GB/T 20771-2008 蜂蜜中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 67 . 050 X 04

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 20771—2008部分代替 GB/T 20771—2006

　　蜂蜜中 486 种农药及相关化学品

　　残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　Determination of486 pesticidesand related chemicalsresidues

　　in honey—LC-MS-MS method

　　2008-12-31 发布 2009-05-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 20771—2008

　　目 次

　　前言 Ⅰ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 原理 1

　　4 试剂和材料 1

　　5 仪器 2

　　6 试样制备与保存 2

　　7 测定步骤 2

　　8 结果计算 5

　　9 精密度 6

　　附录A(资料性附录) 486 种农药及相关化学品中英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合

　　标准溶液浓度表 7

　　附录 B(资料性附录) 486 种农药及相关化学品监测离子对 、碰撞气能量 、去簇电压和保留时间 22

　　附录 C(资料性附录) 486 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图 38

　　附录 D(资料性附录) 486 种农药及相关化学品精密度数据表 56

　　附录 E(资料性附录) 486 种农药及相关化学品英文中文名称对照索引(按英文字母顺序) 71

　　GB/T 20771—2008

　　前 言

　　本标准部分代替 GB/T 20771—2006《蜂蜜 、果汁和果酒中 420 种农药多残留测定方法 液相色谱-串联质谱法》。

　　本标准与 GB/T 20771—2006 相比，主要变化如下：

　　— 把蜂蜜的测定 方 法 从 GB/T 20771—2006 中 分 离 出 来，修 订 为 本 标 准，并 重 新 确 定 了 标 准名称;

　　— 可测定的农药品种由 420 种增加到 486 种，增加了 ESI 负源和 APCI 正负源检测的农药品种;

　　— 优化了前处理方法和增加了 ESI 负源和 APCI 正负源测试条件 。

　　本标准的附录 A 、附录 B、附录 C、附录 D、附录 E 为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归 口 。

　　本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 、山东农业大学 、河北大学 。

　　本标准主要起 草 人：庞 国 芳 、李 岩 、范 春 林 、连 玉 晶 、赵 淑 军 、郑 军 红 、刘 永 明 、曹 彦 忠 、张 进 杰 、李学民 。

　　本标准于 2006 年首次发布 。

　　Ⅰ

　　GB/T 20771—2008

　　蜂蜜中 486 种农药及相关化学品

　　残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　1 范围

　　本标准规定了洋槐蜜 、油菜蜜 、椴树蜜 、荞麦蜜 、枣花蜜中 486 种农药及相关化学品(参见附录 A 和附录 E)残留量液相色谱-串联质谱测定方法 。

　　本标准适用于洋槐蜜 、油菜蜜 、椴树蜜 、荞麦蜜 、枣花蜜中 486 种农药及相关化学品残留的定性鉴别，也适用于 461 种农药及相关化学品残留量的定量测定 。

　　本标准定量测定 的 461 种 农 药 及 相 关 化 学 品 方 法 检 出限 为 0 . 01 μg/kg ~ 3 . 34 mg/kg(参 见 附录 A) 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 6379 . 1 测 量 方 法 与结 果 的 准 确度( 正 确度 与 精 密 度 ) 第 1 部 分：总 则 与 定 义(GB/T 6379 . 1—2004 , ISO 5725-1 : 1994 , IDT)

　　GB/T 6379 . 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第 2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379 . 2—2004 , ISO 5725-2 : 1994 , IDT)

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008 , ISO 3696 : 1987 , MOD)

　　3 原理

　　试样用二氯甲烷提取，经固相萃取柱净化，用乙腈+甲苯(3+1)洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量 。

　　4 试剂和材料

　　水为 GB/T 6682 规定的一级水 。

　　4 . 1 乙腈：色谱纯 。

　　4 . 2 丙酮：色谱纯 。

　　4 . 3 甲苯：优级纯 。

　　4 . 4 异辛烷：色谱纯 。

　　4 . 5 正己烷：色谱纯 。

　　4 . 6 甲醇：色谱纯 。

　　4 . 7 二氯甲烷：色谱纯 。

　　4 . 8 微孔过滤膜(尼龙)：13 mm×0 . 2 μm 。

　　4 . 9 Sep-Pak 氨基固相萃取柱：1 g , 6 mL或相当者 。

　　4 . 10 0 . 05%甲酸溶液(体积分数)。

　　4 . 1 1 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0 . 375 g 乙酸铵加水稀释至 1 000 mL 。

　　4 . 12 乙腈+甲苯(3+1 , 体积比)。

　　1

　　GB/T 20771—2008

　　4 . 13 乙腈+水(3+2 , 体积比)。

　　4 . 14 无水硫酸钠：分析纯 。用前在 650 ℃灼烧 4 h ,贮于干燥器中，冷却后备用 。

　　4 . 15 农药及相关化学品标准物质：纯度 ≥95% 。

　　4 . 16 农药及相关化学品标准溶液

　　4 . 16 . 1 标准储备溶液

　　分别称取 5 mg ~ 10 mg(精确至 0 . 1 mg)农药及相关化学品各标准物分别于 10 mL容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇 、甲苯 、丙酮 、乙腈或异辛烷溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录 A) ,标准储备溶液避光 0 ℃ ~ 4 ℃保存，可使用一年 。

　　4 . 16 . 2 混合标准溶液(混合标准溶液 A 、B、C、D、E 、F、G 、H 和 I)

　　按照农药及相关化学品的保留时间，将 486 种农药及相关化学品分成 A 、B、C、D、E 、F、G 、H 、I 九个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度 。本标准对486 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录 B 。

　　依据每种农药及相关化学品的分组 、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于 100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 。混合标准溶液避光 0 ℃ ~ 4 ℃保存，可使用一个月 。

　　4 . 16 . 3 基质混合标准工作溶液

　　农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 A 、B、C、D、E 、F、G 、H 和 I ,用于做标准工作曲线 。

　　基质混合标准工作溶液应现用现配 。

　　5 仪器

　　5 . 1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 。

　　5 . 2 分析天平：感量 0 . 1 mg 和 0 . 01 g 。

　　5 . 3 鸡心瓶：200 mL 。

　　5 . 4 移液器：1 mL 。

　　5 . 5 样品瓶：2 mL,带聚四氟乙烯旋盖 。

　　5 . 6 具塞三角瓶：250 mL 。

　　5 . 7 分液漏斗：250 mL 。

　　5 . 8 筒形漏斗 。

　　5 . 9 旋转蒸发仪 。

　　5 . 10 氮气吹干仪 。

　　6 试样制备与保存

　　6 . 1 试样的制备

　　对无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀 。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60 ℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温 。分出 0 . 5 kg 作为试样，置于样品瓶中，密封，并标明标记 。

　　6 . 2 试样的保存

　　将试样置于常温下保存 。

　　7 测定步骤

　　7 . 1 提取

　　称取 15 g试样(精确至 0 . 01 g)于 250 mL 具塞三角瓶中，加入 20 mL 水，于 40 ℃水浴振荡溶解

　　2

　　GB/T 20771—2008

　　15 min 。加入 10 mL丙酮，然后将瓶中内容物移入 250 mL 分液漏斗中 。用 40 mL 二氯甲烷分数次洗涤三角瓶，并将洗液倒入分液漏斗中，小心排气，用力振摇数次，静置分层，将下层有机相通过装有无水硫酸钠的筒形漏斗，收集于 200 mL鸡心瓶中 。再加入 5 mL丙酮和 40 mL二氯甲烷于分液漏斗中，振摇 1 min,静置 、分层后收集 。如此重复提取两次，合并两次提取液，将提取液于 40 ℃水浴旋转蒸发至约 1 mL , 待净化 。

　　7 . 2 净化

　　在 Sep-Pak 氨基固相萃取柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠，放入下接鸡心瓶的固定架上 。加样前先用 4 mL 乙腈+甲苯(3+1)预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品提取液转移至净化柱上，更换新鸡心瓶接收 。用 2 mL 乙腈+ 甲苯(3+1) 洗涤样液瓶，重复三 次，合 并 洗 液，将 洗 液 移 入 柱 中 。在固相萃取柱上加上 50 mL贮液器，用 25 mL 乙腈+甲苯(3+1) 洗脱农药及相关化学品，合并于鸡心瓶中，在 40 ℃水浴中旋转浓缩至约 0 . 5 mL , 氮气吹干，1 mL 乙腈+水(3+2)溶解残渣，用 0 . 2 μm 滤膜过滤后，用于液相色谱-串联质谱仪测定 。

　　7 . 3 液相色谱-串联质谱测定7 . 3 . 1 条件

　　7 . 3 . 1 . 1 A 、B、C、D、E 、F组农药及相关化学品 LC-MS-MS测定条件

　　a) 色谱柱：Atlantis T3 , 3 μm , 150 mm × 2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 1 ;

　　表 1 流动相及梯度洗脱条件

　　时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(0 . 05%甲酸水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　4 . 00

　　200

　　50 . 0

　　50 . 0

　　15 . 00

　　200

　　40 . 0

　　60 . 0

　　23 . 00

　　200

　　20 . 0

　　80 . 0

　　30 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　35 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　35 . 01

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　50 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：20 μL ;

　　e) 离子源：ESI ;

　　f) 扫描方式：正离子扫描;

　　g) 检测方式：多反应监测;

　　h) 电喷雾电压：5 000 V ;

　　i) 雾化气压力：0 . 483 MPa ;

　　j) 气帘气压力：0 . 138 MPa ;

　　k) 辅助加热气：0 . 379 MPa ;

　　l) 离子源温度：725 ℃ ;

　　m) 监测离子对 、碰撞气能量和去簇电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 1 . 2 G组农药及相关化学品 LC-MS-MS测定条件

　　a) 色谱柱：Inert sil C8 , 5 μm , 150 mm × 2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 2 ;

　　3

　　GB/T 20771—2008

　　表 2 流动相及梯度洗脱条件

　　时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(5 mmol/L 乙酸铵水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　4 . 00

　　200

　　50 . 0

　　50 . 0

　　15 . 00

　　200

　　40 . 0

　　60 . 0

　　20 . 00

　　200

　　20 . 0

　　80 . 0

　　25 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　32 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　32 . 01

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　40 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：20 μL ;

　　e) 离子源：ESI ;

　　f) 扫描方式：负离子扫描;

　　g) 检测方式：多反应监测;

　　h) 电喷雾电压：-4 200 V ;

　　i) 雾化气压力：0 . 42 MPa ;

　　j) 气帘气压力：0 . 315 MPa ;

　　k) 辅助加热气：0 . 35 MPa ;

　　l) 离子源温度：700 ℃ ;

　　m) 监测离子对 、碰撞气能量和去簇电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 1 . 3 H 组农药及相关化学品 LC-MS-MS测定条件

　　a) 色谱柱：Atlantis T3 , 5 μm , 150 mm × 4 . 6 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 3 ;

　　表 3 流动相及梯度洗脱条件

　　时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(5 mmol/L 乙酸铵水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0 . 00

　　500

　　80 . 0

　　20 . 0

　　2 . 00

　　500

　　5 . 0

　　95 . 0

　　10 . 00

　　500

　　5 . 0

　　95 . 0

　　10 . 01

　　500

　　80 . 0

　　20 . 0

　　20 . 00

　　500

　　80 . 0

　　20 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：20 μL ;

　　e) 离子源：APCI ;

　　f) 扫描方式：正离子扫描;

　　g) 检测方式：多反应监测;

　　h) 雾化气压力：0 . 56 MPa ;

　　i) 气帘气压力：0 . 133 MPa ;

　　j) 辅助加热气：0 . 28 MPa ;

　　k) 离子源温度：400 ℃ ;

　　4

　　l) 监测离子对 、碰撞气能量和去簇电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 1 . 4 I组农药及相关化学品 LC-MS-MS测定条件

　　a) 色谱柱：Atlantis T3 , 5 μm , 150 mm×4 . 6 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 4 ;

　　表 4 流动相及梯度洗脱条件

　　时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(5 mmol/L 乙酸铵水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0 . 00

　　500

　　80 . 0

　　20 . 0

　　2 . 00

　　500

　　5 . 0

　　95 . 0

　　10 . 00

　　500

　　5 . 0

　　95 . 0

　　10 . 01

　　500

　　80 . 0

　　20 . 0

　　20 . 00

　　500

　　80 . 0

　　20 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：20 μL ;

　　e) 离子源：APCI ;

　　f) 扫描方式：负离子扫描;

　　g) 检测方式：多反应监测;

　　h) 雾化气压力：0 . 42 MPa ;

　　i) 气帘气压力：0 . 084 MPa ;

　　j) 辅助加热气：0 . 28 MPa ;

　　k) 离子源温度：425 ℃ ;

　　l) 监测离子对 、碰撞气能量和去簇电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 1 . 5 定性测定

　　在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度 >50%,允许 ±20%偏 差;相 对 丰 度 >20% ~ 50%,允 许 ±25%偏 差;相 对 丰 度 >10% ~ 20%,允许 ±30%偏差;相对丰 度 ≤10%,允 许 ±50%偏 差)，则 可 判 断 样 品中 存 在 这 种 农 药 或 相 关 化学品 。

　　7 . 3 . 1 . 6 定量测定

　　本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定 。 为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内 。486 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图参见附录 C 。

　　7 . 4 平行试验

　　按以上步骤对同一试样进行平行试验 。

　　7 . 5 空白试验

　　除不称取试样外，均按上述步骤进行 。

　　8 结果计算

　　液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式(1)计算：

　　xi = ci …………………………( 1 )

　　式中：

　　xi— 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(μg/kg) ;

　　5

　　GB/T 20771—2008

　　ci— 从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

　　V— 样品溶液定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　m— 样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g) 。

　　计算结果应扣除空白值 。

　　9 精密度

　　本标准精密度数据是按照 GB/T 6379 . 1 和 GB/T 6379 . 2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以 95%的可信度来计算 。本标准方法的精密度数据参见附录 D 。

　　6

　　GB/T 20771—2008

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　486 种农药及相关化学品中英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度表

　　486 种农药及 相 关 化 学 品 中 英 文 名 称 、方 法 检 出限 、分 组 、溶 剂 选 择 和 混 合 标 准 溶 液 浓 度 表 见表 A. 1 。

　　表 A.1 486 种农药及相关化学品中英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂和混合标准溶液浓度表

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　检出限/ (μg/kg)

　　溶 剂

　　混合标准溶液浓度/(μg/L)

　　A组

　　1

　　苯胺灵

　　propham

　　13 . 70

　　甲苯

　　734 . 00

　　2

　　异丙威

　　isoprocarb

　　0 . 14

　　甲醇

　　54 . 00

　　3

　　3 , 4 , 5-混杀威

　　3 , 4 , 5-trimethacarb

　　0 . 03

　　甲醇

　　4 . 00

　　4

　　环莠隆

　　cycluron

　　0 . 04

　　甲醇

　　6 . 00

　　5

　　甲萘威

　　carbaryl

　　0 . 34

　　甲醇

　　30 . 00

　　6

　　毒草胺

　　propachlor

　　0 . 04

　　甲醇

　　14 . 00

　　7

　　吡咪唑

　　rabenzazole

　　0 . 22

　　甲醇

　　32 . 00

　　8

　　西草净

　　simetryn

　　0 . 02

　　甲醇

　　6 . 00

　　9

　　绿谷隆

　　monolinuron

　　0 . 20

　　甲苯

　　68 . 00

　　10

　　速灭磷

　　mevinphos

　　0 . 15

　　甲苯

　　64 . 00

　　11

　　叠氮津

　　aziprotryne

　　0 . 19

　　甲醇

　　28 . 00

　　12

　　密草通

　　secbumeton

　　0 . 01

　　甲醇

　　4 . 00

　　13

　　嘧菌磺胺

　　cyprodinil

　　0 . 08

　　甲醇

　　12 . 00

　　14

　　播土隆

　　buturon

　　0 . 67

　　甲醇

　　40 . 00

　　15

　　双酰草胺

　　carbetamide

　　0 . 57

　　甲醇

　　32 . 00

　　16

　　抗蚜威

　　pirimicarb

　　0 . 03

　　甲醇

　　6 . 00

　　17

　　异 噁草酮

　　clomazone dimethazone