GB/T 26620-2011 钝吻黄盖鲽

　　ICS 65. 150 B 51

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 26620—2011

　　钝 吻 黄 盖 鲽

　　Marbled flounder

　　2011-06-16发布 2011-11-01实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T26620—2011

　　前 言

　　本标准的附录 A 为规范性附录 , 附录 B为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国农业部提出 。

　　本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归 口 。

　　本标准起草单位 : 中国水产科学研究院黄海水产研究所 、中国海洋大学 。

　　本标准主要起草人 :张岩 、陈四清 、刘曼红 、沙珍霞 、于东祥 。

　　Ⅰ

　　GB/T26620—2011

　　钝 吻 黄 盖 鲽

　　1 范围

　　本标准给出了钝吻黄盖鲽(Pseudopleuronectesyokohamae) 的主要形态构造特征 ﹑生长与繁殖 ﹑细胞遗传学特性 、生化遗传学特性及检测方法 。

　　本标准适用于钝吻黄盖鲽的种质检测与鉴定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件 ,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准 ,然而 ,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注日期的引用文件 ,其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 18654. 2 养殖鱼类种质检验 第 2部分 :抽样方法

　　GB/T 18654. 3 养殖鱼类种质检验 第 3部分 :性状测定

　　GB/T 18654. 12 养殖鱼类种质检验 第 12部分 :染色体组型分析

　　3 名称与分类

　　3. 1 学名

　　钝吻黄盖鲽 Pseudopleuronectesyokohamae(Günther)

　　3. 2 分类地位

　　隶属 于 鲽 形 目 (Pleuronectiformes) 、鲽 亚 目 (Pleuronectoidei) 、鲽 科 (Pleuronectidae) 、鲽 亚 科(Pleuronectinae) 、黄盖鲽属(Pseudopleuronectes) 。

　　4 主要形态特征

　　4. 1 外部形态特征

　　钝吻黄盖鲽体呈卵圆形 ,背腹缘凸度相似 。头部颇小 ,背面在上眼前缘上方有一凹刻 。 眼小 ,均在右侧 。 眼间隔颇窄隆起呈嵴状 , 被鳞 。 牙颇小而侧扁 , 顶端略呈截形 ,呈门牙状 ,基部粗壮 ,排列紧密 。下颌较长 ,突出于前 ;上颌后端终止于下眼的前缘稍后的下方 。有眼侧的前鼻孔接近上颌 ;无眼侧的前鼻孔后缘有一片状小瓣 ,后鼻孔仅为一大圆孔 。上鳃盖边缘略呈游离 。

　　鳞颇小 ,通常有眼侧为栉鳞 ,无眼侧为圆鳞 ,有时头部亦兼有弱栉鳞 。头部仅吻及上下颌无鳞 , 眼间隔满被小型栉鳞 。各鳍的鳍条均多少被鳞 。左右侧线同等发达 ,前部在胸鳍上方有一较低的弓状弯曲部 ,弯曲部中央至背鳍基底间有鳞 22行 ~ 26行 ,直线部起点处至背鳍基底间有鳞 32行 ~ 37行 ,侧线前方的颞上枝甚短 。

　　有眼侧为褐色或黄褐色 ,有时有大小不等的暗色斑纹散布体部 ,背鳍及臀鳍上有时亦有暗色斑纹 ,尾鳍后缘暗色或黑色 。钝吻黄盖鲽的外部形态见图 1。

　　4. 2 可数性状

　　4. 2. 1 背鳍鳍式 :D. 69~ 72

　　4. 2. 2 臀鳍鳍式 :A. 50~ 53

　　4. 2. 3 腹鳍鳍式 :V. 6

　　4. 2. 4 胸鳍鳍式 :P. 11

　　4. 2. 5 侧线鳞鳞式 :75~ 83

　　1

　　GB/T26620—2011

　　4. 2. 6 鳃耙数 :3~4+7

　　4. 2. 7 牙式 : (0+9~ 13)/(0~ 2+12~ 15)

　　图 1 钝吻黄盖鲽的外部形态

　　4. 3 可量性状

　　可量性状实测比值见表 1。

　　表 1 可量性状实测比值

　　项 目

　　比 值

　　项 目

　　比 值

　　体长/体高

　　2. 2~ 2. 4

　　头长/眼间距

　　11. 7~ 17. 6

　　体长/头长

　　4. 0~ 4. 4

　　头长/眼径

　　4~ 5. 7

　　头长/吻长

　　6. 2~ 7. 3

　　5 生长与繁殖

　　5. 1 生长

　　5. 1. 1 不同年龄组的体长与体重

　　渤海钝吻黄盖鲽不同年龄组的体长 、体重实测值见表 2。

　　表 2 渤海黄盖鲽不同年龄组的体长、体重实测值

　　项 目

　　1 龄

　　2 龄

　　3 龄

　　4龄

　　5 龄

　　体长/mm

　　153

　　212

　　255

　　288

　　318

　　体重/g

　　70

　　183

　　311

　　460

　　600

　　5. 1. 2 全长体重实测值

　　钝吻黄盖鲽全长与体重的实测值见表 3。钝吻黄盖鲽生长方程和体长体重关系参见附录 B。

　　表 3 钝吻黄盖鲽全长与体重的实测值

　　全长/cm

　　4. 2

　　4. 5

　　4. 6

　　4. 7

　　5. 1

　　5. 2

　　5. 4

　　5. 7

　　6. 0

　　6. 4

　　6. 6

　　体重/g

　　1. 6

　　1. 7

　　2

　　2. 1

　　2. 1

　　2. 2

　　2. 5

　　3. 3

　　3. 6

　　3. 9

　　4. 3

　　全长/cm

　　6. 7

　　7. 0

　　7. 2

　　8. 1

　　11. 2

　　12. 4

　　13. 0

　　13. 5

　　15. 1

　　15. 2

　　16. 2

　　体重/g

　　4. 8

　　5. 2

　　5. 5

　　7. 9

　　18. 0

　　24

　　26. 0

　　30. 0

　　36. 0

　　38. 0

　　48

　　全长/cm

　　16. 6

　　17. 2

　　17. 8

　　18. 6

　　18. 7

　　18. 8

　　19. 6

　　20. 5

　　体重/g

　　62

　　72

　　78

　　86

　　88

　　98

　　114

　　126

　　2

　　GB/T26620—2011

　　5. 2 繁殖

　　5. 2. 1 性成熟年龄

　　雄鱼 2 龄性腺开始成熟 ,雌鱼 3 龄性腺才开始成熟 。

　　5. 2. 2 产卵期

　　黄渤海黄盖鲽的繁殖季节在 3 月 至 5 月 ,4 月上旬为盛期 。一年性成熟一次 ,一次性产卵 。

　　5. 2. 3 繁殖力

　　钝吻黄盖鲽产卵个体的繁殖力波动在 14. 6×104 粒 ~ 204×104 粒 ,平均为 78. 25×104 粒 。

　　6 细胞遗传学特性

　　钝吻黄盖鲽的染色体核型(钝吻黄盖鲽染色体数目为)图(4)82,核。型为 2n=48t。

　　图 2 钝吻黄盖鲽染色体核型

　　7 生化遗传学特性

　　7. 1 同工酶图谱

　　钝吻黄盖鲽的异柠檬酸脱氢酶(IDHP)电泳图谱见图 3。

　　图 3 钝吻黄盖鲽异柠檬酸脱氢酶电泳图谱

　　7. 2 群体变异范围

　　钝吻黄盖鲽群体多态位点比例(P99)为 0. 235 3,杂合度观察值(Ho)为 0. 019 6,平均有效等位基因数(Ne)为 0. 018 1。

　　8 检测方法

　　8. 1 抽样方法

　　抽样方法按照 GB/T 18654. 2 的规定执行 。

　　8. 2 性状测定

　　性状测定按照 GB/T 18654. 3 的规定执行 。

　　3

　　GB/T26620—2011

　　8. 3 繁殖力的测定

　　用天平或杆秤称产卵前 、后雌亲鱼的重量 ,前后两次称重之差即为产卵的重量 。用电子天平称刚产出的卵 1. 0 g左右 ,在解剖镜下计数 ,平行两次 ,平均值为卵密度(粒/g) 。产卵量按式(1)计算 :

　　G= (W1 -W2 )(n1/2w样1 + n2/2w样2) …………………………( 1 )

　　式中 :

　　G— 产卵量 ,单位为粒 ;

　　W1— 产卵前亲鱼重量 ,单位为克(g) ;

　　W2— 产卵后亲鱼重量 ,单位为克(g) ; n1— 试样 1 的卵粒数 ,单位为粒 ;

　　w样1— 试样 1 重量 ,单位为克(g) ; n2— 试样 2 的卵粒数 ,单位为粒 ;

　　w样2— 试样 1 重量 ,单位为克(g) 。

　　8. 4 染色体及核型

　　染色体及核型的测定按照 GB/T 18654. 12的规定执行 。

　　8. 5 同工酶分析

　　8. 5. 1 样品制备

　　活体或低温样品带回实验室 。取肌肉和肝脏 ,密封放入超低温冰箱( -76℃)或液氮罐中贮存 。将部分组织(约 0. 5 g)取出放入玻璃匀浆器中 ,加入等体积双蒸水或 1 ∶ 1(质量体积) 的 0. 1 mol/L磷酸缓冲液(pH7. 0)(配制方法见附录 A) ,冰水浴中匀浆后 ,倒入 1. 5 mL离心管内 ,在 0~ 4 ℃冷冻离心机中 15 000 r/min,离心 15 min,离心后取上清液作为电泳样品 。

　　8. 5. 2 电泳分析

　　采用淀粉凝胶电泳方法 ,凝胶浓度为 12% , 电泳缓冲系统为 TC,pH7. 0(配制方法见附录 A) ,恒流(电压大小为 8 V/cm)电泳 5 h~ 6 h。 电泳过程在 4 ℃冰箱中进行 。凝胶厚度为 6 mm , 电泳后切成4 片 ~ 5 片 ,分别进行各种酶的染色 ,染色过程在 37 ℃恒温箱中进行 ,染色液配方见附录 A。

　　8. 5. 3 结果计算

　　群体遗传学特征的数据是对蓬莱沿岸 33尾样品的肌肉 、心脏 、眼和肝胰腺 4 种组织中的天冬氨酸转氨酶(AAT) 、乙醇脱氢酶(ADH) 、6-磷酸葡萄糖异构酶(GPI) 、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH) 、异柠檬酸脱氢酶(IDHP) 、乳酸脱氢酶(LDH) 、苹果酸脱氢酶(MDH) 、甘露糖-6-磷酸异构酶(MPI) 、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(PGDH) 、磷 酸 葡 萄 糖 变 位 酶(PGM) 、山 梨 醇 脱 氢 酶(SDH) 和 超 氧 化 物 歧 化 酶(SOD)

　　12种同工酶的检测结果 。

　　多态位点比例(P) 、平均杂合度观察值(Ho) 、平均有效等位基因数(Ne)分别按式(2) 、式(3) 、式(4)

　　计算 :

　　P = N1/n× 100% …………………………( 2 )

　　式中 :

　　P— 多态位点比例 ;

　　N1— 多态位点数 ;

　　n— 检测位点总数 。

　　Ho = ( ∑ H1 )/n …………………………( 3 )

　　式中 :

　　Ho— 平均杂合度观察值 ;

　　H1— 多态位点杂合度观察值 ;

　　n— 观察位点总和 。

　　Ne =[∑ (1-Ho)]/n …………………………( 4 )

　　4

　　GB/T26620—2011

　　式中 :

　　Ne— 平均有效等位基因数 ;

　　Ho— 平均杂合度观察值 ;

　　n— 观察位点总和 。

　　9 判定规则

　　被检样品符合本标准的第 4章 、第 6章要求的为合格样品 。如果有一章不符合的可以复检 ,复检不合格的判定为不合格 ,复检合格的判定为合格 。

　　5

　　GB/T26620—2011

　　附 录 A

　　(规范性附录)

　　各种缓冲液、染色液配方

　　A. 1 TC缓冲液

　　三羟甲基氨基甲烷(Tris)3. 028 g,用柠檬酸调整 pH 至 7. 0,蒸馏水定容至 1 L。

　　A. 2 0. 1 mol/L磷酸缓冲液(pH7. 0)

　　1 mol/L磷酸氢二钾(K2 HPO4 ) 61. 5 mL, 1 mol/L磷酸 二 氢 钾(KH2PO4 ) 38. 5 mL, 用 水 稀 释 至1 000 mL。

　　A. 3 辅酶 Ⅱ (NADP)基本保存液

　　NADP(N-0505) :300 mg,噻唑蓝(MTT)(M-2128) :300 mg,纯水 :1 000 mL。

　　A. 4 辅酶 Ⅰ (NAD)基本保存液

　　NAD(N-0632) :400 mg,MTT(M-2128) :300 mg,纯水 :1 000 mL。

　　A. 5 酚嗪甲硫酸(PMS)基本保存液

　　PMS(P-9625) :150 mg,纯水 :10 mL。

　　A. 6 同工酶的染色液配制方法

　　同工酶染色液配制方法见表 A. 1。

　　表 A. 1 同工酶的染色液配制方法

　　同工酶

　　英 文

　　药 品

　　浓 度

　　剂 量

　　异柠檬酸脱氢酶

　　Isocitrate

　　dehydrogenase

　　Tris-HCl,pH8. 0

　　0. 2 mol/L

　　25 mL

　　异柠檬酸(Isocitrate)

　　25 mg

　　氯化镁(MgCl2 )

　　1 mol/L

　　0. 25 mL

　　NAD基本保存液

　　25 mL

　　PMS基本保存液

　　3滴~5滴

　　6

　　GB/T26620—2011

　　附 录 B

　　(资料性附录)

　　钝吻黄盖鲽生长方程和体长体重关系

　　B. 1 钝吻黄盖鲽生长方程

　　钝吻黄盖鲽的生长可用 Von-Bertalanffy生长方程表示 ,通过 1978年 ~ 1985年对山东沿岸拖网调查取得的 1260个样品(年龄组成 2 龄 ~ 7龄 ,体长组成 90 mm~420 mm)的回归分析 ,钝吻黄盖鲽的生长方程式见式(B. 1) 、式(B. 2) 、式(B. 3) 、式(B. 4) :

　　式中 : ♀♂:W:::1(7)0(6)1([)1([)[-11---e(e)0(-)-(-09t((-35(4))]).]3(0)7(3)5(2)5 ………… ………… ………… ……………… ………… ………… ……………… ( .... ))))

　　Lt— 体长 ,单位为毫米(mm) ;

　　t— 年龄 ,单位为龄 ;

　　Wt— 体重 ,单位为克(g) 。

　　B. 2 钝吻黄盖鲽体长体重关系

　　通过 1978年 ~ 1985年对山东沿岸拖网调查取得的 1 260个样品(年龄组成 2 龄 ~ 7 龄 ,体长组成90 mm~420 mm)的回归分析 ,钝吻黄盖鲽的体长 、体重关系见式(B. 5) 、式(B. 6) :

　　式中 :

　　Wt— 体重 ,单位为克(g) ;

　　Lt— 体长 ,单位毫米(mm) 。

　　♀(♂) ::Wt(Wt)18(17).. 101(756)10(10)-- 6Lt(7Lt)3(3)..0325(4375) …… …… …… …… …… …… …… …… …… …… (( B(B).. 6(5)))