GB/T 31270.17-2014 化学农药环境安全评价试验准则 第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验

　　ICS 65. 100 B 13

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 31270. 17—2014

　　化学农药环境安全评价试验准则

　　第 17部分 :天敌赤眼蜂急性毒性试验

　　Testguidelineson environmentalsafety assessmentforchemicalpesticides—

　　Part17:Trichogramma acutetoxicitytest

　　2014-10-10发布 2015-03-11 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　发

　　布

　　GB/T 31270. 17—2014

　　前 言

　　GB/T 31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为 21个部分 :

　　— 第 1部分 :土壤降解试验 ;

　　— 第 2部分 :水解试验 ;

　　— 第 3部分 :光解试验 ;

　　— 第 4部分 :土壤吸附/解吸试验 ;

　　— 第 5部分 :土壤淋溶试验 ;

　　— 第 6部分 :挥发性试验 ;

　　— 第 7部分 :生物富集试验 ;

　　— 第 8部分 :水-沉积物系统降解试验 ;

　　— 第 9部分 :鸟类急性毒性试验 ;

　　— 第 10部分:蜜蜂急性毒性试验 ;

　　— 第 11部分 :家蚕急性毒性试验 ;

　　— 第 12部分 :鱼类急性毒性试验 ;

　　— 第 13部分 :溞类急性活动抑制试验 ;

　　— 第 14部分 :藻类生长抑制试验 ;

　　— 第 15部分 :蚯蚓急性毒性试验 ;

　　— 第 16部分 :土壤微生物毒性试验 ;

　　— 第 17部分 :天敌赤眼蜂急性毒性试验 ;

　　— 第 18部分 :天敌两栖类急性毒性试验 ;

　　— 第 19部分 :非靶标植物影响试验 ;

　　— 第 20部分 :家畜短期饲喂毒性试验 ;

　　— 第 21部分 :大型甲壳类生物毒性试验 。

　　本部分是 GB/T 31270的第 17部分 。

　　本部分按照 GB/T 1. 1—2009给出的规则起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。

　　本部分由中华人民共和国农业部提出并归 口 。

　　本部分负责起草单位 :农业部农药检定所 、环保部南京环境科学研究所 。

　　本部分主要起草人 :林荣华 、陈红英 、王红 、韩志华 、张燕宁 、余向阳 、薛明 、吴若涵 。

　　化学农药环境安全评价试验准则

　　第 17部分 :天敌赤眼蜂急性毒性试验

　　1 范围

　　GB/T 31270的本部分规定了化学农药对赤眼蜂成蜂急性毒性试验的材料 、条件 、操作 、质量控制 、数据处理 、试验报告等的基本要求 。

　　本部分适用于为化学农药登记而进行的赤眼蜂成蜂急性毒性试验 ,其他类型的农药可参照使用 。本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药 。

　　2 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　2. 1

　　半致死用量 median lethalrate

　　在急性毒性试验中 ,引起 50%供试生物死亡时的供试物使用量 ,用 LR50表示 。

　　注 : 单位为 mg a.i./cm2 , 即单位面积上所附着的供试物有效成分的量 。

　　2.2

　　安全系数 safety factor

　　赤眼蜂的半致死用量 LR50与供试农药的田间推荐施用浓度的比值 ,可用式(1)表示 :

　　药物对赤眼蜂的 LR (mg ai/cm2 )

　　2.3

　　供试物 testsubstance

　　试验中需要测试的物质 。

　　2.4

　　化学农药 chemicalpesticide

　　利用化学物质人工合成的农药 。其中有些以天然产品中的活性物质为母体 ,进行仿制 、结构改造 ,创新而成 ,为仿生合成农药 。

　　同义词 :有机合成农药 synthetic organic pesticide。

　　[NY/T 1667. 1—2008,定义 2. 3. 1] 2.5

　　原药 technicalmaterial

　　在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物 ,必要时可加入少量的稳定剂 。

　　[NY/T 1667. 2—2008,定义 2. 5. 1] 2.6

　　制剂 formulation product

　　由农药原药(或母药)和助剂制成使用状态稳定的产品 。

　　[NY/T 1667. 2—2008,定义 2. 4]

　　GB/T 31270. 17—2014

　　2.7

　　有效成分 active ingredient;a.i.

　　农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分 。

　　[NY/T 1667. 2—2008,定义 3. 1]

　　3 试验概述

　　将供试物用丙酮等溶剂配制成系列不同浓度的稀释液 ,定量加入指形管中滚吸成药膜管 ,然后将试验用赤眼蜂放入其中爬行 1 h后转入无药指形管 ,24 h后调查管中的死亡和存活蜂数 。求出农药对赤眼蜂的 LR50值和 95%置信限 。

　　4 试验方法

　　4. 1 材料和条件

　　4. 1. 1 供试生物

　　选择松毛虫赤眼蜂(Trichogrammadendrolimi) 、玉米螟赤眼蜂(Trichogrammaostriniae) 、稻螟赤眼蜂 (Trichogrammajaponicum) 、广 赤 眼 蜂 (Trichogramma evanescens) 、拟 澳 洲 赤 眼 蜂 (Tri- chogrammaconfusum)或舟蛾赤眼蜂(Trichogrammaclosterae)等的其中一种进行试验 。

　　4. 1.2 供试寄主生物

　　柞蚕(Antheraea pernyi)卵或米蛾(Corcyra cephalonica)卵 。

　　4. 1.3 供试物

　　农药制剂 、原药或纯品 。制剂用蒸馏水溶解 ,原药或纯品用丙酮等溶剂溶解 。

　　4. 1.4 主要仪器设备

　　主要仪器设备如下 :

　　— 指形管 ;

　　— 人工气候箱 ;

　　— 移液器 ;

　　— 容量瓶等 。

　　4. 1.5 试验条件

　　试验应在温度 25 ℃ ±2 ℃ 、相对湿度 70% ~ 80%、避光条件下进行 。

　　4.2 试验操作

　　4.2. 1 试验用成蜂的预培养

　　将被寄生的寄主卵置于温度 25℃ ±2℃ 、相对湿度 50% ~ 80%、避光条件下培养 ,羽化出的成蜂用于急性毒性试验 。试验 成 蜂 应 来 源 于 同 一 时 间 、同 一 批 次 的 寄 生 卵 。 大 量 出 蜂 一 般 在 开 始 羽 化 后 的24h左右 ,试验应使用开始羽化后 48h 内羽化的成蜂 。

　　4.2.2 预试验

　　按正式试验的条件 , 以较大的间距设置 4个 ~ 5个浓度组 ,求出试验用赤眼蜂最高全存活剂量与最低全致死剂量 , 以确定正式试验的用药剂量范围 。

　　4.2.3 正式试验

　　根据预试验结果 ,正式试验按等比关系设置至少 5个梯度浓度(几何级差应控制在 2. 2倍以内) ,并设空白对照组 ,用溶剂溶解的还需设溶剂对照组 ,对照组和每个处理组均设 3个重复 ,每个重复 100头 ± 10头赤眼蜂 。在指形管中加入定量的供试药液 ,将药液在指形管中充分滚吸直至晾干制成药膜管 ,然后将供试赤眼蜂放入药膜管中爬行 1 h后转入无药指形管中 ,饲喂 10%蜂蜜水 ,并封紧管 口 。对照组的成蜂数量与处理组相同 ,对照组与处理组应同时进行 。在转入无药指形管中 24h后检查并记录管中死亡和存活蜂数 。

　　4.2.4 限度试验

　　设置上限剂量为供试物田间施用量的 10倍 。若试验用赤眼蜂在供试物达到上限用量时未出现死亡 ,则无需继续试验 ;若供试物溶解度小于田间施用量的 10倍时 ,则采用其最大溶解度作为上限浓度 。

　　4.3 数据处理

　　4.3. 1 统计分析方法的选择

　　LR50 的计算可采用直线内插法 、概率单位图解法或机率值法估算 ,也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算 。

　　4.3.2 寇氏法

　　用寇氏法可求出赤眼蜂在 24h 的 LR50值及 95%置信限 。LR50 的计算见式(2) :

　　logLR50 = Xm -i(∑P - 0. 5) …………………………( 2 )

　　式中 :

　　Xm — 最高浓度的对数 ;

　　i — 相邻浓度比值的对数 ;

　　SlogLR50 =i …………………………( 4 )

　　式中 :

　　p — 1个组的死亡率 ;

　　q — 1-p;

　　n — 各浓度组赤眼蜂的数量 。

　　4.3.3 直线内插法

　　采用线性刻度坐标 ,绘制死亡百分率对试验物质浓度的曲线 ,求出 50%死亡时的 LR50值 。

　　4.3.4 概率单位图解法

　　用半对数纸 , 以浓度对数为横坐标 、死亡百分率对应的概率单位为纵坐标绘图 。将各实测值在图上用目测法画一条相关直线 ,从直线中读出致死 50%的浓度对数 ,估算出 LR50值 。

　　4.4 质量控制

　　试验结束时 ,对照组死亡率不超过 10% 。

　　5 试验报告

　　试验报告至少应包括下列内容 :

　　— 供试物的信息 , 包括供试农药的通用名 、化学名称 、结构式 、CAS号 、纯度 、基 本 理 化 性 质 、来源等 ;

　　— 供试生物的名称 、来源 、培养方法 ;

　　— 试验条件 ,包括试验温度 、湿度 、光照等 ;

　　— 试验药液的浓度 ,LR50 (24h)值和 95%置信限 ,并给出所采用的计算方法 ;

　　— 对照组赤眼蜂是否出现死亡及异常反应 ;

　　— 试验质量控制条件描述 ;

　　— 农药对赤眼蜂的毒性登记划分参见附录 A。

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　农药对赤眼蜂风险等级划分

　　按安全系数评价农药对赤眼蜂的安全性 ,将农药对赤眼蜂的风险分为四级 ,见表 A. 1。

　　表 A. 1 农药对赤眼蜂的风险性等级划分

　　参 考 文 献

　　[1] NY/T 1667. 1—2008 农药登记管理术语 第 1 部分 :基本术语

　　[2] NY/T 1667. 2—2008 农药登记管理术语 第 2 部分 :产品化学

　　[3] USEPA (2012) . Honeybeeacutecontacttoxicitytest(OCSPP 850. 3020) . Ecologicaleffects testguidelines.

　　[4] OECD (1998b) Guideline214: Honeybees, acute contacttoxicity test,OECD Guidelines for the Testing ofChemicals.

　　[5] 蔡道基 . 农药环境毒理学研究 . 北京 : 中国环境科学出版社 . 1999.