SN/T 5819-2025 口唇和眼部化妆品中10种荧光素类着色剂的测定 高效液相色谱荧光法
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资料介绍
ICS 71.100.70 CCS Y 42
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5819 —2025
口唇和眼部化妆品中 10 种荧光素类着色剂的测定 高效液相色谱荧光法
Determination of 10 fluorescein color additives in lipstick and eye area
cosmetics—High performance liquid chromatography
fluorescence method
2025-12-11 发布 2026-07-01 实施
中华人民共和国海关总署 发 布
前 言
本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国宁波海关、泰科实验室管理(深圳)有限公司、中国人民共和国杭州海关。
本文件主要起草人：肖道清、马明、庞钰君、李乐琴、曹丹、黄逸儿。
I
口唇和眼部化妆品中 10 种荧光素类着色剂的测定
高效液相色谱荧光法
1 范围
本文件规定了口唇和眼部化妆品中荧光素、荧光素钠、4’,5’- 二溴荧光素、4’,5’- 二碘荧光素、 4’,5’- 二碘荧光素二钠、四溴荧光素、四溴荧光素二钠、四溴四氯荧光素、四氯四溴荧光素二钠、罗丹明 B 等 10 种着色剂的测定方法。
本文件适用于口唇和眼部化妆品中荧光素、荧光素钠、4’,5’- 二溴荧光素、4’,5’- 二碘荧光素、 4’,5’- 二碘荧光素二钠、四溴荧光素、四溴荧光素二钠、四溴四氯荧光素、四氯四溴荧光素二钠、罗丹明 B 等 10 种着色剂的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
用甲醇和四氢呋喃混合溶液提取化妆品中的荧光素类着色剂，离心分离后，采用高效液相色谱配置荧光检测器检测目标物。必要时，需进行质谱确证。
5 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯。实验用水为 GB/T 6682 中规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇(CH3OH)：色谱纯。
5.1.2 乙腈(CH3CN)：色谱纯。
5.1.3 乙酸(CH3COOH)：色谱纯。
5.1.4 四氢呋喃(C4H8O)：色谱纯。
5.1.5 甘氨酸(C2H5NO2 )。
5.1.6 氢氧化钠(NaOH)。
1
5.1.7 乙酸铵(CH3COONH4 )。
5.2 标准品
10 种着色剂的 CAS 号、CI 号、分子式、分子量等参见附录 A 中的表 A.1。10 种着色剂如下：
5.2.1 荧光素(C20H12O5 )，含量≥ 95%。
5.2.2 荧光素钠(C20H10Na2O5 )，含量≥ 95%。
5.2.3 二溴荧光素(C20H10Br2O5 )，含量≥ 95%。
5.2.4 二碘荧光素(C20H10I2O5 )，含量≥ 85%。
5.2.5 二碘荧光素二钠(C20H8I2Na2O5 )，含量≥ 99%。
5.2.6 四溴荧光素(C20H8Br4O5 )，含量≥ 95%。
5.2.7 四溴荧光素二钠(C20H6Br4Na2O5 )，含量≥ 90%。
5.2.8 四溴四氯荧光素(C20H4Br4Cl4O5 )，含量≥ 85%。
5.2.9 四溴四氯荧光素二钠(C20H2Br4Cl4Na2O5 )，含量≥ 90%。
5.2.10 罗丹明 B(C28H31ClN2O3 )，含量≥ 96%。
5.3 溶液配制
5.3.1 氢氧化钠溶液(1 mol/L)： 准确称取氢氧化钠(5.1.6)4g 于 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。
5.3.2 甘氨酸溶液(10 mmol/L ，pH=9.0)： 准确称取甘氨酸(5.1.5)0.75 g 于 1 L 容量瓶中，加入950 mL 水，混匀，用氢氧化钠溶液(5.3.1)将溶液 pH 值调至 9.0，加水定容至刻度。
5.3.3 乙腈(含 0.1% 乙酸)：取 1 mL 乙酸(5.1.3)，加乙腈至 1000 mL。
5.3.4 乙酸铵(5 mmol/L)：称取乙酸铵(5.1.7)0.385 g 于 1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。
5.4 标准溶液制备
5.4.1 标准储备溶液(500 mg/L)： 分别准确称取各标准物质(5.2)10 mg， 用甲醇定容到 20 mL，于 4 ℃ ~6 ℃冰箱中避光保存。
5.4.2 混合标准储备液(10 mg/L)：分别取上述标准储备液各 1 mL 于 50 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，于 4 ℃ ~6 ℃冰箱中避光保存。
5.4.3 混合标准工作溶液：分别取上述混合标准储备溶液各 0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 于20 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配置成质量浓度分别为0.25 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2.5 mg/L、 5 mg/L 的混合标准工作溶液，现配现用。
5.5 材料
微孔滤膜：0.45 μm 聚四氟乙烯(PFTE)。
6 仪器和设备
6.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。
6.2 分析天平：感量 0.1mg。
6.3 涡旋震荡器。
6.4 超声波清洗机。
6.5 高速离心机，转速不低于 10000 r/min。
6.6 pH 计。
2
7 试样制备
准确称取 0.5 g 试样(精确到 0.1 mg)于 15mL 塑料刻度离心管中，加入 1 mL 四氢呋喃，涡旋30 s 混匀。若遇唇膏样品等无法分散的情况，可在 80℃水浴中适当加热 1 min~2 min 即可分散。加入甲醇至 10 mL， 涡旋 2 min 并超声 10 min，超声完成后再涡旋 2 min，然后于 10000 r/min 离心分离10 min，取上清液经 0.45μm 聚四氟乙烯(PFTE)微孔滤膜过滤后待测。
8 分析步骤
8.1 液相色谱分析参考条件
液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，或相当者;
b) 柱温：30℃ ;
c) 流动相 A ：10 mmol/L 甘氨酸(pH=9.0);
d) 流动相 B ：甲醇;
e) 流动相梯度变化参见表 1 ;
f) 流速 1 mL/min ;
g) 进样体积 5 μL ;
h) 检测波长参见表 2。
表 1 流动相梯度变化参考条件
时间 /min
流动相 A/%
流动相 B/%
0
70
30
10
40
60
12
10
90
16
10
90
17
70
30
22
70
30
表 2 参考检测波长
序号
化合物
激发波长 /nm
发射波长 /nm
1
荧光素
505
525
2
荧光素钠
3
二溴荧光素
4
二碘荧光素
5
二碘荧光素二钠
6
四溴荧光素
520
535
7
四溴荧光素二钠
3
表 2 参考检测波长(续)
序号
化合物
激发波长 /nm
发射波长 /nm
8
四溴四氯荧光素
545
560
9
四溴四氯荧光素二钠
10
罗丹明 B
8.2 定性分析
将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，则可确认样品中存在该物质。10 种荧光素类着色剂标准物质液相色谱图参见附录 B。必要时需进行质谱确证，10 种荧光素类着色剂的质谱确证参考条件参见附录 C。
注：荧光素与荧光素钠、二碘荧光素与二碘荧光素二钠、四溴荧光素与四溴荧光素二钠、四氯四溴荧光素与四溴四氯荧光素二钠均在同一时间出峰，且质谱参数完全相同，相应的计算结果均以钠盐计。
8.3 定性分析
按照仪器参考条件(8.1)采用单点或多点校正方式测定，样品溶液中待测物的响应值应在标准曲线的线性范围内。如果超出线性响应范围，应进行适当稀释。
9 结果计算
单点校正，结果按式(1)计算。
式中：
Xi——样品中目标物的含量，单位为微克每克( μg/g);
Ai——试样溶液中目标物对应的色谱峰面积响应值;
Ais——标准工作溶液中目标物对应的色谱峰面积响应值;
cis——标准工作溶液中目标物的质量浓度，单位为微克每毫升( μg/mL);
V——样品定容体积，单位为毫升(mL);
f——稀释倍数;
m ——称取样品的质量，单位为克(g)。
多点校正，结果按式(2)计算。
式中：
Xi ——样品中目标物的含量，单位为微克每克( μg/g);
ci ——从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度，单位为微克每毫升( μg/mL); V ——样品定容体积，单位为毫升(mL);
f——稀释倍数;
m ——称取样品的质量，单位为克(g)。
计算结果大于 1μg/g 时，保留 3 位有效数字;计算结果小于等于 1μg/g 时，保留 2 位有效数字。
4
10 回收率
目标物含量在 10 μg/g~300 μg/g 范围内，回收率为 85%~115%。
11 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定的绝对差值不大于其算数平均值的 10%。
12 检出限与定量限
二碘荧光素 / 二碘荧光素二钠的检出限为 1 μg/g，其余着色剂的检出限为 0.2 μg/g ;二碘荧光素 /二碘荧光素二钠的定量限为 3 μg/g，其余着色剂的定量限为 0.5 μg/g。
5
附 录 A
( 资料性 )
荧光素类着色剂的 CAS 号、CI 号、化学分子式和分子量
荧光素类着色剂的 CAS 号、CI 号、化学分子式和分子量见表 A.1。
表 A.1 荧光素类着色剂的 CAS 号、CI 号、化学分子式和分子量
序号
化合物
CAS 号
CI 号
化学分子式
分子量
1
荧光素
2321-7-5
45430:1
C20H12O5
332.3
2
荧光素钠
518-47-8
45430
C20H10Na2O5
376.3
3
二溴荧光素
596-03-2
45370:1
C20H10Br2O5
490.1
4
二碘荧光素
31395-16-1
45425:1
C20H10I2O5
584.1
5
二碘荧光素二钠
33239-19-9
45425
C20H8I2Na2O5
628.1
6
四溴荧光素
15086-94-9
45380:2
C20H8Br4O5
647.9
7
四溴荧光素二钠
17372-87-1
45380
C20H6Br4Na2O5
691.9
8
四溴四氯荧光素
13473-26-2
45410:1
C20H4Br4Cl4O5
785.7
9
四溴四氯荧光素二钠
18472-87-2
45410
C20H2Br4Cl4Na2O5
829.6
10
罗丹明 B
81-88-9
45170
C28H31ClN2O3
479.0
6
附 录 B
(资料性)
荧光素类着色剂标准品的液相色谱图
荧光素类着色剂标准品的液相色谱图参见图 B.1 所示。
a)激发波长 505nm，发射波长 525nm 时的液相色谱图
b)激发波长 520nm，发射波长 535nm 时的液相色谱图
c)激发波长 545nm，发射波长 560nm 时的液相色谱图
7
标引序号说明：
1—荧光素 / 荧光素钠; 2—二溴荧光素;
3—二碘荧光素 / 二碘荧光素二钠;
4—四溴荧光素 / 四溴荧光素二钠;
5—四溴四氯荧光素 / 四溴四氯荧光素二钠;
6—罗丹明 B。
图 B.1 荧光素类着色剂标准品的液相色谱图
8
附 录 C
(资料性)
荧光素类着色剂质谱确证参考条件
C.1 液相色谱参考条件
质谱确证分析的液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18 柱(50 mm×2 mm，1.6 μm)，或相当者;
b) 柱温：30℃ ;
c) 流动相 A ：乙腈(含 0.1 % 乙酸);
d) 流动相 B ：5 mmol/L 乙酸铵;
e) 流动相梯度变化参见表 C.1 ;
f) 流速 0.3 mL/min ;
g) 进样体积 2 μL。
表 C.1 流动相梯度变化参考条件
时间 /min
流动相 A/%
流动相 B/%
0
5
95
1
5
95
3
20
80
11
90
10
12
90
10
12.5
5
95
16
5
95
C.2 质谱参考条件
质谱确证分析的质谱参考条件如下：
a) 离子源：电喷雾电离源(ESI);
b) 检测方式：多反应监测(MRM);
c) 雾化气：氮气;
d) 干燥气：氮气;
e) 离子源温度：550℃ ;
f) 其他质谱参数见表 C.2。
表 C.2 目标物质谱分析参考参数
序号
化合物
母离子
子离子
去簇电压(V)
碰撞能量(eV)
电离模式
1
荧光素
331.1
286.0a
-100
-30
ESI-
243.1
-36
2
荧光素钠
331.1
286.0a
-100
-30
ESI-
243.1
-36
3
二溴荧光素
488.9
443.9a
-90
-31
ESI-
363.0
-39
9
续 表
序号
化合物
母离子
子离子
去簇电压(V)
碰撞能量(eV)
电离模式
4
二碘荧光素
582.9
537.8a
-100
-34
ESI-
411.0
-43
5
二碘荧光素二钠
582.9
537.8a
-100
-34
ESI-
411.0
-43
6
四溴荧光素
646.7
522.8a
-100
-43
ESI-
443.7
-50
7
四溴荧光素二钠
646.7
522.8a
-100
-43
ESI-
443.7
-50
8
四溴四氯荧光素
784.5
658.6a
-130
-47
ESI-
704.5
-36
9
四溴四氯荧光素二钠
784.5
658.6a
-130
-47
ESI-
704.5
-36
10
罗丹明 B
443.3
399.2a
100
58
ESI+
355.1
80
a 定量离子。
C.3 定性监测离子相对丰度最大允许偏差
质谱确证时，定性监测离子相对丰度最大允许偏差见表 C.3。
表 C.3 定性监测离子相对丰度最大允许偏差
相对离子丰度
>50%
>20%~50%
>10%~20%
≤ 10%
许的最大偏差
±20%
±25%
±30%
±50%
C.4 荧光素类着色剂标准品的 MRM 色谱图
荧光素类着色剂标准品的 MRM 色谱图参见图 C.1 所示。
a)四溴荧光素 / 四溴荧光素二钠标准品的 MRM 色谱图
10
b)荧光素 / 荧光素钠标准品的 MRM 色谱图
c)四氯四溴荧光素 / 四氯四溴荧光素二钠标准品的 MRM 色谱图
d)罗丹明 B 标准品的 MRM 色谱图
11
e)二溴荧光素标准品的 MRM 色谱图
f)二碘荧光素 / 二碘荧光素二钠标准品的 MRM 色谱图
标引序号说明：
1—四溴荧光素 / 四溴荧光素二钠; 2—荧光素 / 荧光素钠;
3—四溴四氯荧光素 / 四溴四氯荧光素二钠;
4—罗丹明 B ;
5—二溴荧光素;
6—二碘荧光素 / 二碘荧光素二钠。
图 C.1 荧光素类着色剂标准品的 MRM 色谱图
12
