SN/T 5725-2025 出口动物源食品中克伦丙罗残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法

　　ICS 67.050 CCS C 53

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/ T 5725—2025

　　出口动物源食品中克伦丙罗残留量的测定

　　液相色谱-质谱/质谱法

　　Determination ofclenproperol residue in foodstuffs of animal origin for export—

　　Liquid chromatography tandem mass spectrometry method

　　2025-12-11发布 2026-07-01实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5725—2025

　　前 言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：中华人民共和国石家庄海关。

　　本文件主要起草人：王敬、田浩、张海超、艾连峰、贾海涛、窦彩云。

　　I

　　SN/T 5725—2025

　　出口动物源食品中克伦丙罗残留量的测定

　　液相色谱-质谱/质谱法

　　1 范围

　　本文件规定了出口动物源性食品中克伦丙罗残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。

　　本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾、牛肝、牛肾、羊肝、羊肾、猪脂肪、牛奶、鸡蛋和预制肉制品中克伦丙罗残留量的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 方法提要

　　试样中克伦丙罗残留采用乙酸铵缓冲溶液提取，提取液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定，内标法定量。

　　5 试剂和材料

　　除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

　　5.1 试剂

　　5.1.1 甲醇：色谱纯。

　　5.1.2 正己烷：色谱纯。

　　5.1.3 甲酸：纯度≥ 98%。

　　5.1.4 冰醋酸。

　　5.1.5 乙酸铵。

　　5.1.6 氨水：含量为25%～28%。

　　5.2 溶液配制

　　5.2.1 乙酸铵缓冲溶液(2 mol/L)：称取乙酸铵(5.1.5)77.0 g放入 1 000 mL烧杯中，加入800 mL水溶解混匀，用冰醋酸(5.1.4)调节pH为5.2，再用水定容至 1 000 mL。

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　　5.2.2 0.1% 甲酸水溶液：量取 1.0 mL 甲酸(5.1.3)，用水定容至 1 000 mL，混匀。

　　5.2.3 0.1% 甲酸水- 甲醇(9：1，体积比)溶液：量取 10 mL 甲醇(5.1.1)，用0.1% 甲酸水溶液(5.2.2)定容至 100 mL，混匀。

　　5.2.4 洗脱溶液：量取5 mL氨水(5.1.6)，用甲醇(5.1.1)定容至 100 mL，混匀。

　　5.3 标准品

　　5.3.1 克伦丙罗标准物质(C11H16Cl2N2O，CAS号：1173021-09-4)：纯度大于或等于99%。

　　5.3.2 克伦丙罗-D7 标准物质(C11H9D7Cl2N2O)：纯度大于等于97%，同位素丰度纯度大于或等于98%。

　　5.4 标准溶液配制

　　5.4.1 克伦丙罗标准储备液(1.0 mg/mL)：准确称取克伦丙罗标准物质(5.3.1)10 mg(精确至0.1 mg)，用甲醇(5.1.1)溶解，配制成浓度为 1.0 mg/mL 的标准储备液，-18 ℃以下避光保存，有效期 12个月。

　　5.4.2 克伦丙罗-D7 内标储备液(1.0 mg/mL)：准确称取克伦丙罗 -D7 标准物质(5.3.2)10 mg(精确至0.1 mg)，用甲醇(5.1.1)溶解，配制成浓度为 1.0 mg/mL 的标准储备液，-18 ℃以下避光保存，有效期12个月。

　　5.4.3 克伦丙罗标准中间溶液(1 μg/mL)：根据需要准确移取适量克伦丙罗标准储备液(5.4.1)，用甲醇(5.1.1)稀释，配制成浓度为 1 μg/mL标准中间溶液，于-18 ℃冰箱内保存，有效期6个月。

　　5.4.4 克伦丙罗-D7 内标中间溶液(1 μg/mL)：准确移取适量克伦丙罗 -D7 内标储备液(5.4.2)，用甲醇(5.1.1)稀释，配制成浓度为 1 μg/mL标准中间溶液，于-18 ℃冰箱内保存，有效期6个月。

　　5.4.5 克伦丙罗-D7 内标工作溶液(100 ng/mL)：用甲醇稀释克伦丙罗 -D7 内标中间溶液(5.4.4)配置成浓度为 100 ng/mL 的工作溶液，4 ℃下避光保存，现用现配。

　　5.4.6 标准系列溶液：根据需要，用初始流动相稀释标准中间溶液(5.4.3)成0 ng/mL、0.1 ng/mL、 0.2 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、10.0 ng/ mL、20.0 ng/ mL 、50.0 ng/ mL 的工作溶液，克伦丙罗-D7 内标浓度为5 ng/mL，现用现配。

　　5.5 材料

　　5.5.1 固相萃取柱：混合型强阳离子交换固相萃取柱(3 mL，60 mg)或性能相当者。

　　5.5.2 微孔滤膜：0.22 μm，有机系。

　　6 仪器和设备

　　6.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

　　6.2 组织捣碎机。

　　6.3 均质器：转速不低于9 000 r/min。

　　6.4 涡旋混匀器。

　　6.5 电子分析天平：感量为0.000 1 g和0.01 g。

　　6.6 离心机：转速不低于 10 000 r/min。

　　6.7 氮气吹干仪。

　　7 试样制备与保存

　　7.1 肌肉、内脏、脂肪、预制肉制品

　　从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成两份，分别装入清洁容器内，并标明标记。将试样置于-18 ℃冷冻保存。

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　　7.2 鸡蛋

　　从所取全部样品中取出有代表性样品，取可食部分约500 g，搅拌混匀，均分成两份，分别装入清洁容器内，并标明标记。将试样置于-18 ℃冷藏保存。

　　7.3 牛奶

　　从所取全部样品中取出代表性样品约500 g，充分混匀，均分成两份，装入洁净容器作为试样，密封，标明标记。将试样置于4 ℃冷藏保存。

　　8 测定步骤

　　8.1 提取

　　准确称取2 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中，加入50 μL克仑丙罗-D7 内标工作溶液(5.4.5)，加入20 mL 乙酸铵缓冲溶液(5.2.1)，以 10 000 r/min均质提取 1 min，10 000 r/min离心5 min，收集上清液至50 mL具塞离心管中，加入20 mL正己烷涡旋混匀2 min。10 000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，水相溶液经滤纸过滤，并用2 mL乙酸铵缓冲溶液(5.2.1)洗涤滤纸，收集全部滤液，待净化。

　　8.2 净化

　　将混合型强阳离子交换固相萃取柱置于固相萃取架上，依次用3 mL 甲醇(5.1.1)和3 mL水对柱子进行活化，将8.1制备所得滤液全部过柱，再依次用3 mL水、3 mL 甲醇(5.1.1)淋洗，弃去淋洗液，真空抽干2 min。再用洗脱溶液(5.2.4)3mL洗脱，于45℃氮气吹干。残余物用 1 mL 0.1% 甲酸水- 甲醇(5.2.3)溶液溶解，涡旋混匀，过0.22 μm微孔滤膜后供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

　　8.3 测定

　　8.3.1 液相色谱条件

　　液相色谱条件参考如下：

　　a) 色谱柱：C18 色谱柱，100 mm ×2.1 mm(内径)，1.7 μm，或性能相当者;

　　b) 柱温：30 ℃;

　　c) 流动相：A相，含0.1% 甲酸水溶液;B相，甲醇。梯度程序见表 1;

　　d) 流速：0.4 mL/min;

　　e) 进样量：5 μL。

　　表 1 流动相及梯度洗脱条件

　　时间min

　　流动相A %

　　流动相B %

　　0.00

　　90

　　10

　　1.00

　　90

　　10

　　3.50

　　70

　　30

　　5.00

　　10

　　90

　　6.50

　　10

　　90

　　6.51

　　90

　　10

　　8.00

　　90

　　10

　　3

　　SN/T 5725—2025

　　8.3.2 质谱参考条件

　　质谱参考条件如下：

　　a) 离子源：电喷雾(ESI)，正离子源;

　　b) 扫描方式：多反应监测(MRM)模式;

　　c) 离子源温度：350 ℃;

　　d) 毛细管电压、雾化器压力、干燥气等条件见附录A。

　　8.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定

　　8.3.3.1 定性测定

　　按照上述色谱和质谱条件下进行测定，试液中待测物色谱峰保留时间与标准工作液保留时间偏差在 ±2.5%之内，各离子对的相对丰度与标准品的相对丰度一致，且样品中各离子对的相对丰度与浓度相近的标准工作液中对应的离子对的相对丰度进行比较，偏差均不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

　　表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度/%

　　>50

　　>20～50

　　>10～20

　　≤ 10

　　允许的相对偏差/%

　　±20

　　±25

　　±30

　　±50

　　8.3.3.2 定量测定

　　在仪器最佳工作条件下，根据试样中被测物的含量情况，用标准工作溶液分别进样，以分析化合物和内标化合物的峰面积比为纵坐标，以分析化合物和内标化合物的浓度比为横坐标作标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，标准工作液和待测液中克伦丙罗的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下，克伦丙罗标准溶液的多反应监测色谱图见附录B。

　　8.4 空白试验

　　除了不加试样外，均按上述测定步骤进行。

　　9 结果计算和表述

　　试样中克伦丙罗的残留量利用数据处理软件计算或按公式(1)计算。

　　R X C X V Rs xm

　　……………………………

　　(1)

　　式中：

　　X——试样中克伦丙罗的含量，单位为微克每千克( μg/kg);

　　R ——试样溶液中分析物与内标物峰面积比值;

　　c ——标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

　　Rs ——标准溶液中分析物与内标物峰面积比值;

　　V——试样溶液最终体积，单位为毫升(mL);

　　m ——试样溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。

　　计算结果应扣除空白值，且以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，测定结果应保留三位有效数字。

　　4

　　SN/T 5725—2025

　　10 检出限、定量限、回收率和精密度

　　10.1 检出限和定量限

　　本文件的检出限(LOD)为0.2 μg/kg，定量限(LOQ)为0.5 μg/kg。

　　10.2 回收率

　　本文件对猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾、牛肝、牛肾、羊肝、羊肾、猪脂肪、牛奶、鸡蛋和预制肉制品基质进行三个不同添加水平的添加回收率范围见附录C。

　　10.3 精密度

　　在重复性条件下，本文件获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值 15%。

　　5

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　参考串联质谱条件1)

　　参考质谱条件如下：

　　a) 正离子模式电喷雾电压：3.5 kV;

　　b) 雾化气流速：1 000 L/ h;

　　c) 锥孔反吹气流速：150 L/ h;

　　d) 雾化气压力：7 Bar;

　　e) 源内诱导解离电压：50 V;

　　f) 碰撞气：高纯氩气;

　　g) 碰撞气流速：0.17 mL/min。

　　表A.1 克伦丙罗的参考保留时间、监测离子对和碰撞能量

　　名称

　　保留时间min

　　母离子

　　m/z

　　子离子

　　m/z

　　锥孔电压

　　V

　　碰撞能量

　　CE/eV

　　克伦丙罗

　　4.3

　　263.2

　　245.1a

　　24

　　15

　　202.9

　　24

　　25

　　克伦丙罗-D7

　　4.3

　　270.3

　　252.2

　　22

　　15

　　a 定量离子。

　　1) 非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在 Waters XEVO-TQS型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。

　　6

　　SN/T 5725—2025

　　附 录 B

　　(资料性)

　　标准物质多反应监测质量色谱图

　　标准物质多反应监测质量色谱图见图B.1。

　　t/min

　　t/min

　　t/min

　　图B.1 克伦丙罗、克伦丙罗-D7 标准溶液多反应监测色谱图(2 ng/mL)

　　7

　　SN/T 5725—2025

　　SN/T 5725—2025

　　附 录 C

　　(资料性)

　　回收率

　　克伦丙罗在 17种样品基质中添加浓度及回收率数据见表C.1。

　　表C.1 克伦丙罗在 17种样品基质中添加浓度及回收率数据

　　基质

　　添加水平μg/kg

　　回收率范围 %

　　RSD

　　%

　　基质

　　添加水平μg/kg

　　回收率范围 %

　　RSD

　　%

　　猪肉

　　0.5

　　81.0～98.4

　　7.8

　　火腿

　　0.5

　　83.6～ 107.6

　　8.5

　　1

　　82.5～98.4

　　6.7

　　1

　　80.2～99.2

　　7.1

　　5

　　85.6～96.6

　　4.8

　　5

　　89.8～97.8

　　3.3

　　牛肉

　　0.5

　　80.6～ 101.0

　　8.7

　　牛肉饼

　　0.5

　　80.8～ 101.6

　　9.4

　　1

　　82.1～ 100.5

　　8.2

　　1

　　84.1～ 100.3

　　7.8

　　5

　　90.5～ 104.1

　　5.2

　　5

　　82.8～96.4

　　5.1

　　羊肉

　　0.5

　　83.0～ 103.8

　　7.7

　　羊肉串

　　0.5

　　81.8～97.4

　　6.0

　　1

　　85.3～ 100.8

　　6.3

　　1

　　84.3～93.8

　　4.1

　　5

　　89.0～97.4

　　3.4

　　5

　　81.6～97.7

　　6.7

　　猪肝

　　0.5

　　80.6～99.2

　　7.6

　　猪肉丸

　　0.5

　　84.2～98.2

　　5.7

　　1

　　83.7～ 105.9

　　9.5

　　1

　　80.5～92.9

　　5.4

　　5

　　84.6～97.6

　　5.2

　　5

　　81.5～99.6

　　7.4

　　猪肾

　　0.5

　　82.2～ 103.4

　　7.7

　　咖喱肉

　　0.5

　　80.6～97.0

　　7.6

　　1

　　85.2～95.4

　　4.4

　　1

　　90.6～ 108.5

　　6.8

　　5

　　88.5～97.6

　　3.7

　　5

　　80.5～93.7

　　6.1

　　牛肝

　　0.5

　　81.4～ 108.6

　　10.2

　　鸡蛋

　　0.5

　　82.2～ 108.4

　　9.9

　　1

　　84.3～ 102.8

　　6.5

　　1

　　80.5～ 102.0

　　8.4

　　5

　　85.3～ 100.4

　　5.6

　　5

　　80.6～99.6

　　7.1

　　牛肾

　　0.5

　　85.8～ 108.6

　　9.5

　　猪脂肪

　　0.5

　　89.2～98.7

　　3.6

　　1

　　80.8～96.2

　　7.1

　　1

　　90.6～98.7

　　3.3

　　5

　　86.2～96.7

　　4.0

　　5

　　91.5～99.6

　　3.0

　　羊肝

　　0.5

　　81.6～97.8

　　8.0

　　牛奶

　　0.5

　　85.2～ 100.8

　　6.3

　　1

　　83.7～97.5

　　5.8

　　1

　　85.6～96.9

　　4.5

　　5

　　83.4～ 100.6

　　7.7

　　5

　　90.1～ 100.1

　　3.7

　　羊肾

　　0.5

　　82.0～ 107.8

　　10.3

　　1

　　82.6～ 105.7

　　9.3

　　5

　　81.7～97.9

　　7.0

　　书号：155175 ·1239

　　定价： 16.00 元

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