去溶剂温度(TEM)：550 ℃ ;

　　h) 电喷雾电压：5 500 V;

　　i) 其他条件见表 B.1。

　　表 B.1 参考质谱条件1)

　　化合物

　　监测离子对

　　去簇电压/V

　　驻留时间/ms

　　碰撞能量/eV

　　烟酰胺单核苷酸

　　335.1 / 123.1a

　　80

　　100

　　20

　　335.1 / 97.0

　　40

　　a 定量离子对。

　　1) 非商业性声明：表 B.1 所列参数是用SCIEX 6500+ 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。

　　7

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　　附 录 C

　　(资料性)

　　烟酰胺单核苷酸的多反应监测(MRM)色谱图

　　烟酰胺单核苷酸的多反应监测(MRM)色谱图见图 C.1。

　　8

　　强度/cps 106

　　0.9 0.675 0.45 0.225 0

　　

　　1.41

　　335.1>123.1

　　0 1 2 3 4 5

　　时间/min

　　a)

　　强度 /cps 106

　　0.15

　　0.1

　　0.05

　　0

　　

　　1.41

　　335.1>97.0

　　0 1 2 3 4 5

　　时间/min

　　b )

　　图 C.1 烟酰胺单核苷酸多反应监测(MRM)色谱图(0.1 μg/mL)

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　　附 录 D

　　(规范性)

　　添加水平、回收率范围及精密度

　　烟酰胺单核苷酸的添加水平、回收率范围及精密度见表 D.1。

　　表 D.1 烟酰胺单核苷酸的添加水平、回收率范围及精密度(n=6)

　　基质种类

　　添加水平/(mg/kg)

　　回收率范围/%

　　精密度/%

　　片剂

　　20

　　84.0~99.5

　　6.4

　　40

　　86.8~94.0

　　3.3

　　100

　　90.0~93.4

　　1.4

　　粉剂

　　20

　　96.5~106

　　3.2

　　40

　　95.0~102

　　2.5

　　100

　　95.4~99.3

　　1.4

　　糖果制品

　　20

　　85.5~95.5

　　4.7

　　40

　　89.5~95.5

　　2.4

　　100

　　90.8~93.6

　　1.2

　　胶囊剂

　　20

　　80.5~96.0

　　6.3

　　40

　　89.5~95.0

　　2.3

　　100

　　91.0~92.5

　　0.7

　　口服液

　　20

　　85.0~91.5

　　2.6

　　40

　　90.3~95.0

　　1.9

　　100

　　90.8~92.1

　　0.5

　　9