GB/T 40835-2021 畜禽饲料安全评价 反刍动物饲料瘤胃降解率测定 牛饲养试验技术规程

　　ICS 65 . 120 CCS B 46

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 40835—2021

　　畜禽饲料安全评价

　　反刍动物饲料瘤胃降解率测定

　　牛饲养试验技术规程

　　Feedsafetyevaluation—

　　Determinationofrumendegradationofruminantfeedstuffs—

　　Codeofpracticeinfeedingtrailofcattle

　　2021-10-1 1 发布 2022-05-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 40835—202 1

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)提出并归口 。

　　本文件起草单位：中国农业大学、扬州大学、上海奶牛研究所有限公司、江苏农牧科技职业学院。

　　本文件主要起草人：赵国琦、林淼、张丽英、詹康、曹志军、苏衍菁、张宜辉、霍永久、程秀花、陈明。

　　GB/T 40835—202 1

　　畜禽饲料安全评价

　　反刍动物饲料瘤胃降解率测定

　　牛饲养试验技术规程

　　1 范围

　　本文件确立了畜禽饲料安全性评价中用于反刍动物饲料瘤胃降解率测定的牛饲养试验技术要求，并规定了试验方案设计、饲粮配制、试验实施、试验报告和资料存档等阶段操作指引。

　　本文件适用于植物性饲料原料和饲料产品的瘤胃降解率测定的牛饲养试验。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注 日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB 13078 饲料卫生标准

　　GB/T 14699 . 1 饲料 采样

　　GB/T 20195 动物饲料 试样的制备

　　NY/T 34 奶牛饲养标准

　　NY/T 388 畜禽场环境质量标准

　　NY/T 815 肉牛饲养标准

　　NY 5047 无公害食品 奶牛饲养兽医防疫准则

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 试验程序的构成

　　牛饲养试验程序包括 4 个阶段，分别为试验方案设计、饲粮配制、试验实施和试验报告。

　　5 试验程序

　　5 . 1 试验方案设计

　　5 . 1 . 1 试验方案组成

　　饲养试验开始前，依据待测饲料样品的种类和数量确定试验方案。 试验方案包括试验动物及其免疫方案，试验分组、试验期、饲粮配方、尼龙袋的制作与固定方法、尼龙袋装样和在瘤胃中培养时间、检测指标和方案确认。

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　　5 . 1 . 2 试验动物及免疫方案

　　5 . 1 . 2 . 1 确定试验牛的信息。 包括牛的品种、年龄、性别、体重、生理状态，要求生产性能相近，健康状况良好。一般使用 2~5 岁的成年牛。

　　5 . 1 . 2 . 2 根据试验目的和要求，试验牛的免疫应按 NY 5047 的规定执行。

　　5. 1 .2.3 试验牛由专业人员实施瘤胃手术，安装永久性瘤胃瘘管，且瘘管内径应大于或等于 100 mm。待瘘管牛恢复正常生理状态后使用。

　　5 . 1 . 3 试验分组

　　5 . 1 . 3 . 1 采用 4 头瘤胃瘘管牛，或根据具体要求准备足够数量的瘘管牛。

　　5 . 1 . 3 . 2 每个待测饲料样品的每一个培养时间点至少设 4 个重复，每个重复至少用 1 头牛。

　　5 . 1 . 4 试验期

　　试验应设预试期和正试期。预试期 15 d。正试期的时间根据试验要求进行确定。

　　5 . 1 . 5 饲粮配方

　　根据 NY/T 34 或 NY/T 815 的饲养标准配制饲粮。饲粮的精料粗料比例(%)为 40 ∶ 60,按照维

　　持营养需要水平的 1 . 3 倍量进行饲喂。 有其他要求的，应根据试验 目 的确定饲料配方及饲喂量。 饲粮中不应添加任何影响牛瘤胃功能、内环境的成分。

　　5 . 1 . 6 尼龙袋的制作与固定方法

　　5. 1 .6. 1 用孔径为 50 μm 的尼龙布，制成长和宽为 12 cm×8 cm 的尼龙袋，袋底部两角呈钝圆形。

　　5 . 1 . 6 . 2 用涤纶线双线缝合尼龙袋。 用瘤胃内不易溶解的胶黏剂弥合针孔。 散边用电烙铁烫焦或用酒精灯烤焦。

　　5. 1 .6.3 用在瘤胃内不褪色的墨水对尼龙袋编号。新尼龙袋应在瘤胃内培养 72 h,取出、洗净、65 ℃烘干至恒重后方可使用。 尼龙袋可重复使用但不超过 3 次 。

　　5. 1 .6.4 固定尼龙袋的塑料半软管，直径为 0.5 cm~0.8 cm,长度为 50 cm。在塑料半软管的一端距顶端 1 cm~2 cm 处沿管切透 3 cm 的夹缝，用于穿过夹缝固定尼龙袋。在另一端距顶端 1 cm~2 cm 处打孔，用于与瘤胃瘘管盖的固定。

　　5 . 1 . 7 尼龙袋装样和在瘤胃中培养时间

　　5. 1 .7. 1 饲料样品按照 GB/T 14699. 1 的规定采集样品，缩分至 200 g 左右，进行风干处理，再按照GB/T 20195 规定制备试样，粉碎通过 2.5 mm 筛孔，置于样品瓶内，清洁干燥处保存，备用。

　　5. 1 .7.2 精饲料样品每个尼龙袋装 4.5 g~5.5 g,粗饲料样品每个尼龙袋装 2.0 g~3.0 g。每个培养时间待测样品至少做 2 个平行。

　　5. 1 .7.3 试验饲料瘤胃降解时间应根据饲料的种类具体确定。精饲料的培养时间为 0 h、2 h、4 h、8 h、 16 h 、24 h 、30 h 、36 h 和 48 h。 粗饲料的培养时间为 0 h 、4 h 、8 h 、16 h 、24 h 、30 h 、36 h 、48 h 和 72 h。

　　5 . 1 . 8 检测指标

　　5 . 1 . 8 . 1 根据饲料样本特性及评价目的确定测定指标，包括饲料干物质、有机物、粗蛋白质、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维等。 其他指标可以根据试验具体要求而定。

　　5 . 1 . 8 . 2 根据评价指标确定适宜、可靠的检测方法。 检测方法优先采用国家标准、行业标准、国际标准或国际公认方法。

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　　5 . 1 . 9 试验方案的确认

　　试验设计完成后，形成书面试验方案，且应经试验负责人签字确认。

　　5 . 2 饲粮配制

　　5 . 2 . 1 根据国家标准或其他相关规定选择饲料原料和饲料产品，饲料原料应符合 GB 13078 要求。 按照试验方案确定的配方和工艺进行试验饲粮的配制。 试验饲粮在配制、贮运过程中避免受到污染或成分含量的变化。

　　5 . 2 . 2 试验饲粮为全混合饲粮(TMR) 。如果有特殊要求，按照要求配制。

　　5 . 2 . 3 根据饲料样本的特性及要求确定饲粮加工方法、料型、粒度等。

　　5 . 2 . 4 按照 GB/T 14699 . 1 采集配制的试验饲粮样品，根据国家或行业标准所规定的方法测定相关营养成分含量，证实配制的试验饲粮符合配方设计要求。

　　5 . 3 试验实施

　　5 . 3 . 1 牛的饲养

　　5 . 3 . 1 . 1 试验开始前，检查、安装和调试饲养设施及设备，确保其性能的完好。 使用前 1 周对饲养设备设施及圈舍进行彻底的清理、消毒。

　　5 . 3 . 1 . 2 按照 NY/T 388 和/或相应的品种饲养管理手册，设置牛舍温度、湿度、照度等环境参数;如试验目的有特殊要求，按相关要求设定。

　　5 . 3 . 1 . 3 根据试验目的选择适宜的饲养方式，拴系或散放饲养;根据牛的品种、生理和生产性能等确定适宜的饲养密度。 如有其他要求，可根据相关要求确定。

　　5 . 3 . 1 . 4 试验开始时，试验牛初始体重、生产性能等指标相近。

　　5 . 3 . 1 . 5 免疫措施应不干扰受试饲料样本的饲喂效果。

　　5 . 3 . 1 . 6 在预试期和正试期内，不应更换日粮，不进行免疫、治疗，或其他可能干扰消化机能的措施。

　　5.3. 1 .7 按照不同品种牛的饲养管理程序开展日常饲养管理。每天饲喂 2~3 次，自由饮水。

　　5 . 3 . 1 . 8 试验结束后对牛体瘘管周围、牛舍及设施设备进行彻底清洗、消毒。

　　5 . 3 . 2 临床观察与记录

　　5 . 3 . 2 . 1 试验期内每天观察试验牛的精神状态、采食和饮水情况，瘘管及瘘管周围情况，记录生理异常或病变等情况。

　　5 . 3 . 2 . 2 准确称量每天饲料供给量和剩料量。

　　5 . 3 . 2 . 3 除了生产性能外，还应针对特异性指标采集相关样本。

　　5 . 3 . 2 . 4 饲料降解率测定的饲养试验完成后，进行分析样本的制备，为样本分析和数据采集阶段做准备。

　　5 . 3 . 2 . 5 在牛饲养试验过程中，逐一记录试验方案所涉及的所有事项;记录应真实、准确、完整、规范、清晰，不得涂改，可以以删除线删除，试验记录要妥善保管并存档。

　　5 . 3 . 2 . 6 试验实施过程中，牛个体和各处理组若发生非预期的突发情况，记录其发生的时间和波及范围。

　　5 . 3 . 3 瘤胃尼龙袋样品的处理

　　5 .3 .3 . 1 进入试验期后，在早晨饲喂前 1 h,打开瘤胃瘘管盖，将尼龙袋通过瘤胃瘘管放入瘤胃中，尼龙

　　袋应始终浸于瘤胃内容物中。 用塑料半软管把尼龙袋固定于瘤胃瘘管盖上。 开始记录投放后尼龙袋在

　　瘤胃内停留时间。

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　　5 . 3 . 3 . 2 根据投放尼龙袋后在瘤胃内停留时间，按照试验设计要求时间点取出尼龙袋。 每个时间点从每头牛瘤胃中取出 2 个尼龙袋，直至所有尼龙袋全部取出为止。

　　5 . 3 . 3 . 3 取出的尼龙袋应立即浸泡在冰水中，尽快用 自来水冲洗，在冲洗过程中可用手轻轻挤压，直至水清为止。

　　5 . 3 . 3 . 4 样品校正，另装 2 个尼龙袋，作为空白对照，不放入瘤胃内，直接按 5 . 3 . 3 . 3 处理。

　　5.3.3.5 将所有冲洗过的尼龙袋(连同饲料样品残余物)置于恒温干燥箱内 65 ℃下烘干至恒重。

　　5 . 3 . 3 . 6 样品与培养残余物完全转移至样品瓶中，待分析用。

　　5 . 4 试验报告

　　5 . 4 . 1 试验报告应提供试验获取的所有数据，包括所有试验动物和试验重复。 未纳入统计分析的数据或由于数据缺乏、数据丢失而无法评价的情况也应报告，并说明在各组别中的分布情况。

　　5 . 4 . 2 试验报告正文至少应包括：

　　a) 试验名称;

　　b ) 摘要 ;

　　c) 试验目的;

　　d) 受试物;

　　e) 试验时间和地点;

　　f) 试验材料和方法;

　　g) 结果与分析;

　　h ) 结论 ;

　　i ) 原始数据及相关的图表和照片，未纳入统计分析的数据或由于数据缺乏、数据丢失而无法评价的情况应具体说明;

　　j) 参考文献。

　　5 . 4 . 3 应对试验报告每页进行编码，格式为“第 页，共 页 ”，并加盖骑缝章，确保报告的完整性。

　　6 资料存档

　　试验完成后，试验机构将试验方案、试验报告(包括阶段性报告和最终报告)、原始记录、图表和照片、受试物样品及其检测报告等原始资料存档。