SN/T 5727.7-2025 出口林下三七检验规程 第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法

　　ICS 67.050 CCS X 04

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5727.7—2025

　　出口林下三七检验规程

　　第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、

　　阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定

　　液相色谱法

　　Rules for the inspection of panax notoginseng cultivated in forest for export —

　　Part 7: Determination of D(+)-glucose 、galactose 、arabinose 、alpha-D-

　　galacturonic acid of panax notoginseng cultivated in forest for export — Liquid

　　chromatography

　　2025-12-11发布 2026-07-01实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　前 言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件是SN/T 5727—2025《出口林下三七检验规程》的第7部分。SN/T 5727—2025 已经发布了以下部分：

　　——第 1部分：总则;

　　——第2部分：林下三七鉴别 近红外光谱法;

　　——第3部分：三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法;

　　——第4部分：稳定氮同位素比值(15N/14N)测定 同位素比质谱法;

　　——第5部分：5种皂苷的测定 高效液相色谱法;

　　——第6部分：三七素的测定 高效液相色谱法;

　　——第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法;

　　——第8部分：多元素的测定 电感耦合等离子体质谱法;

　　——第9部分：有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定 气相色谱-质谱/质谱法。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：昆明海关技术中心、中华人民共和国昆明海关、云南农业大学、西南林业大学。

　　本文件主要起草人：苏治宇、何霞红、陈宏仙、关鼎儒、朱书生、李克琼、杨科秀、王跃梅、徐红艳、苏丽媛、张银、张薇、朱有勇、杨玲春。

　　I

　　引 言

　　SN/T 5727—2025《出口林下三七检验规程》旨在建立适用于林下三七成分特征和质量安全检测方法，拟由9个部分构成(各部分之间关系如图 1所示)。

　　——第 1部分：总则;目的在于确定适用于出口林下三七的贮藏要求、抽样、检验、结果判定、不合格货物处置和存查样品的要求。

　　——第2部分：林下三七鉴别 近红外光谱法;目的在于确定适用于林下三七与农田三七的快速鉴别方法。

　　——第3部分：三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法;目的在于确定适用于药食同源植物林下三七中三七成分的定性检测方法。

　　——第4部分：稳定氮同位素比值( 15N/14N)测定 同位素比质谱法;目的在于确定适用于三七中的稳定氮同位素比值(15N/14N)的测定方法。

　　——第5部分：5种皂苷的测定 高效液相色谱法;目的在于确定适用于林下三七中的5种皂苷Rb1、Rb3、Re、Rg1 和 R1 的测定方法。

　　——第6部分：三七素的测定 高效液相色谱法;目的在于确定适用于林下三七中的三七素的测定方法。

　　——第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法;目的在于确定适用于林下三七中多糖组分 D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定方法。

　　——第8部分：多元素的测定 电感耦合等离子体质谱法;目的在于确定适用于林下三七中硼(B)、钠(Na)、镁(Mg)、铍(Be)、铝(Al)、钾(K)、钙(Ca)、钛(Ti)、钒(V)、铬(Cr)、锰(Mn)、铁(Fe)、钴(Co)、铯(Cs)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、砷(As)、硒(Se)、锶(Sr)、钼(Mo)、镉(Cd)、锡(Sn)、锑(Sb)、钍(Th)、钡(Ba)、汞(Hg)、铊(TI)、铀(U)、铅(Pb)的测定方法。

　　——第9部分：有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定 气相色谱 -质谱/质谱法;目的在于确定适用于三七中 115种有机磷、有机氯及拟除虫菊酯农药及相关化学品的定性鉴别及定量测定方法。

　　II

　　林下三七鉴别 近红外光谱法

　　鉴别试验

　　三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法

　　稳定氮同位素比值

　　(15N/14N)测定 同位素比质谱法

　　5种皂苷的测定 高效液相色谱法

　　总则

　　成分测定

　　三七素的测定 高效液相色谱法

　　D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、 D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法

　　多元素的测定 电感耦合等离子体质谱法

　　安全检测

　　有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定 气相色谱-质谱/质谱法

　　图 1 SN/T 5727—2025各部分之间关系

　　III

　　出口林下三七检验规程

　　第7部分：D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、

　　D-半乳糖醛酸的测定 液相色谱法

　　1 范围

　　本文件规定了林下三七中多糖组分D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的液相色谱分析法。

　　本文件适用于林下三七中多糖组分D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 9008 液相色谱法术语 柱色谱法和平面色谱法

　　SN/T 5727.1 出口林下三七检验规程 第 1部分：总则

　　3 术语和定义

　　SN/T 5727.1和GB/T 9008界定的术语和定义适用于本文件。

　　4 原理

　　以水提取、醇沉淀法制得林下三七粗多糖，采用柱前衍生化-HPLC法测定多糖组分D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的含量。

　　5 试剂和材料

　　除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

　　5.1 试剂

　　5.1.1 甲醇(CH3OH)。

　　5.1.2 无水乙醇(C2H5OH)。

　　5.1.3 丙酮。

　　5.1.4 乙醚。

　　5.1.5 三氟乙酸(TFA)。

　　5.1.6 乙腈(CH2CN)：色谱纯。

　　5.1.7 1-苯基-3- 甲基-5-吡唑啉酮(PMP)。

　　1

　　5.1.8 盐酸(HCl)：浓度≥ 36%。

　　5.1.9 氢氧化钠(NaOH)。

　　5.1.10 磷酸二氢钠(NaH2PO4 )。

　　5.1.11 磷酸氢二钠(Na2HPO4 )。

　　5.2 试剂配制

　　5.2.1 三氟乙酸溶液(2 mol/L)：准确量取 11.402 gTFA到30 mL水中，定容到50 mL。

　　5.2.2 PMP 甲醇溶液(0.5 mol/L)：准确称取4.355 g PMP，甲醇溶解并定容到50 mL。

　　5.2.3 氢氧化钠溶液(0.3 mol/L)：准确称取 1.2 g氢氧化钠，用水溶解并定容到 100 mL。

　　5.2.4 盐酸溶液(0.3 mol/L)：准确量取2.7 mL盐酸，缓慢注入 100 mL水中。

　　5.2.5 磷酸缓冲盐(0.05mol/L)：准确称取6g磷酸二氢钠和7.1g磷酸氢二钠，用水溶解并定容到1000mL。

　　5.3 标准品

　　5.3.1 D-无水葡萄糖(C6H12O6 ，CAS号：50-99-7)：纯度≥ 95%。

　　5.3.2 半乳糖(C6H12O6 ，CAS号：59-23-4)：纯度≥ 95%。

　　5.3.3 阿拉伯糖(C5H10O5 ，CAS号：5328-37-0)：纯度≥ 95%。

　　5.3.4 D-半乳糖醛酸(C6H10O7·H2O，CAS号：910510-62-2)：纯度≥ 95%。

　　5.4 混合标准溶液制备

　　5.4.1 混合标准溶液贮备液(D-半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖浓度为5 000 μg/mL，D-无水葡萄糖浓度为50 000 μg/mL)：分别精密称取D-半乳糖醛酸对照品54.65 mg，半乳糖、阿拉伯糖对照品50 mg，D-无水葡萄糖对照品500 mg，置于 10 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度。4 ℃冰箱中保存，有效期 1个月。

　　5.4.2 混合标准溶液标准曲线系列工作溶液：分别精密量取混合标准溶液中间液(5.4.1)0.04 mL、 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、1 mL、2 mL，置于 10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，该标准系列中半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸浓度为20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、500 μg/mL、

　　1 000 μg/mL;D-无水葡萄糖浓度为200 μg/mL、500 μg/mL、1 000 μg/mL、2 000 μg/mL、5 000 μg/mL、 10 000 μg/mL。

　　6 仪器和设备

　　6.1 高效液相色谱(HPLC)：带紫外-可见光检测器或光电二极管阵列检测器。

　　6.2 4号筛，目数：65 目。

　　6.3 分析天平：感量为0.01 mg。

　　6.4 索氏提取装置。

　　6.5 恒温水浴振荡器。

　　6.6 涡旋混合仪。

　　6.7 旋转蒸发仪。

　　6.8 减压干燥箱。

　　6.9 离心机：转速≥ 8 000 r/min。

　　2

　　7 分析步骤

　　7.1 三七粗多糖提取

　　称取三七试样5 g，粉碎过筛(4号筛)，加入 200 mL无水乙醇，索氏提取至浸出液呈无色透明状。弃去回流液，三七试样自然挥干至无醇味。在三七粉末中加入 150 mL水，水浴锅中90 ℃回流浸提4 h，重复2次，收集提取液，蒸发浓缩至20 mL。以5倍体积的80% 乙醇溶液沉淀粗多糖，4℃条件过夜。滤出沉淀，依次用30 mL无水乙醇、丙酮、乙醚充分洗涤沉淀3次，至滤出液呈无色透明状。溶剂挥干后在减压干燥箱中50 ℃干燥过夜，得到三七粗多糖。

　　7.2 试样溶液制备

　　精密称取三七粗多糖样品20 mg，以 6 mL三氟乙酸(TFA)溶液(2 mol/L)进行水解，110 ℃条件下水解4 h。冷却至室温后，加入 30 mL 甲醇充分混匀，减压浓缩至干，重复多次以确保除尽残留的TFA(5.1.5)。加水定容至5 mL。

　　7.3 衍生化

　　精密移取三七粗多糖水解溶液0.1 mL，依次加入0.2 mL PMP(5.1.7)甲醇溶液(0.5 mol/L)和 0.2 mL NaOH溶液(0.3 mol/L)，混匀后于70 ℃水浴加热2 h。冷却至室温后，加入0.2 mL盐酸溶液(0.3 mol/L)中和。溶液中加入5 mL三氯甲烷进行萃取，取上层水相，萃取2次，合并水相后定容至 2 mL，过0.45 μm微孔滤膜，上机检测。

　　8 测定

　　8.1 液相色谱参考条件

　　8.1.1 色谱柱：C18 柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，或相当者。

　　8.1.2 流动相：A为0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.8);B 为乙腈;A∶B为82∶18。

　　8.1.3 流速：1 mL/min。

　　8.1.4 进样量：10 μL。

　　8.1.5 柱温：30 ℃。

　　8.1.6 紫外检测波长：245 nm。

　　8.2 标准曲线的制作

　　精密移取标准曲线系列工作溶液各0.1 mL，按照7.3衍生化，过0.45 μm微孔滤膜后分别注入高效液相色谱仪中(液相色谱图见附录A)，测定相应的峰面积，以峰面积为纵坐标，以标准测定液浓度为横坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程。

　　8.3 空白试验

　　除不加试样外，按上述测定步骤进行。

　　8.4 样品测定

　　试样经高效液相色谱仪分析，测得相应峰面积，采用外标法根据上述标准曲线计算待测液中D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的质量浓度，平行测定次数不少于2次。

　　3

　　9 分析结果的表述

　　按公式(1)计算试样中待测多糖组分含量。

　　c × V 1

　　m ×1 000 f

　　X= × ……………………………(1)

　　式中：

　　X ——三七试样中多糖组分D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的含量，单位为克每千克(g/kg);

　　c ——根据标准曲线计算得到的粗多糖分取试样(20 mg)中D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸的浓度，单位为微克每毫升( μg/mL);

　　V ——粗多糖分取试样(20mg)的水解后最终定容体积，单位为毫升(mL);

　　m ——三七试样的质量，单位为克(g);

　　f ——粗多糖分取试样(20mg)与粗多糖总提取量(粗多糖提取率≥ 20%)的占比。

　　计算结果保留三位有效数字。

　　10 性能指标

　　10.1 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的 10%。

　　10.2 其他

　　以粗多糖分取试样20 mg计算，水解后定容5 mL 时，粗多糖组分D-半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的检出限为5.00 g/kg，定量限为 12.5 g/kg。

　　4

　　附 录 A

　　(资料性)

　　D-半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖标准溶液的液相色谱图

　　D-半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖标准溶液的液相色谱图见图A.1。

　　标引符号说明：

　　GalA ——D-半乳糖醛酸; Glucose——D-无水葡萄糖;

　　Galactose ——半乳糖;

　　Arabinose ——阿拉伯糖。

　　图A.1 D-半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖标准溶液的液相色谱图(D-半乳糖

　　醛酸、半乳糖及阿拉伯糖浓度为200 μg/mL， D-无水葡萄糖浓度为2 000 μg/mL)

　　5