SN/T 5867-2025 进出口动物源食品中硝基酚钠残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法
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- 类 别：检验检疫
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资料介绍
ICS 67. 050 CCS X 04
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5867—2025
进出口动物源食品中硝基酚钠残留量的测定 液相色谱‑质谱/质谱法
Determination of sodium nitrophenolate residues in foodstuffs of animal
origin for import and export—LC‑MS/MS method
2025‑12 ‑ 11 发布 2026‑07‑01 实施
中华人民共和国海关总署 发 布
SN/T 5867—2025
前 言
本 文 件 按 照 GB/T 1.1— 2020《标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则》及SN/T 0001—2016《出口食品、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：广州海关技术中心。
本文件主要起草人：邵琳智、邹游、徐娟、蓝草、庄燕君、谢敏玲、陈思敏、吴映璇、欧阳少伦。
Ⅰ
SN/T 5867—2025
进出口动物源食品中硝基酚钠残留量的
测定 液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件描述了动物源食品中硝基酚钠(5-硝基邻甲氧基苯酚钠、对硝基苯酚钠和邻硝基苯酚钠)残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、蜂蜜、肠衣和鸡脂肪等动物源食品中 5- 硝基邻甲氧基苯酚钠(以 5- 硝基邻甲氧基苯酚计)、对硝基苯酚钠(以对硝基苯酚计)和邻硝基苯酚钠(以邻硝基苯酚计)残留量的定量测定和确证。其他动物源性食品参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
试样(蜂蜜除外)中的硝基酚钠经氢氧化钠溶液提取，盐酸溶液调节 pH 后，用乙腈萃取，正己烷除脂，蜂蜜样品用水溶解，混合型阴离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。
5 试剂和材料
除另有规定外，所有实验用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇：色谱纯。
5.1.2 乙腈：色谱纯。
5.1.3 甲酸：色谱纯。
5.1.4 氢氧化钠。
5.1.5 盐酸：含量为 36%~38% 。
5.1.6 氯化钠。
5.1.7 正己烷。
5.1.8 三乙胺。
1
SN/T 5867—2025
5.1.9 氨水：含量为 25%~28% 。
5.2 试剂配制
5.2.1 0.5 mol/L 氢氧化钠溶液：取 10 g 氢氧化钠(5.1.4)用水溶解并定容至 500 mL 。
5.2.2 3 mol/L 盐酸溶液：取 25 mL 盐酸(5.1.5)用水定容至 100 mL 。
5.2.3 饱和氯化钠溶液：取水 500 mL，边加氯化钠(5.1.6)边搅拌，直至不溶解为止，摇匀备用。
5.2.4 5% 氨水溶液：取 5 mL 氨水(5.1.9)用水定容至 100 mL 。
5.2.5 2% 甲酸甲醇溶液：取 2 mL 甲酸(5.1.3)用甲醇(5.1.1)定容至 100 mL 。
5.2.6 甲醇水溶液：取 50 mL 甲醇(5.1.1)用水定容至 100 mL 。
5.2.7 乙腈饱和正己烷溶液：取相同体积的乙腈(5.1.2)和正己烷(5.1.7)，置于分液漏斗中，振荡，静置分层，取上层溶液。
5.3 标准物质
5.3.1 5- 硝基邻甲氧基苯酚钠(5-Nitroguaiacol sodium，C7H6NNaO4，CAS 号：67233-85-6，纯度≥96%)，或具有有证标准物质证书的标准物质。
5.3.2 对硝基苯酚钠(4-Nitrophenol sodium salt，C6H4NNaO3，CAS 号：824-78-2，纯度≥80%)，或具有有证标准物质证书的标准物质。
5.3.3 邻硝基苯酚钠(2-Nitrophenol sodium salt，C6H4NNaO3，CAS 号：824-39-5，纯度≥99%)，或具有有证标准物质证书的标准物质。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 标准储备液：准确称取适量 3 种硝基酚钠类化合物标准品(5.3)(精确至 0.1 mg)，分别用甲醇溶解，配制并换算成质量浓度为 500 mg/L 的 5-硝基邻甲氧基苯酚、对硝基苯酚和邻硝基苯酚标准储备液， -18 ℃避光保存，有效期 1 年。
5.4.2 混合标准中间液：分别吸取 1.0 mL5-硝基邻甲氧基苯酚标准储备液、2.0 mL 对硝基苯酚标准储备液和 5.0 mL 邻硝基苯酚标准储备液(5.4.1)于 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制质量浓度 为 5- 硝 基 邻 甲 氧 基 苯 酚 10 mg/L、对 硝 基 苯 酚 20 mg/L、邻 硝 基 苯 酚 50 mg/L 的 混 合 标 准 中 间 液 ， -18 ℃避光保存，有效期 6 个月。
5.4.3 混合标准工作溶液：吸取适量混合标准中间液(5.4.2)，用甲醇水溶液(5.2.6)配制成质量浓度范围为5-硝基邻甲氧基苯酚 0.5 μg/L~10 μg/L、对硝基苯酚 1.0 μg/L~20 μg/L、邻硝基苯酚 2.5 μg/L~50 μg/L的系列基质混合标准工作溶液，现配现用。
5.5 材料
5.5.1 混合型阴离子固相萃取柱(60 mg 或相当者)。
5.5.2 滤膜：0.22 μm，聚四氟乙烯滤膜。
5.5.3 离心管：具塞，50 mL 。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配大气压化学离子源(APCI)。
6.2 分析天平：感量为 0.01 g 和 0.000 1 g。
6.3 涡旋混合器。
6.4 水平振荡器。
2
SN/T 5867—2025
6.5 高速离心机：最大转速不小于 10 000 r/min。
6.6 氮吹仪。
6.7 组织捣碎机。
7 试样的制备与保存
取 有 代 表 性 样 约 500 g，用 组 织 捣 碎 机 捣 碎 ，混 匀 后 装 入 洁 净 容 器 作 为 试 样 ，密 封 并 做 好 标 识 ，于-18 ℃下避光保存，在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化。
8 测定步骤
8.1 提取
8.1.1 猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、肠衣等
称取 2 g 试样(精确至 0.01 g)，置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 0.5 mol/L 氢氧化钠溶液(5.2.1)，振荡 15 min，用 3 mol/L 盐酸溶液(5.2.2)调节 pH 至 3.0，加入 5.0 g 氯化钠(5.1.6)，涡旋 1 min，加入 10 mL乙腈(5.1.2)，振荡 20 min，10 000 r/min 离心 5 min。取上清液于另一个 50 mL 离心管中，备用。
8.1.2 蜂蜜等
称取 2 g 试样(精确至 0.01 g)，置于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 水，涡旋 1 min，使蜂蜜完全溶解，加入 1 mL 三乙胺(5.1.8)，混合均匀，备用。
8.1.3 鸡脂肪等
称取 2 g 试样(精确至 0.01 g)，置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 0.5 mol/L 氢氧化钠溶液(5.2.1)，涡 旋 1 min，再 加 入 10 mL 正 己 烷(5.1.7)，振 荡 15 min，10 000 r/min 离 心 5 min，取 下 层 清 液 于 另 一 个50 mL 离心管中，用 3 mol/L 盐酸溶液(5.2.2)调节 pH 至 3.0，加入 5.0 g 氯化钠(5.1.6)，加入 10 mL 乙腈(5.1.2)，振荡 20 min，10 000 r/min 离心 5 min。取上清液于另一个 50 mL 离心管中，备用。
8.2 净化
8.2.1 猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、肠衣、鸡脂肪等
备用液加入 5 mL 饱和氯化钠溶液(5.2.3)，再加入 10 mL 乙腈饱和正己烷溶液(5.2.7)，振荡 5 min， 4 000 r/min 离心 5 min，取中间乙腈层于刻度试管中，加入 100 μL 甲酸(5.1.3)，40 ℃水浴氮吹至约 1.5 mL，加水定容至 3 mL，涡旋 1 min，0 ℃ ~8 ℃ 冷藏至少 2 h，过 0.22 μm 滤膜(5.5.2)，供液相色谱- 质谱/质谱测定。
8.2.2 蜂蜜等
混合型阴离子固相萃取柱(5.5.1)依次用 3 mL 甲醇、3 mL 水、3 mL 5% 氨水溶液(5.2.4)活化 ,取备用液过柱，依次用 3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗，加入 3 mL 2% 甲酸甲醇溶液(5.2.5)洗脱，收集洗脱液，40 ℃水浴氮吹至约 1.5 mL，加水定容至 3 mL，涡旋 1 min，0 ℃~8 ℃冷藏至少 2 h，过 0.22 μm 滤膜(5.5.2)，供液相色谱-质谱/质谱测定。
3
SN/T 5867—2025
8.3 测定
8.3.1 液相色谱参考条件
8.3.1.1 色谱柱：C18 柱，4.6 mm(内径)×100 mm，3 μm，或相当者。
8.3.1.2 流动相：A 为甲醇，B 为水，梯度洗脱条件，见表 1。流速为 0.80 mL/min。
8.3.1.3 柱温：40 ℃ 。
8.3.1.4 进样量：20 μL 。
表 1 流动相梯度洗脱条件
时间/min
流动相 A/%
流动相 B/%
0
10
90
2
10
90
3
55
45
6.5
55
45
6.6
95
5
9.5
95
5
9.6
10
90
13
10
90
8.3.2 质谱参考条件
8.3.2.1 离子源：APCI 源。
8.3.2.2 扫描方式：负离子扫描。
8.3.2.3 监测方式：多反应监测模式(MRM)。
8.3.2.4 雾化气、气帘气、碰撞气、辅助气均为高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，其他质谱参考条件见附录 A 。
8.3.3 定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和基质标准工作溶液，试样中被测物质的保留时间与相应基质标准工作溶液的保留时间偏差在±2.5% 之内;且定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准工作溶液的相对丰度一致，偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断试样中存在对应的被测物。
表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/%
>50
>20~50
>10~20
≤10
最大允许偏差/%
±20
±25
±30
±50
8.3.4 定量测定
在相同实验条件下，以标准工作溶液浓度为横坐标，以定量离子峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，作单点或多点校准，采用外标法定量，标准溶液及试样溶液中被测物的响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述液相色谱-质谱/质谱条件下，硝基酚钠类标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测图见
4
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附录 B 。
8.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
9 结果计算和表述
试样中 5- 硝基邻甲氧基苯酚、对硝基苯酚和邻硝基苯酚的含量 Xi，以质量分数微克每千克(μg/kg)表示，单点校准按式(1)计算：
Xi ……………………………( 1 )
式中：
A ——试样溶液对应的色谱峰面积响应值;
CS ——标准溶液中 5-硝基邻甲氧基苯酚、对硝基苯酚和邻硝基苯酚的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);
V ——试样定容体积，单位为毫升(mL);
AS ——标准溶液对应的色谱峰面积响应值;
m ——最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。
多点校准由色谱数据处理软件或按式(2)计算：
Xi ……………………………( 2 )
式中：
Ci ——由标准工作曲线得到的试样溶液中 5- 硝基邻甲氧基苯酚、对硝基苯酚和邻硝基苯酚的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);
V ——试样定容体积，单位为毫升(mL);
m ——最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。
注 1：计算结果需扣除空白值，测定结果保留三位有效数字。
注 2：结果以单个化合物计算，并以 5- 硝基邻甲氧基苯酚、对硝基苯酚和邻硝基苯酚表示，当需要时，以 5- 硝基邻甲氧基苯酚钠、对硝基苯酚钠和邻硝基苯酚钠之和计。
10 检出限、定量限和回收率
10.1 检出限
本方法猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、蜂蜜、肠衣和鸡脂肪中 5- 硝基邻甲氧基苯酚的检出限为
0.5 μg/kg，对硝基苯酚的检出限为 1.0 μg/kg，邻硝基苯酚的检出限为 2.5 μg/kg。
10.2 定量限
本方法猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、蜂蜜、肠衣和鸡脂肪中 5- 硝基邻甲氧基苯酚的定量限为
1.0 μg/kg，对硝基苯酚的定量限为 2.0 μg/kg，邻硝基苯酚的定量限为 5.0 μg/kg。
10.3 回收率
在 3 个添加浓度范围内，猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、蜂蜜、肠衣和鸡脂肪中 5- 硝基邻甲氧基苯酚、对硝基苯酚和邻硝基苯酚的回收率数据见附录 C 。
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附 录 A
(资料性)
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a) 气帘气压力(氮气)：40 psi(1 psi=6.895 kPa);
b) 离子源温度(TEM)：500 ℃ ;
c) 雾化气压力(氮气)：50 psi;
d) 辅助加热气压力(氮气)：65 psi;
e) 碰撞气压力(氮气)：10 psi;
f) 放电电流：-1 μA;
g) 定量离子对、定性离子对、去簇电压、碰撞能量见表 A.1。
表 A.1 定量离子对、定性离子对、去簇电压、碰撞能量 1)
化合物名称
定性离子对
m/≈
定量离子对
m/≈
去簇电压/V
碰撞能量/eV
5-硝基邻甲氧基苯酚
168/153
168/153
-55
-17.5
168/123
-27
对硝基苯酚
138/108
138/108
-90
-22
138/92
-30
邻硝基苯酚
138/108
138/108
-90
-20
138/92
-23
1) 非商业性声明：附录 A 所列参考质谱条件是用 AB SCIEX 5500 QTRAP 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。
6
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附 录 B
(资料性)
硝基酚钠标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测(MRM)色谱图
硝基酚钠标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测(MRM)色谱图见图 B.1~图B.3。
4.87
1.5e6
1.4e6
1.2e6
1.oe6
cps cps
8.oe5 6.oe5 4.oe5 2.oe5
o.o
o 2 4 6 8 1o 12
t/min
4.87
4.oe5 3.oe5 2.oe5
1.oe5 o.o
o 2 4 6 8 1o 12
t/min
图 B.1 5-硝基邻甲氧基苯酚标准溶液的多反应监测(MRM)(5.0 ng/mL)
4.94
cps cps
5.77
2.0e6 1.5e6
1.0e6
5.0e5
0.0
0 2 4 6 8 10 12
4.94
t/min
8.8e4
5.77
8.0e4 6.0e4 4.0e4 2.0e4
0.0
0 2 4 6 8 10 12
t/min
图 B.2 对硝基苯酚标准溶液的多反应监测(MRM)(10.0 ng/mL)(保留时间 4.94 min)
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SN/T 5867—2025
8
1.4e6
1.2e6
1.oe6
cps cps
8.oe5 6.oe5 4.oe5 2.oe5
o.o
4.4e4
4.oe4
3.oe4
2.oe4
1.oe4
o.o
4.94 5.77
o 2 4 6 8 1o 12
t/min
5.77
4.93
o 2 4 6 8 1o 12
t/min
图 B.3 邻硝基苯酚标准溶液的多反应监测(MRM)(25.0 ng/mL)(保留时间 5.77 min)
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附 录 C
(资料性)
不同基质中硝基酚钠添加水平及回收率数据
不同基质中硝基酚钠添加水平及回收率数据见表 C.1~表 C.9。
表 C.1 猪肉中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
86.3~101
6.0
2.0
85.1~96.8
5.3
10
93.6~103
3.8
对硝基苯酚
2.0
91.8~107
5.2
4.0
97.1~104
2.8
20
100~105
1.7
邻硝基苯酚
5.0
85.6~109
8.6
10
79.4~93.7
5.9
50
79.8~88.9
4.8
表 C.2 鸡肉中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
83.7~89.8
2.7
2.0
80.2~83.6
1.8
10
80.3~84.5
1.9
对硝基苯酚
2.0
82.4~84.6
1.1
4.0
83.5~93.1
3.8
20
85.8~91.5
2.6
邻硝基苯酚
5.0
82.1~83.8
0.91
10
83.3~87.3
1.8
50
80.3~86.3
2.6
表 C.3 鱼肉中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
83.7~90.7
3.2
2.0
81.4~83.3
1.5
10
80.3~85.2
1.9
9
SN/T 5867—2025
表 C.3 鱼肉中硝基酚钠的添加回收试验数据( n=6)(续)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
对硝基苯酚
2.0
80.6~98.5
8.8
4.0
81.8~86.2
2.3
20
80.1~84.2
1.9
邻硝基苯酚
5.0
88.5~93.6
2.0
10
80.6~85.7
2.8
50
80.1~83.8
1.8
表 C.4 鸡肝中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
81.2~88.1
2.7
2.0
81.7~86.3
2.1
10
80.2~89.0
4.1
对硝基苯酚
2.0
90.7~95.1
1.8
4.0
81.7~87.7
2.6
20
81.5~88.0
2.8
邻硝基苯酚
5.0
82.5~96.8
5.9
10
80.3~86.5
2.9
50
80.1~82.9
1.4
表 C.5 牛奶中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
85.8~104
8.1
2.0
78.7~94.8
6.2
10
87.9~94.2
2.7
对硝基苯酚
2.0
79.3~99.9
8.2
4.0
87.0~96.2
4.1
20
93.1~100
2.7
邻硝基苯酚
5.0
70.1~76.5
3.1
10
70.4~77.1
3.6
50
70.7~72.6
1.2
10
SN/T 5867—2025
表 C.6 鸡蛋中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
75.6~88.6
6.2
2.0
80.1~83.4
1.5
10
82.2~96.5
6.5
对硝基苯酚
2.0
85.5~106
9.1
4.0
81.0~99.8
8.1
20
89.5~99.1
3.9
邻硝基苯酚
5.0
70.0~78.3
4.0
10
70.9~73.3
1.2
50
70.1~78.0
5.0
表 C.7 蜂蜜中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
85.7~106
7.8
2.0
86.1~99.7
6.1
10
88.7~103
5.4
对硝基苯酚
2.0
75.9~92.0
8.2
4.0
77.0~99.3
8.4
20
84.2~102
8.4
邻硝基苯酚
5.0
74.3~79.5
2.6
10
74.6~84.5
4.3
50
78.4~89.5
5.5
表 C.8 肠衣中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
82.0~105
8.8
2.0
80.0~106
9.9
10
87.9~99.4
4.4
对硝基苯酚
2.0
89.3~107
6.9
4.0
87.0~106
8.3
20
93.0~100
3.3
邻硝基苯酚
5.0
75.2~91.8
8.6
10
78.2~91.6
5.8
50
74.4~90.8
9.1
11
SN/T 5867—2025
表 C.9 鸡脂肪中硝基酚钠的添加回收试验数据(n=6)
化合物
添加水平/(µg/kg)
回收率范围/%
CV/%
5-硝基邻甲氧基苯酚
1.0
83.6~106
8.9
2.0
90.0~105
6.4
10
86.6~98.8
5.8
对硝基苯酚
2.0
85.0~106
8.0
4.0
81.0~101
8.2
20
80.5~106
9.9
邻硝基苯酚
5.0
76.6~93.2
8.4
10
81.4~95.1
6.8
50
76.4~82.4
2.8
12
