GB/T 40833-2021 甘蔗皮渣中对香豆酸检测方法 高效液相色谱法

　　ICS 67 . 080 . 0 1 CCS B 30

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 40833—2021

　　甘蔗皮渣中对香豆酸检测方法

　　高效液相色谱法

　　Determinationofp-coumaricacidinsugarcanerinds—

　　Highperformanceliquidchromatography

　　2021-10-1 1 发布 2022-05-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 40833—202 1

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中国标准化研究院提出并归口 。

　　本文件起草单位：北京化工大学、深圳市标准技术研究院、北京电子科技职业学院、中国标准化研究院、食药环检验研究院(山东)集团有限公司、中国农业大学、大连依利特分析仪器有限公司、天津阿尔塔科技有限公司、华测检测认证集团股份有限公司、中山内得农业科技有限公司、捷科思农业科技(徐州)有限公司。

　　本文件主要起草人：魏芸、席兴军、杨志花、兰韬、倪汉文、孙学文、车芬芳、唐涛、辛秀兰、赵新颖、张腾、谢军、刘涛、张磊、刘聪、孙宇、刘瑾玲、徐银、施珊玲。

　　GB/T 40833—202 1

　　甘蔗皮渣中对香豆酸检测方法

　　高效液相色谱法

　　1 范围

　　本文件描述了甘蔗皮渣中对香豆酸含量的高效液相色谱测定方法。

　　本文件适用于甘蔗皮渣中对香豆酸的定性定量测定。 对含有对香豆酸产品的含量检测可参照使用。

　　本文件检出限为 26.8 mg/g,定量限为 89.2 mg/g。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 6379 . 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第 2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　甘蔗皮渣试样用 2 mol/ L NaOH 溶液提取，6 mol/ L 的 HCl溶液调节 pH 至 2 . 0 左右，乙酸乙酯萃取后经 C18 色谱柱分离，紫外-可见光检测器检测，色谱峰保留时间定性，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　5 . 1 试剂

　　除非另有说明，所有试剂均为色谱纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。

　　5 . 1 . 1 甲醇(色谱纯)。

　　5 . 1 . 2 乙酸(色谱纯)。

　　5 . 1 . 3 乙酸乙酯(色谱纯)。

　　5. 1 .4 盐酸(优级纯 36%~38%)。

　　5 . 1 . 5 氢氧化钠(分析纯)。

　　5 . 2 试剂配制

　　乙酸水溶液(0 . 1%) ：移取 0 . 25 mL 乙酸(5 . 1 . 2)于 250 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

　　GB/T 40833—202 1

　　5 . 3 标准品

　　对香豆酸标准品(C9 H8 O3 , CAS号：501-98-4)：纯度大于 98.0%。

　　5 . 4 标准溶液配制

　　5 . 4 . 1 对香豆酸标准储备溶液( 1 . 0 mg/mL) ：准确称取对香豆酸标准品 25 . 0 mg(精确至 0 . 1 mg) 于25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为 1 . 0 mg/mL 的标准储备液。 放置于 4 ℃冰箱避光保存，有效期为一个月。

　　5.4.2 对香豆酸系列标准工作液：准确移取对香豆酸标准储备液(5 . 4 . 1) 40 μL、0 . 20 mL、0 . 80 mL、 1.00 mL、4.00 mL、8.00 mL、10.00 mL 至 10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该标准系列浓度分别为 4.0 μg/mL、20.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL、1 000 μg/mL。临用时配制。

　　6 仪器和设备

　　6 . 1 高效液相色谱仪，配有紫外-可见光检测器或二极管阵列检测器。

　　6.2 天平：感量为 0.000 1 g 和 0.001 g。

　　6 . 3 烘箱 。

　　6 . 4 磁力搅拌器。

　　6 . 5 抽滤装置。

　　6.6 pH 计。

　　6 . 7 离心机。

　　6.8 0.45 μm微孔水相滤膜。

　　6.9 0.45 μm 针筒式有机相及水相过滤器。

　　7 检测步骤

　　7 . 1 试样制备

　　7 . 1 . 1 甘蔗皮渣粉末，置于 80 ℃烘箱中烘干 2 h,保存待用。

　　7 . 1 . 2 称取 0 . 200 g(精确至 0 . 001 g)甘蔗皮渣粉末样品与梭形转子放于 25 mL 烧瓶中，移取 10 mL 2 mol/ L 氢氧化钠溶液，轻轻摇晃使样品和溶剂混合均匀，调节磁力搅拌器使转子能够带动溶液在室温下搅拌 6 h。

　　7 . 1 . 3 取下烧瓶将溶液倒入放置两层中速定量滤纸的抽滤装置中，过滤，移取 5 mL 2 mol/ L 氢氧化钠溶液分 3 次加入烧瓶中冲洗内壁，洗液全部倒入抽滤装置中，摇匀。

　　7 . 1 . 4 将滤液倒入 100 mL 烧杯中，用少量 2 mL 纯水清洗抽滤瓶，洗液并入烧杯中。 移取 4 . 0 mL 6 mol/ L 盐酸溶液充分摇匀后再逐滴加入 6 mol/L盐酸溶液，调节 pH 至 2 . 0 左右，用 1 mL 纯水冲洗pH 计电极，洗液倒入烧杯中。

　　7 . 1 . 5 将上述酸性溶液转入 25 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，混匀后以 8 000 r/ min 的转速离心5 min,取部分溶液用 0 . 45 μm 针筒式水相过滤器过滤，即为试样液，待测。

　　7 . 2 色谱测定

　　7 . 2 . 1 参考色谱条件

　　色谱柱：C18 柱，柱长 250 mm, 内径 4 . 6 mm,粒径 5 μm,或具有同等性能的色谱柱。

　　GB/T 40833—202 1

　　流动相：A 为甲醇，B 为 0 . 1%乙酸溶液。

　　流速：1.0 mL/min。

　　柱温：30 ℃ 。

　　测定波长：254 nm。

　　进样体积：10 μL。

　　梯度洗脱条件见表 1 。

　　表 1 液相色谱梯度洗脱条件

　　7 . 2 . 2 标准曲线的绘制

　　将对香豆酸标准曲线工作液注入高效液相色谱仪中，测定相应的保留时间和峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(对香豆酸标准色谱图见附录 A 中图 A. 1) 。

　　7 . 2 . 3 试样测定

　　将试样液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录其峰面积，根据标准曲线计算出试样液中对香豆酸的浓度，平行测定次数不少于 3 次 。待测试样中对香豆酸的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。 甘蔗皮渣粗提物色谱图见附录 A 中图 A. 2 。

　　7 . 2 . 4 空白实验

　　除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

　　8 分析结果的表述

　　试样中对香豆酸的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算：

　　犡 …………………………( 1 )

　　式中：

　　犡 —试样中对香豆酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　ρ —试样液中对香豆酸的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) ;

　　犞 —被测试样的总体积，单位为毫升(mL) ;

　　犿 —称取试样的质量，单位为克(g) ;

　　1 000 — 换算系数。

　　计算结果以重复性条件下获得的 3 次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

　　9 精密度

　　9 . 1 一般规定

　　本文件的精密度按照 GB/T 6379 . 2 的规定确定，重复性和再现性的值以 95%的可信度来计算。

　　GB/T 40833—202 1

　　9 . 2 重复性

　　在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。

　　9 . 3 再现性

　　在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　色 谱 图

　　图 A. 1 为对香豆酸标准溶液的色谱图。 图 A. 2 为甘蔗皮渣粗提物的色谱图。

　　图 A.1 对香豆酸标准溶液的色谱图

　　图 A.2 甘蔗皮渣粗提物的色谱图