GB/T 40744-2021 马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法

　　ICS 65 . 020 . 99 CCS B 20

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 40744—2021

　　马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法

　　Determinationofsolanesolinpotatostems，leavesandtheirprocessedproducts—

　　Highperformanceliquidchromatography-massspectrometry

　　2021-10-1 1 发布 2022-05-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 40744—202 1

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中国标准化研究院提出并归口 。

　　本文件起草单位：中国计量大学、深圳市标准技术研究院、重庆两江创享医药检验认证科技有限公司、北京电子科技职业学院、食药环检验研究院(山东)集团有限公司、中国标准化研究院、华测检测认证集团股份有限公司、中山内得农业科技有限公司、云南农业大学、浙江大学、中国热带农业科学院分析测试中心、中关村国际医药检验认证科技有限公司、江苏黄淮农业科技有限公司。

　　本文件主要起草人：马正、兰韬、席兴军、杨志花、何涛、孙学文、初侨、辛秀兰、陈亮、赵新颖、盛军、田洋、刘松柏、阳辛凤、刘莹莹、施珊玲、于聪聪、王芳、刘涛、李忍、夏新明、刘治平、张莉、孙宇、朱桂芳。

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　　马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的

　　含量测定 高效液相色谱-质谱法

　　1 范围

　　本文件规定了用高效液相色谱-质谱测定马铃薯茎叶及其加工制品中总茄尼醇含量的测定原理、试剂和材料、仪器和设备、检测步骤、分析结果的表述、精密度等。

　　本文件适用于马铃薯茎叶及其加工制品中总茄尼醇含量的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜 取样方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　用正己烷提取马铃薯叶中的游离茄尼醇(包含酯态)，总茄尼醇用氢氧化钠皂化以释放出结合态的茄尼醇，然后用水去除杂质，离心分离，取上层溶液用流动相稀释定容，经滤膜过滤后用高效液相色谱-质谱仪测定，外标法定量计算。

　　5 试剂和材料

　　除另外有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合 GB/T 6682 中一级水的要求。

　　5 . 1 正己烷(C6 H 14) ：分析纯 。

　　5 . 2 甲醇(CH 4 O)：色谱纯。

　　5 . 3 异丙醇(C3 H 8 O)：色谱纯。

　　5 . 4 氢氧化钠(NaOH) ：分析纯。

　　5 . 5 无水乙醇(C2 H 6 O)分析纯。

　　5.6 茄尼醇标准品(C45 H74 O, CAS号：13190-97-1)：纯度 ≥98%。

　　5 . 7 NaOH 乙醇溶液(0 . 02 mol/ L) ：称取 0 . 4 g氢氧化钠(5 . 4),溶于无水乙醇(5 . 5),用无水乙醇稀释至500 mL,储存于聚乙烯瓶中，旋紧瓶盖。

　　5 . 8 流动相：甲醇(5 . 2) ∶ 异丙醇(5 . 3) = 50 ∶ 50(体积比)，使用前经有机相滤膜(5 . 11)过滤，超声脱气。

　　5.9 茄尼醇标准储备液(500 μg/mL)：称取 50 mg茄尼醇标准品(5.6),精确至 0.000 1 g,置于 100 mL

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　　棕色容量瓶(5 . 13) 中，用正己烷(5 . 1) 溶解并定容至刻度线，混匀。 标准储备液避光保存于 4 ℃冰箱备用，有效期 3 个月。

　　5 . 10 茄尼醇系列标准工作溶液：分别准确移取适量茄尼醇标准储备液(5 . 9) 于 50 mL 棕色容量瓶(5 . 13)中，用流动相(5 . 8)稀释并定容至刻度线，摇匀，得到茄尼醇系列标准工作溶液(质量浓度分别为0.1 μg/mL、1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL)。

　　5. 1 1 有机相滤膜：孔径 0.22 μm。

　　5. 12 离心管：50 mL(螺旋盖)，10 mL(具塞)。

　　5. 13 棕色容量瓶：100 mL, 50 mL, 25 mL。

　　5 . 14 三角瓶：50 mL(具塞、棕色)。

　　6 仪器和设备

　　6 . 1 涡旋振荡器。

　　6 . 2 超声波清洗器，功率不低于 250 W,或相当的设备。

　　6.3 离心机(转速不低于 4 000 r/min)。

　　6 . 4 恒温振荡器，可水浴加热(0 ℃ ~100 ℃ ) 。

　　6 . 5 高效液相色谱-质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI) 。

　　6.6 分析天平，感量 0.000 1 g。

　　7 测定步骤

　　注意：本章所述操作应避免阳光直射或在强光下操作。

　　7 . 1 样品前处理

　　7 . 1 . 1 马铃薯叶

　　7 . 1 . 1 . 1 试样制备

　　按照 GB/T 8855 中取样过程。

　　7 . 1 . 1 . 2 提取

　　称取约 1 g试样(见 7.1.1.1)于 50 mL离心管(5.12) 中，精确至 0.01 g, 加入 30 mL正己烷(5.1) ,用涡旋振荡器(6 . 1)涡旋振荡 2 min,旋紧盖子，静置 30 min后，用超声波清洗器(6 . 2)于 45 ℃超声萃取试样 30 min, 3 500 r/min离心 5 min,移取上清液入 50 mL棕色容量瓶(5.13) 中。再分 2 次各用 5 mL 正

　　己烷(5 . 1)重复以上振荡、萃取和离心步骤，合并上层正己烷层于 50 mL棕色容量瓶(5 . 13) 中，用正己烷(5 . 1)定容至刻度线，摇匀。

　　7 . 1 . 1 . 3 茄尼醇测定试样处理

　　准确移取 4 mL提取液(见 7.1.1.2)于 50 mL三角瓶(5.14) 中，精确至 0.1 mL,加入 4 mL NaOH 乙醇溶液(5 . 7),充分混匀，轻塞塞子，在恒温振荡器(6 . 4)中 60 ℃ ~65 ℃水浴振荡、皂化 2 h;皂化后溶液在 83 ℃ ~87 ℃水浴蒸发至近干;准确移取 2 mL正己烷于上述三角瓶中，超声 2 min溶解残渣，转移至另一洁净 10 mL离心管(5 . 12) 中 。

　　重复以上自“准确移取 2 mL 正己烷……中”，溶解三角瓶中残留物转移至离心管(5 . 12) 中，再用约6 mL 水，分 3 次每次 2 mL洗涤三角瓶，合并溶液于离心管(5 . 12) 中;涡旋振荡器离心管 2 min 以去除

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　　水溶性杂质，离心 10 min分层;准确移取 1 mL净化后上层正己烷提取液，用流动相(5 . 8)稀释并定容至 25 mL棕色容量瓶(5 . 13) 中(如茄尼醇浓度超出标准曲线线性范围，则适当调整移取体积和定容体积)，经有机相滤膜(5 . 11)过滤，滤液待上机测定。

　　7 . 1 . 1 . 4 马铃薯叶提取物

　　分别称取约 0 . 1 g(精确到 0 . 000 1 g)马铃薯叶提取物 1(70%马铃薯叶提取液)、马铃薯叶提取物 2 (15%马铃薯叶提取液)置于 10 mL烧杯中，用正己烷溶解，并转移至 50 mL 的棕色容量瓶(5 . 13) 中，用正己烷定容，摇匀。 再根据 7 . 1 . 1 . 3 的实验步骤提取马铃薯叶提取物中的茄尼醇。

　　7 . 2 样品测定

　　7 . 2 . 1 高效液相色谱-质谱参考条件

　　液相色谱条件如下：

　　a) 色谱柱：C18 , 150 mm×2.1 mm(内径)，粒径 3.5 μm, 或性能相当者;

　　b ) 流动相：甲醇+异丙醇(50%+50%) ;

　　c) 进样体积：10 μL;

　　d) 柱温：35 ℃ ;

　　e) 流速：0.4 mL/min;

　　f) 洗脱时间：8 min;

　　g) 等度洗脱。

　　质谱条件如下：

　　a) 定性：正离子全扫描模式，提取离子 m/≈ 为 653 . 6 ;

　　b ) 定量：选择离子扫描模式，m/≈为 653 . 6 ;

　　c) 毛细管温度：350 ℃ ;

　　d) 雾化温度：300 ℃ ;

　　e) 鞘气压力：35 Arb ;

　　f) 喷雾电压：3 500 V ;

　　g) 套管透镜电压：91 V。

　　7 . 2 . 2 液相色谱-质谱测定

　　分别取适量的茄尼醇系列标准工作溶液(5 . 10)及待上机试样溶液，按照 7 . 2 . 1 列出的条件进行液相色谱-质谱分析测定。 由保留时间和 m/≈ 对茄尼醇进行定性，根据茄尼醇标准工作溶液响应信号和茄尼醇系列标准工作溶液(5 . 10)浓度，建立标准工作曲线，标准工作曲线线性相关系数 R2 ≥0 . 997 。使用外标法对试样的茄尼醇含量进行定量计算。

　　待测样液中茄尼醇的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应以流动相(5 . 8) 稀释样品响应值至标准曲线响应值上限内后再进行分析。 分析过程中，每 20 次样品测定后应加入一个与样品峰面积相近的标准工作溶液，如果测得的值与原值相对平均偏差超过 5 . 0%,则应重新进行标准曲线的制作 。茄尼醇标准溶液质谱图、茄尼醇标准溶液以及典型样品(马铃薯叶和 2 种马铃薯叶提取物)特征离子质量色谱图分别见附录 A。

　　8 结果计算与表示

　　8 . 1 结果计算

　　马铃薯叶干基样品中茄尼醇的含量按公式(1)计算：

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　　x …………………………( 1 )

　　式中：

　　x —试样中茄尼醇的含量( 以质量分数计)，单位为毫克每克(mg/g) ;

　　ρ — 由标准工作曲线得出的茄尼醇质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) ;

　　V —试样最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　f —试样稀释倍数;

　　m —试样质量，单位为克(g) ;

　　∞ — 马铃薯叶中水分的质量分数。

　　8 . 2 结果表示

　　测定结果以平均测定的算术平均值表示，计算结果保留两位有效数字。 两次平行测定结果的相对平均偏差不应超过 10%。

　　9 精密度和回收率

　　本方法的精密度和回收率实验结果参见表 1 和表 2 。

　　表 1 本方法的精密度实验研究结果(n=6)

　　表 2 本方法的回收率实验研究结果

　　10 检出限

　　该方法对茄尼醇检出限为 0 . 1 mg/kg,定量限为 0 . 3 mg/kg。

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　茄尼醇典型样品色谱图及质谱图

　　茄尼醇正离子模式质谱图见图 A. 1 。

　　茄尼醇标准溶液及典型样品的色谱图示例见图 A. 2~图 A. 5 。

　　图 A.1 茄尼醇正离子模式质谱图

　　图 A.2 标准溶液总离子流出图

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　　图 A.3 马铃薯叶样品总离子流出图

　　图 A.4 马铃薯叶提取物 1 样品总离子流出图

　　图 A.5 马铃薯叶提取液 2 样品总离子流出图

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　　参 考 文 献

　　[1] GB/T 31758 烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定 高效液相色谱法