SN/T 2579-2025 出口蜂产品中硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法
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资料介绍
ICS 67. 050 CCS C 53
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 2579—2025代替 SN/T 2579—2010
出口蜂产品中硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of nitroimidazoles residues in bee products for export—
LC-MS/MS method
2025-12-11发布 2026-07-01 实施
中华人民共和国海关总署 发 布
SN/T 2579—2025
前 言
本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件代替 SN/T 2579—2010《进出口蜂王浆中 10 种硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱 -质谱/质谱法》，除结构调整和编辑性改动以外，主要技术变化如下：
——更改了标准名称;
——适用范围增加了蜂蜜和蜂花粉，检测药物增加了替硝唑、奥硝唑、塞克硝唑和特硝唑(见第 1 章， 2010 年版的第 1 章)。
请注意文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国杭州海关、中华人民共和国南京海关、中华人民共和国秦皇岛海关技术中心、中华人民共和国汕头海关。
本文件主要起草人：侯建波、谢文、史颖珠、汪鹏、丁涛、雷美康、崔宗岩、钱艳、毛壬熠、季美泉、陆奕娜。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：
——2010 年首次发布为 SN/T 2579—2010;
——本次为第一次修订。
Ⅰ
SN/T 2579—2025
出口蜂产品中硝基咪唑类药物残留量的
测定 液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件描述了蜂蜜、蜂王浆和蜂花粉中甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、替硝唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、塞克硝唑、特硝唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于蜂蜜、蜂王浆和蜂花粉中甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、替硝唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、塞克硝唑、特硝唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑残留量的定量测定和确证。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
试样中硝基咪唑类药物经乙酸乙酯提取，提取液经固相萃取柱净化后，采用液相色谱-质谱/质谱法测定，甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、替硝唑、异丙硝唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑采用内标法定量，2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、塞克硝唑和特硝唑采用外标法定量。
5 试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇(CH3OH)：色谱纯。
5.1.2 甲酸(HCOOH)：色谱纯。
5.1.3 乙酸乙酯(CH3COOCH2CH3)：色谱纯。
5.1.4 氯化钠(NaCl)。
5.1.5 氢氧化钠(NaOH)。
5.1.6 二水合磷酸二氢钠(NaH2PO4 ·2H2O)。
1
SN/T 2579—2025
5.2 试剂配制
5.2.1 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液：称取 4 g 氢氧化钠(5.1.5)，用水溶解稀释并定容至 1 L。
5.2.2 磷酸盐缓冲溶液：溶解 17.9 g 二水合磷酸二氢钠(5.1.6)于 950 mL 水中，用 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液(5.2.1)调节 pH 到 8.0，用水定容至 1 L。
5.2.3 0.1% 甲酸水溶液：移取 1 mL 甲酸(5.1.2)，用水稀释并定容至 1 L。
5.2.4 甲 醇-0.1% 甲 酸 水 溶 液(15+85，体 积 比)：移 取 15 mL 甲 醇(5.1.1)和 85 mL 0.1% 甲 酸 水 溶 液(5.2.3)，混匀。
5.2.5 10% 甲醇溶液：移取 10 mL 甲醇(5.1.1)，用水稀释并定容至 100 mL。
5.3 标准物质
5.3.1 硝基咪唑类药物标准物质：甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、替硝唑、异丙硝唑、氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、塞克硝唑、特硝唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑，化合物的中英文名称，CAS 号，分子式和相对分子质量见附录 A 表 A.1，纯度大于或等于 98.5%。或具有有证标准物质证书的标准物质。
5.3.2 硝 基 咪 唑 类 药 物 同 位 素 内 标 标 准 物 质 ：甲 硝 唑 -13C2，15N2 、二 甲 硝 咪 唑 -D3 、洛 硝 哒 唑 -D3 、替 硝唑 -D5、异丙硝唑-D3、羟基甲硝唑-D2、羟基二甲硝咪唑-D3 和羟基异丙硝唑-D3，化合物的中英文名称， CAS 号，分子式和相对分子质量见附录 A 表 A.1，纯度大于或等于 98%。或具有有证标准物质证书的标准物质。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 标准储备液(1.0 mg/mL)：准确称取适量经折算的各硝基咪唑类药物标准物质(5.3.1，精确至 0.1 mg)，分别用甲醇溶解，配制成质量浓度为 1.0 mg/mL 标准储备液，0 ℃~4 ℃下避光保存，有效期 6 个月。
5.4.2 中间混合标准溶液(10 μg/mL)：分别吸取 100 μL 各硝基咪唑类药物标准储备液(5.4.1)，移入 10 mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制质量浓度为 10 μg/mL 混合标准溶液。 0 ℃~4 ℃避光保存，有效期 3 个月。
5.4.3 中间混合工作液 1(100 ng/mL)：吸取 100 μL 的中间混合标准溶液(5.4.2)，移入 10 mL 容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制质量浓度为 100 ng/mL 混合标准溶液，使用前配制。
5.4.4 中间混合工作液 2(10 ng/mL)：吸取 1 000 μL 的中间混合工作液 1(5.4.3)，移入 10 mL 容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制质量浓度为 10 ng/mL 混合标准溶液，使用前配制。
5.4.5 同位素内标储备液：准确称取适量经折算的各硝基咪唑类药物同位素内标标准物质(5.3.2，精确至 0.1 mg)，分别用甲醇溶解，配制成质量浓度为 1.0 mg/mL 同位素内标储备液。
5.4.6 同位素内标中间混合标准溶液(10 μg/mL)：分别吸取 100 μL 各硝基咪唑类药物同位素内标储备液(5.4.5)，移入 10 mL 容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制质量浓度为 10 μg/mL 同位素内标中间混合标准溶液。
5.4.7 同位素内标混合工作液(10 ng/mL)：分别吸取 100 μL 的同位素内标中间混合标准溶液(5.4.6)，移入 100 mL 容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制质量浓度为 10 ng/mL 同位素内标混合标准溶液，使用前配制。
5.4.8 空白基质溶液：将不含各硝基咪唑类药物的空白样品，按照 8.1 和 8.2 前处理后得到的溶液。
5.4.9 标准工作溶液：根据需要用空白基质溶液(5.4.8)将中间混合工作液 1 和中间混合工作液 2(5.4.3， 5.4.4)稀释成为 0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL 和 10 ng/mL(甲硝唑、替硝唑、塞克硝唑、特硝唑)和 0 ng/mL、0.4 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、10 ng/mL 和 20 ng/mL(二甲硝咪唑、
2
SN/T 2579—2025
洛硝哒唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑)的混合标准工作溶液，同位素内标浓度均为 1.0 ng/mL，使用前配制。
5.5 材料
5.5.1 HLB(亲水-疏水平衡)固相萃取小柱(500 mg，6 mL)或性能相当者，使用前依次用 5 mL 甲醇和 5 mL水活化。
5.5.2 C18 固相萃取小柱(500 mg，3 mL)或性能相当者，使用前用 3 mL 甲醇活化。
5.5.3 微孔滤膜：0.22 μm，有机相。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源(ESI)。
6.2 分析天平：感量为 0.01 g、0.001 g 和 0.000 1 g。
6.3 粉碎机。
6.4 固相萃取装置。
6.5 高速离心机：最大转速不低于 10 000 r/min。
6.6 pH 计。
6.7 涡旋振荡器。
6.8 旋转蒸发仪。
6.9 具塞离心管：15 mL 和 50 mL。
7 试样制备与保存
7.1 蜂蜜
取 500 g 代表性蜂蜜样品，未结晶的样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过 60 ℃的水浴中温热，等样品全部熔化后搅匀，迅速冷却至室温。在熔化时必须注意防止水分挥发。制备好的试样均分成两份，分别装入洁净样品瓶内，密封，并标明标记。 一份作为试验样，另一份在室温下保存。
7.2 蜂王浆
取代表性样品约 500 g，将其搅拌均匀，将试样均分成两份，分别装入洁净样品瓶内，密封，并标明标记。 一份作为试验样，另一份在-18 ℃下保存。
7.3 蜂花粉
取代表性样品约 100 g，用粉碎机全部粉碎后充分混匀，将试样均分成两份，分别装入洁净样品瓶内，密封，并标明标记。 一份作为试验样，另一份在室温下保存。
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SN/T 2579—2025
8 分析步骤
8.1 提取
8.1.1 蜂蜜
称取 5 g 试样(精确至 0.01 g)置于 50 mL 具塞离心管(6.9)中，加入 100 μL 同位素内标混合工作液(10 ng/mL，5.4.7)，加入 10 mL 磷酸盐缓冲溶液(5.2.2)稀释，混匀，加入 5 mL 甲醇，2 g 氯化钠和 20 mL乙酸乙酯，于涡旋振荡器上混匀 1 min，以 4 700 r/min 离心 3 min，上层乙酸乙酯转移至另一 50 mL 具塞离心管中，下层水相再加入 20 mL 乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液，在 40 ℃下减压浓缩至近干，加入 5 mL 水溶解残渣，待净化。
8.1.2 蜂王浆
称取 2 g 试样(精确至 0.01 g)置于 50 mL 具塞离心管(6.9)中，加入 200 μL 同位素内标混合工作液(10 ng/mL，5.4.7)，加入 10 mL 水，混匀，静置 5 min，加入甲醇至 20 mL，于涡旋振荡器上混匀 1 min，以8 000 r/min 离心 5 min，移取 10 mL 上清液，加入 10 mL 磷酸盐缓冲溶液(5.2.2)稀释，混匀，加 2 g 氯化钠和 20 mL 乙酸乙酯，于涡旋振荡器上混匀 1 min，以 4 700 r/min 离心 3 min，上层乙酸乙酯转移至另一50 mL 具塞离心管中，下层水相再加入 20 mL 乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液，在 40 ℃下减压浓缩至近干，加入 5 mL 水溶解残渣，待净化。
8.1.3 蜂花粉
称取 1 g 试样(精确至 0.001 g)置于 50 mL 具塞离心管(6.9)中，加 2 mL 水浸润 1 h，加入 200 μL 同位素内标混合工作液(10 ng/mL，5.4.7)，加入 10 mL 水，混匀，静置 5 min，加入甲醇至 20 mL，于涡旋振荡器上混匀 1 min，以 8 000 r/min 离心 5 min，移取 10 mL 上清液，加入 10 mL 磷酸盐缓冲溶液(5.2.2)稀释，混匀，加 2 g 氯化钠和 20 mL 乙酸乙酯，于涡旋振荡器上混匀 1 min，以 4 700 r/min 离心 3 min，上层乙酸乙酯转移至另 一 50 mL 具塞离心管中，下层水相再加入 20 mL 乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液，在 40 ℃下减压浓缩至近干，加入 5 mL 水溶解残渣，待净化。
8.2 净化
8.2.1 蜂蜜
提取液转移至 HLB 固相萃取小柱(5.5.1)中，控制流速 1 mL/min~2 mL/min，弃去流出液，加 5 mL水淋洗，5 mL 10% 甲醇溶液(5.2.5)淋洗，抽干，6 mL 甲醇洗脱，收集洗脱液，在 40 ℃以下水浴中减压浓缩至近干，用 1.0 mL 甲醇-0.1% 甲酸水溶液(15+85，体积比)(5.2.4)定容，混匀，溶液过 0.22 μm 微孔滤膜(5.5.3)，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
8.2.2 蜂王浆和蜂花粉
提取液转移至 HLB 固相萃取小柱(5.5.1)中，控制流速 1 mL/min~2 mL/min，弃去流出液，加 5 mL水淋洗，5 mL 10% 甲醇溶液(5.2.5)淋洗，抽干，6 mL 甲醇洗脱，收集全部洗脱液并转移至 C18 固相萃取小柱(5.5.2)，再加入 6 mL 甲醇洗脱，控制流速 1 mL/min~2 mL/min，收集全部洗脱液，在 40 ℃ 以下水浴 中 减 压 浓 缩 至 近 干 ，用 1.0 mL 甲 醇-0.1% 甲 酸 水 溶 液(15+85，体 积 比)(5.2.4)定 容 ，混 匀 ，溶 液 过0.22 μm 微孔滤膜(5.5.3)，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
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8.3 测定
8.3.1 液相色谱参考条件
8.3.1.1 色谱柱：C8 色谱柱，150 mm×4.6 mm(内径)，5 μm，或性能相当者。
8.3.1.2 柱温：30 ℃ 。
8.3.1.3 进样量：20.0 µL。
8.3.1.4 流速：0.6 mL/min。
8.3.1.5 流动相：0.1% 甲酸水溶液和甲醇梯度洗脱，见表 1。
表 1 液相色谱梯度洗脱程序
时间/min
0.1% 甲酸水溶液/体积比
甲醇/体积比
0.00
85
15
5.00
85
15
15.00
5
95
15.50
85
15
19.00
85
15
8.3.2 质谱参考条件
8.3.2.1 离子源：电喷雾离子源(ESI)。
8.3.2.2 扫描方式：正离子模式。
8.3.2.3 检测方式：多反应监测模式(MRM)。
8.3.2.4 雾化气、干燥气、鞘气、碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节毛细管电压、离子源温度、干燥气流量、鞘气温度和鞘气流量等应优化至最佳灵敏度，其他质谱参数见附录 B。
8.4 标准曲线的绘制
取空白样品，按照 8.1 和 8.2 前处理获得空白基质溶液。单点或多点校正定量，多点校正时配制成系列标准工作溶液(5.4.9)，按浓度由低到高进样检测，外标法以定量离子峰面积-浓度作图，内标法以定量离子峰面积与内标物峰面积比值-浓度作图，得到标准工作曲线。
8.5 定性测定
按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致(变化范围在±2.5% 之内)，样品中目标化合物的定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液一致，相对丰度偏差不超过表 2 的规定，则可判断样品中存在待测化合物。
表 2 测定相对离子丰度最大容许偏差
相对离子丰度(基峰)/%
>50
>20~50
>10~20
≤10
最大容许偏差/%
±20
±25
±30
±50
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8.6 定量测定
待测样液中各药物的响应值应在标准工作曲线的线性范围内。如果待测样液中化合物的响应值超出标准工作曲线的线性范围，应稀释后再进样分析(内标法化合物需在提取时根据化合物浓度相应增加内标工作液的添加量，使待测溶液稀释后化合物的响应值在标准工作曲线的线性范围内，对应内标浓度与标准工作液一致)。在上述色谱条件下，各药物标准溶液的总离子流图和提取离子流图见附录 C，参考保留时间见附录 B。
9 空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
10 结果计算与表述
试样中待测化合物的含量 Xi，以质量分数微克每千克(μg/kg)表示，单点校正内标法按式(1)或外标法按式(2)计算：
Xi
式中：
A ——试样溶液中待测化合物的峰面积;
A'iS ——标准溶液中待测化合物对应内标的峰面积;
CS ——标准溶液中待测化合物标准物质的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);
CiS ——试样溶液中待测化合物对应内标的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V ——试样最终定容体积，单位为毫升(mL);
AiS ——试样溶液中待测化合物对应内标的峰面积;
AS ——标准溶液中待测化合物的峰面积;
C'iS ——标准溶液中待测化合物对应内标的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);
m ——最终试样所代表质量的数值，单位为克(g);
1 000 ——单位转换系数。
Xi
式中：
CS ——标准溶液中待测化合物的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);
A ——试样溶液中待测化合物的峰面积;
V ——试样最终定容体积，单位为毫升(mL);
AS ——标准溶液中待测化合物的峰面积;
m ——最终试样所代表质量的数值，单位为克(g);
1 000 ——单位转换系数。
多点校正按式(3)计算：
Xi
式中：
Ci ——标准曲线得到的试样中待测化合物的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);
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V ——试样最终定容体积，单位为毫升(mL);
m ——最终试样所代表质量的数值，单位为克(g);
1 000 ——单位转换系数。
11 检出限、定量限与回收率
11.1 检出限和定量限
本方法蜂蜜中甲硝唑、替硝唑、塞克硝唑、特硝唑的检出限 0.05 μg/kg，定量限 0.1 μg/kg;二甲硝咪唑、洛硝哒唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑的检出限 0.1 μg/kg，定量限 0.2 μg/kg。
蜂王浆中甲硝唑、替硝唑、塞克硝唑、特硝唑的检出限 0.2 μg/kg，定量限 0.5 μg/kg;二甲硝咪唑、洛硝哒唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑的检出限 0.4 μg/kg，定量限 1.0 μg/kg。
蜂花粉中甲硝唑、替硝唑、塞克硝唑、特硝唑的检出限 0.4 μg/kg，定量限 1.0 μg/kg，二甲硝咪唑、洛硝哒唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑检出限 0.8 μg/kg，定量限 2.0 μg/kg。
11.2 回收率
蜂蜜、蜂王浆、蜂花粉中甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、替硝唑、异丙硝唑、2- 甲硝咪唑、奥硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、塞克硝唑、特硝唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑在不同添加水平下的回收率数据见附录 D 。
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附 录 A
(资料性)
硝基咪唑类药物的标准物质信息
硝基咪唑类药物的标准物质信息见表 A.1。
表 A.1 硝基咪唑类药物的标准物质信息
序号
中文名称
英文名称
CAS 号
分子式
相对分
子质量
1
甲硝唑
Metronidazole
443-48- 1
C6H9N3O3
171.15
2
二甲硝咪唑
Dimetridazole
551-92-8
C5H7N3O2
141.10
3
洛硝哒唑
Ronidazole
7681-76-7
C6H8N4O4
200.15
4
替硝唑
Tinidazole
19387-91-8
C8H13N3O4S
247.27
5
异丙硝唑
Ipronidazole
14885-29- 1
C7H11N3O2
169.18
6
2- 甲硝咪唑
2-Methyl- 5-nitroimidazole
88054-22-2
C4H5N3O2
127.10
7
奥硝唑
Ornidazole
16773-42- 5
C7H10ClN3O3
219.63
8
苯硝咪唑
5-Nitrobenzimidazole
94- 52-0
C7H5N3O2
163.14
9
氯甲硝咪唑
5-Chloro- 1-methyl-4-nitroimidazole
4897-25-0
C4H4ClN3O2
161.55
10
塞克硝唑
Secnidazole
3366-95-8
C7H11N3O3
194.19
11
特硝唑盐酸盐
Ternidazole Hydrochloride
1077-93-6
C7H12ClN3O3
221.64
12
羟基甲硝唑
Metronidazole-OH[1-(2-Hydroxyethyl)-2- hydroxy-methyl- 5-nitroimidazol]
4812-40-2
C6H9N3O4
187.15
13
羟基二甲硝咪唑
2-Hydroxymethyl- 1-methyl- 5-nitro- 1H- imidazole(HMMNI)
936-05-0
C5H7N3O3
157.13
14
羟基异丙硝唑
Ipronidazole-OH
35175- 14- 5
C7H11N3O3
185.18
15
甲硝唑-13C2，15N2
Metronidazole-13C2，15N2
1173020-03- 5
C413C2H9N15N2O3
175.12
16
二甲硝咪唑-D3
Dimetridazole-D3
64678-69-9
C5H4D3N3O2
144.15
17
洛硝哒唑-D3
Ronidazole-D3
1015855-87-4
C6H5D3N4O4
203.17
18
替硝唑-D5
Tinidazole-D5
1216767-04-2
C8H8D5N3O4S
252.30
19
异丙硝唑-D3
Ipronidazole-D3
1015855-83-0
C7 H8D3N3O2
172.20
20
羟基甲硝唑-D2
Metronidazole-OH-D2
2196180- 19-3
C6H7D2N3O4
189.17
21
羟基二甲硝咪唑-D3
HMMNI-D3
1015855-78-3
C5H4D3N3O3
160.15
22
羟基异丙硝唑-D3
Ipronidazole-OH-D3
1156508-86-9
C7H8D3N3O3
188.20
8
SN/T 2579—2025
附 录 B
(资料性)
液相色谱-质谱/质谱仪参考条件1)
液相色谱-质谱/质谱仪参考条件：
a) 毛细管电压：3 000 V;
b) 离子源温度：150 ℃ ;
c) 干燥气流量：14 L/min;
d) 鞘气温度：350 ℃ ;
e) 鞘气流量：10 L/min;
f) 定量离子对、定性离子对的碰撞电压见表 B.1。
表 B.1 硝基咪唑类药物的定量离子对、定性离子对、碰撞电压和保留时间
序号
化合物
离子对(m/≈)
碰撞电压/V
内标化合物名称
保留时间/min
1
甲硝唑
172.3/128.1a
172.3/82.1
12
26
甲硝唑-13C2，15N2
6.77
2
二甲硝咪唑
142.2/96.1 a
142.2/81.1
14
30
二甲硝咪唑-D3
8.28
3
洛硝哒唑
201.0/140.0a
201.0/55.0
5
15
洛硝哒唑-D3
7.35
4
替硝唑
248.1/121.1 a
248.1/82.1
17
32
替硝唑-D5
9.91
5
异丙硝唑
170.2/108.9 a
170.2/124
26
16
异丙硝唑-D3
13.35
6
2- 甲硝咪唑
128.1/82.1 a
128.1/42.1
19
36
—
5.22
7
奥硝唑
220.1/128.1 a
220.1/82.1
16
35
—
12.08
8
苯硝咪唑
164.2/118.1 a
164.2/91.1
22
40
—
10.98
9
氯甲硝咪唑
162.1/116.1 a
162.1/145.1
18
16
—
10.22
10
塞克硝唑
186.1/128.1 a
186.1/82.1
14
30
—
10.76
11
特硝唑
186.1/128.1 a
186.1/82.1
15
32
—
9.92
1) 非商业性声明：附录 B 所列参数是在 Agilent 6495 LC-MS/MS 质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器 。
9
SN/T 2579—2025
表 B.1 硝基咪唑类药物的定量离子对、定性离子对、碰撞电压和保留时间(续)
序号
化合物
离子对(m/≈)
碰撞电压/V
内标化合物名称
保留时间/min
12
羟基甲硝唑
188.2/123.2 a
188.2/126.2
10
15
羟基甲硝唑-D2
5.08
13
羟基二甲硝咪唑
158.2/140.0 a
158.2/55.0
10
18
羟基二甲硝咪唑-D3
6.38
14
羟基异丙硝唑
186.3/168.1 a
186.3/122.1
10
20
羟基异丙硝唑-D3
12.38
15
甲硝唑-13C2，15N2
176.1/131.9
10
—
6.74
16
二甲硝咪唑-D3
145.0/99.0
16
—
8.13
17
洛硝哒唑-D3
204.2/143.1
5
—
7.27
18
替硝唑-D5
253.1/126.1
17
—
9.86
19
异丙硝唑-D3
173.1/127.0
18
—
13.32
20
羟基甲硝唑-D2
190.1/128.1
15
—
5.06
21
羟基二甲硝咪唑-D3
161.1/58.0
20
—
6.32
22
羟基异丙硝唑-D3
189.1/171.1
12
—
12.36
a 定量离子对。
10
SN/T 2579—2025
附 录 C
(资料性)
硝基咪唑类药物标准物质总离子流图
C.1 硝基咪唑类药物混合标准溶液总离子流图见图 C.1。
11
× 106
6
响应值
5
4
3
2
1
0
6,12,20
13,21
1,15 2,16
3,17
4,11,18
9
5,19
14,22
10
8 7
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
标引序号说明：
1——甲硝唑(0.5 ng/mL);
2——二甲硝咪唑(1.0 ng/mL);
3——洛硝哒唑(1.0 ng/mL);
4——替硝唑(0.5 ng/mL);
5——异丙硝唑(1.0 ng/mL);
6——2- 甲硝咪唑(1.0 ng/mL);
7——奥硝唑(1.0 ng/mL);
8——苯硝咪唑(1.0 ng/mL);
9——氯甲硝咪唑(1.0 ng/mL);
10——塞克硝唑(0.5 ng/mL);
11——特硝唑(0.5 ng/mL);
12——羟基甲硝唑(1.0 ng/mL);
13——羟基二甲硝咪唑(1.0 ng/mL);
14——羟基异丙硝唑(1.0 ng/mL);
15——甲硝唑-13C2，15N2(1.0 ng/mL);
16——二甲硝咪唑-D3(1.0 ng/mL);
17——洛硝哒唑-D3(1.0 ng/mL);
18——替硝唑-D5(1.0 ng/mL);
19——异丙硝唑-D3(1.0 ng/mL);
20——羟基甲硝唑-D2(1.0 ng/mL);
21——羟基二甲硝咪唑-D3(1.0 ng/mL);
22——羟基异丙硝唑-D3(1.0 ng/mL)。
图 C.1 硝基咪唑类药物混合标准溶液的总离子流图
C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图见图 C.2。
SN/T 2579—2025
12
× 105
3
2.5
响应值 响应值 响应值 响应值
2
1.5
1
0.5
0
(172.3/128.1)
6.77
13.31
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
4
3
2
1
0
a) 甲硝唑特征离子对提取离子流图 (172.3/128.1, 6.77 min)
(142.2/96.1)
8.28
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 104
3
2
1
0
b ) 二甲硝咪唑特征离子对提取离子流图 (142.2/96.1, 8.28 min)
(201.0/140.0)
7.35
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
c) 洛硝哒唑特征离子对提取离子流图 (201.0/140.0, 7.35 min)
× 105
1.5
1.25 1
0.75 0.5
0.25 0
(248.1/121.1)
9.91
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
d ) 替硝唑特征离子对提取离子流图 (248.1/121.1, 9.91 min)
图 C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图
SN/T 2579—2025
13
× 106
响应值 响应值 响应值
0.8
0.6
0.4
0.2
0
(170.2/108.9)
13.35
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
4
3
2
1
0
e) 异丙硝唑特征离子对提取离子流图 (170.2/108.9, 13.35 min)
(128.1/82.1)
5.22
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
2.5
2
1.5
1
0.5
0
f ) 2-甲硝咪唑特征离子对提取离子流图 (128.1/82.1, 5.22 min)
(220.1/128.1)
12.08
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
响应值
4
3
2
1
0
e ) 奥硝唑特征离子对提取离子流图 (220.1/128.1, 12.08 min)
(164.2/118.1)
- 10.98
10.23
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14时间/min
h ) 苯硝咪唑特征离子对提取离子流图 (164.2/118.1, 10.98 min)图 C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图(续)
SN/T 2579—2025
14
× 104
6
响应值 响应值
5
4
3
2
1
0
(162.1/116.1)
10.22
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
5
4
3
2
1
0
i ) 氯甲硝咪唑特征离子对提取离子流图 (162.1/116.1, 10.22 min)
(186.1/128.1)
10.76
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
,) 塞克硝唑特征离子对提取离子流图 (186.1/128.1, 10.76 min)
× 105
6
响应值 响应值
5
4
3
2
1
0
× 104
8
6
4
2
0
(186.1/128.1)
9.92
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
k ) 特硝唑特征离子对提取离子流图 (186.1/128.1, 9.92 min)
(188.2/123.2)
5.08
12.37
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
') 羟基甲硝唑特征离子对提取离子流图 (188.2/123.2, 5.08 min)
图 C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图(续)
SN/T 2579—2025
响应值
× 105
1.5
1
0.5
0
(158.2/140.0)
6.38
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
m ) 羟基二甲硝咪唑特征离子对提取离子流图 (158.2/140.0, 6.38 min)
15
× 105
6
响应值 响应值 响应值
5
4
3
2
1
× 105
4
3
2
1
0
0
(186.3/168.1)
- 12.38
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14时间/min
n ) 羟基异丙硝唑特征离子对提取离子流图 (186.3/168.1, 12.38 min)
(176.1/131.9)
6.74
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 106
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
o) 甲硝唑-13c2 , 15N2特征离子对提取离子流图 (176.1/131.9, 6.74 min)
- (145.0/99.0)
8.13
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
p ) 二甲硝咪唑-D3特征离子对提取离子流图 (145.0/99.0, 8.13 min)
图 C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图(续)
SN/T 2579—2025
响应值 响应值 响应值 响应值
× 104
8
6
4
2
0
(204.2/143.1)
7.27
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
4
3
2
1
0
q ) 洛硝哒唑D3特征离子对提取离子流图 (204.2/143.1, 7.27 min)
(253.1/126.1)
9.86
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 106
4
3
2
1
0
r) 替硝唑-D5特征离子对提取离子流图 (253.1/126.1, 9.86 min)
(173.1/127.0)
13.32
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
× 105
1.5
1
0.5
0
s) 异丙硝唑-D3特征离子对提取离子流图 (173.1/127.0 , 13.32 min)
(190.1/128.1)
5.06
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
t ) 羟基甲硝唑-D2特征离子对提取离子流图 (190.1/128.1, 5.06 min)
图 C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图(续)
16
SN/T 2579—2025
响应值 响应值
× 105
2
1.5
1
0.5
0
(161.1/58.0)
6.33
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14时间/min
× 106
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
u ) 羟基二甲硝咪唑-D3特征离子对提取离子流图 (161.1/58.0, 6.33 min)
(189.1/171.1)
12.36
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
时间/min
v) 羟基异丙硝唑-D3特征离子对提取离子流图 (189.1/171.1, 12.36 min)
图 C.2 硝基咪唑类药物混合标准溶液的提取离子流图(续)
17
SN/T 2579—2025
附 录 D
(资料性)
蜂蜜、蜂王浆、蜂花粉中硝基咪唑类药物添加回收试验结果
D.1 蜂蜜中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据见表 D.1。
表 D.1 蜂蜜中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据(n=6)
化合物
添加浓度/(μg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
甲硝唑
0.1
91.0~102
4.2
0.2
92.0~103
5.5
1.0
88.2~98.6
3.8
二甲硝咪唑
0.2
97.0~103
2.6
0.4
97.5~102
2.6
2.0
84.7~102
6.7
洛硝哒唑
0.2
96.0~107
5.2
0.4
90.5~102
4.4
2.0
92.9~104
4.6
替硝唑
0.1
83.0~104
8.6
0.2
90.0~98.5
3.8
1.0
85.0~105
7.8
异丙硝唑
0.2
100~109
2.9
0.4
98.5~105
2.5
2.0
88.3~99.6
4.9
2- 甲硝咪唑
0.2
75.0~85.0
4.3
0.4
79.5~86.5
3.0
2.0
73.7~89.0
7.3
奥硝唑
0.2
77.0~91.0
5.9
0.4
77.0~87.0
5.4
2.0
83.0~92.0
4.2
苯硝咪唑
0.2
94.0~101
2.8
0.4
88.0~99.5
5.0
2.0
77.6~84.8
3.3
氯甲硝咪唑
0.2
77.0~103
11.2
0.4
78.0~91.0
6.9
2.0
75.0~107
13.2
18
SN/T 2579—2025
表 D.1 蜂蜜中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据(n=6)( 续 )
化合物
添加浓度/(μg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
塞克硝唑
0.1
73.0~100
11.9
0.2
76.0~94.0
7.6
1.0
74.8~104
13.1
特硝唑
0.1
70.0~85.0
8.1
0.2
75.0~83.0
3.9
1.0
74.6~88.4
7.0
羟基甲硝唑
0.2
91.0~110
7.1
0.4
90.0~98.0
3.2
2.0
96.2~107
4.8
羟基二甲硝咪唑
0.2
91.0~107
6.1
0.4
92.5~109
6.2
2.0
92.1~108
5.9
羟基异丙硝唑
0.2
87.0~105
7.0
0.4
93.5~106
5.2
2.0
89.4~101
5.0
D.2 蜂王浆中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据见表 D.2。
表 D.2 蜂王浆中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据(n=6)
化合物
添加浓度/(μg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
甲硝唑
0.5
91.4~109
6.4
1.0
95.8~106
3.4
5.0
82.0~85.3
1.7
二甲硝咪唑
1.0
77.2~84.4
4.1
2.0
75.9~94.6
7.4
10
78.8~89.5
4.8
洛硝哒唑
1.0
71.6~83.8
6.3
2.0
75.4~87.7
5.6
10
78.2~89.9
4.5
替硝唑
0.5
72.6~80.0
3.6
1.0
72.0~83.0
5.7
5.0
79.6~87.6
4.7
19
SN/T 2579—2025
表 D.2 蜂王浆中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据(n=6)( 续 )
化合物
添加浓度/(μg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
异丙硝唑
1.0
79.0~107
10.4
2.0
87.7~106
8.8
10
97.7~105
7.1
2- 甲硝咪唑
1.0
72.4~79.2
4.1
2.0
74.9~79.1
3.1
10
72.1~80.7
4.0
奥硝唑
1.0
72.8~78.8
2.8
2.0
73.7~80.6
3.1
10
74.0~81.5
4.0
苯硝咪唑
1.0
71.4~76.2
2.4
2.0
72.2~76.7
2.3
10
70.9~78.3
3.9
氯甲硝咪唑
1.0
75.4~107
13.0
2.0
73.1~78.5
2.6
10
71.2~80.2
4.4
塞克硝唑
0.5
73.0~80.2
3.6
1.0
74.5~83.9
4.5
5.0
78.2~89.8
5.4
特硝唑
0.5
71.8~74.0
1.1
1.0
71.8~84.9
5.6
5.0
71.4~75.7
2.0
羟基甲硝唑
1.0
76.8~104
11.4
2.0
83.2~106
8.9
10
79.5~93.8
7.2
羟基二甲硝咪唑
1.0
80.4~89.8
4.5
2.0
73.7~90.3
9.1
10
77.1~84.9
3.4
羟基异丙硝唑
1.0
77.0~100
9.0
2.0
85.4~102
7.0
10
81.0~101
10.4
D.3 蜂花粉中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据见表 D.3。
20
SN/T 2579—2025
表 D.3 蜂花粉中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据(n=6)
化合物
添加浓度/(μg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
甲硝唑
1.0
90.6~98.2
3.1
2.0
81.1~93.2
5.7
10
93.0~103
3.9
二甲硝咪唑
2.0
78.4~107
10.4
4.0
86.5~97.6
5.1
20
90.4~104
5.6
洛硝哒唑
2.0
88.6~101
4.7
4.0
86.2~98.2
5.6
20
97.7~108
3.8
替硝唑
1.0
78.9~94.2
5.8
2.0
80.1~92.9
5.6
10
85.1~96.2
5.6
异丙硝唑
2.0
73.1~98.0
10.6
4.0
72.6~86.0
5.9
20
77.4~98.9
10.5
2- 甲硝咪唑
2.0
74.0~84.2
4.4
4.0
73.8~84.9
5.0
20
73.2~85.2
7.8
奥硝唑
2.0
71.6~80.8
5.0
4.0
72.0~81.1
4.5
20
72.0~78.0
3.2
苯硝咪唑
2.0
75.0~83.4
5.2
4.0
74.5~81.9
5.1
20
73.8~82.4
3.9
氯甲硝咪唑
2.0
72.6~96.4
10.4
4.0
73.3~83.5
5.3
20
75.8~77.2
0.7
塞克硝唑
1.0
72.4~79.3
3.1
2.0
71.7~75.7
2.4
10
71.8~78.3
3.4
特硝唑
1.0
72.5~81.0
4.0
2.0
71.2~76.1
2.2
10
72.0~81.5
5.3
21
SN/T 2579—2025
表 D.3 蜂花粉中硝基咪唑类药物的添加浓度及回收率试验数据(n=6)( 续 )
化合物
添加浓度/(μg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
羟基甲硝唑
2.0
88.6~105
6.0
4.0
89.2~95.1
2.6
20
93.2~106
4.4
羟基二甲硝咪唑
2.0
79.6~101
8.2
4.0
80.0~97.4
6.7
20
99.6~107
2.9
羟基异丙硝唑
2.0
102~108
2.2
4.0
86.6~106
6.9
20
103~108
1.7
22
