GB/T 40832-2021 芒果叶中芒果苷的测定 高效液相色谱法

　　ICS 65 . 020 . 0 1 CCS B 43

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 40832—2021

　　芒果叶中芒果苷的测定

　　高效液相色谱法

　　Determinationofmangiferininmangoleaves—

　　Highperformanceliquidchromatography

　　2021-10-1 1 发布 2022-05-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 40832—202 1

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中国标准化研究院提出并归口 。

　　本文件起草单位：中国热带农业科学院分析测试中心、深圳市品牌建设促进中心、重庆两江创享医药检验认证科技有限公司、中国标准化研究院、食药环检验研究院(山东)集团有限公司、中山内得农业科技有限公司、大连依利特分析仪器有限公司、华测检测认证集团股份有限公司、江苏康华信息科技有限公司、中关村国际医药检验认证科技有限公司。

　　本文件主要起草人：阳辛凤、席兴军、兰韬、杨志花、何涛、孙学文、韩丙军、赵方方、张月、孙宇、郭晓杰、唐涛、王盼、王芳、施珊玲、张苏、杨福兴、周旋、李忍、刘治平。

　　GB/T 40832—202 1

　　芒果叶中芒果苷的测定

　　高效液相色谱法

　　1 范围

　　本文件描述了芒果叶中芒果苷含量的高效液相色谱法测定方法。

　　本文件适用于芒果叶中芒果苷含量的测定。 对含有芒果苷产品的含量检测可参照使用。

　　本文件检出限为 0.75 mg/g,定量限为 2.50 mg/g。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　样品中加入 70%甲醇溶液，经超声辅助提取，高效液相色谱法分离及在 258 nm 下测定，根据保留时间定性，外标法定量。

　　5 试剂与材料

　　除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合 GB/T 6682 中一级水的要求。

　　5 . 1 试剂

　　5 . 1 . 1 甲醇(CH 3 OH, CAS号：67-56-1)：色谱纯 。

　　5 . 1 . 2 乙腈(CH 3 CN, CAS号：75-05-8)：色谱纯 。

　　5 . 1 . 3 甲酸(HCOOH, CAS号：64-18-6)：色谱纯 。

　　5 . 2 溶液配制

　　5.2. 1 70%(体积分数)甲醇溶液：量取 700 mL 甲醇，加 300 mL超纯水，混匀。

　　5 . 2 . 2 流动相 A:0 . 1%甲酸溶液，1 L超纯水中加入 1 mL 甲酸，充分混匀。

　　5 . 3 标准品

　　芒果苷(C19 H18 O11 , CAS号：4773-96-0)：纯度 ≥98%。

　　GB/T 40832—202 1

　　5 . 4 标准溶液配置

　　5.4. 1 芒果苷标准储备溶液(200 μg/mL)：称取 10 mg(精确至 0.000 1 g)芒果苷，置于 50 mL 容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度线，配制成 200 μg/mL 的标准储备溶液，- 18 ℃冰箱避光保存，有效期 3 个月。

　　5 . 4 . 2 芒果苷中间浓度标准溶液：准确移取 0 . 5 mL芒果苷标准储备溶液于 10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至定容刻度线，摇匀，得到芒果苷中间浓度标准溶液(质量浓度 10 μg/mL) 。

　　5 . 4 . 3 芒果苷系列标准工作溶液：分别准确移取 0 . 1 mL、0 . 2 mL、0 . 5 mL、1 mL、2 mL芒果苷中间浓度标准溶液于不同的 10 mL容量瓶中，用 70%甲醇溶液稀释、定容，摇匀，得到芒果苷系列标准工作溶液(质量浓度分别为 0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL)。

　　5 . 5 材料

　　5.5. 1 离心管：100 mL(螺旋盖)。

　　5.5.2 三角瓶：250 mL(磨口塞)。

　　5.5.3 容量瓶：10 mL、50 mL、100 mL、250 mL。

　　5.5.4 刻度玻璃移液管：0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1 mL。

　　5.5.5 聚四氟乙烯(PTFE)微孔滤膜(孔径 0 . 22 μm,直径 13 mm)或者相当者。

　　6 仪器和设备

　　6 . 1 高效液相色谱仪：配紫外(UV)检测器或二极管阵列检测器(DAD或 PDA) 。

　　6.2 电子天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 g。

　　6 . 3 超声波振荡仪：功率不低于 250 W,或相当的设备。

　　6 . 4 组织捣碎机。

　　6 . 5 高速组织匀浆机。

　　7 试样制备与保存

　　新鲜芒果叶片充分打碎、混匀，置于洁净容器中，密封并做好标记，于- 18 ℃冰箱避光保存。

　　8 测定步骤

　　8 . 1 提取

　　芒果叶试样解冻，称取 1 g(精确至 0 . 01 g) ,置于 100 mL 离心管中，加入提取溶剂 70%甲醇溶液60 mL, 18 000 r/min高速匀浆 1 min,将样品转移到 250 mL具塞磨口三角瓶中，另取 60 mL提取溶剂

　　洗涤离心管和刀头，并将溶剂转移至三角瓶中。 将三角瓶瓶塞盖上，室温下超声提取 30 min,取出，静置，使分层。 将上清液转入 250 mL容量瓶中。 三角瓶中再加入70%甲醇溶液 100 mL,超声 30 min,对样品进行二次提取，提取液合并至 250 mL 容量瓶，用 70% 甲醇溶液定容，摇匀，得到芒果叶样品提取液。

　　吸取样品提取液 1 . 0 mL,放入 100 mL容量瓶中，用 70%甲醇溶液定容，摇匀。 取适量体积样品溶液，0 . 22 μm 滤膜过滤，滤液待上机分析。

　　GB/T 40832—202 1

　　8 . 2 测定

　　8 . 2 . 1 高效液相色谱参考条件

　　高效液相色谱参考条件如下：

　　a) 色谱柱：C18 反向柱，250 mm× 4.6 mm, 5 μm, 或相当者;

　　b ) 流动相：乙腈 ∶ 甲酸水溶液(0 . 1%) = 15 ∶ 85(体积比);

　　c) 流速：1.0 mL/min;

　　d) 检测波长：258 nm ;

　　e) 进样体积：10 μL;

　　f) 柱温：25 ℃ 。

　　8 . 2 . 2 标准曲线绘制

　　分别取适量的芒果苷系列标准工作溶液(0 . 1 μg/mL~2 . 0 μg/mL) ,按照 8 . 2 . 1 列出的条件进行液相色谱分析测定。 以标准溶液质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线。 芒果苷标准溶液色谱图参见附录 A 中的图 A. 1 。

　　8 . 2 . 3 测定

　　将试样溶液按照 8 . 2 . 1 列出的条件进行液相色谱分析测定，根据标准样品的保留时间定性。 试样溶液中芒果苷的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析，外标法定量。

　　9 结果计算

　　9 . 1 结果计算

　　试样中 目标物的含量按式(1)计算：

　　X V × n …………………………( 1 )

　　式中：

　　X —试样中芒果苷的质量分数，单位为毫克每克(mg/g) ;

　　ρ —样品溶液中芒果苷的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) ;

　　V —样品溶液定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　n —稀释倍数;

　　m —试样质量，单位为克(g) ;

　　1 000 — 换算系数。

　　9 . 2 结果表示

　　测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留四位有效数字。

　　10 重复性

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。

　　GB/T 40832—202 1

　　附 录 A

　　(资料性)

　　芒果苷标准溶液色谱图

　　芒果苷标准溶液色谱图见图 A. 1 。

　　图 A.1 1 μg/mL芒果苷标准溶液色谱图