GB/T 26619-2011 斑节对虾

　　ICS 65. 150 B 51

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 26619—2011

　　斑 节 对 虾

　　Gianttigerprawn

　　2011-06-16发布 2011-11-01实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T26619—2011

　　前 言

　　本标准的附录 C为规范性附录 , 附录 A、附录 B为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国农业部提出 。

　　本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归 口 。

　　本标准起草单位 : 中国水产科学研究院黄海水产研究所 、中国海洋大学 。

　　本标准主要起草人 :张岩 、于函 、肖永双 、张华 。

　　Ⅰ

　　GB/T26619—2011

　　斑 节 对 虾

　　1 范围

　　本标准规定了斑节对虾(Penaeusmonodon)的主要形态特征 、生长与繁殖特性 、遗传学特性以及检测方法 。

　　本标准适用于斑节对虾种质的检测和鉴定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件 ,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准 ,然而 ,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注日期的引用文件 ,其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 18654. 12 养殖鱼类种质检验 第 12部分 :染色体组型分析

　　GB/T 19782 中国对虾

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本标准 。

　　3. 1

　　体长 bodylength

　　眼柄基部或额角基部眼眶缘到尾节末端的长度 。

　　3. 2

　　头胸甲长 carapacelength

　　眼窝后缘连线中央到头胸甲中线后缘的长度 。

　　4 名称与分类

　　4. 1 学名

　　斑节对虾 Penaeusmondon Fabricius,1798。

　　4. 2 分类位置

　　节肢动物门(Arthropoda) , 甲 壳 纲(Crustacea) , 十 足 目 (Decapoda) , 对 虾 科(Penaeidae) , 对 虾 属(Penaeus) 。

　　5 形态特征

　　5. 1 外形

　　体表光滑 ,壳稍厚 ,体色由暗绿色 、深棕色和浅黄色横斑相间排列 ,构成腹部鲜艳斑纹 。腹部游泳足浅蓝色 ,原肢前面黄色 ,其缘毛桃红色 ,第 2、3 颚足外肢刚毛桃红色 。斑节对虾的外部形态见图 1。

　　图 1 斑节对虾外部形态

　　1

　　GB/T26619—2011

　　额角较平直 ,末端较粗 ,稍向上弯 ,伸至第 1 触角柄末端 ,上缘具 7 齿 ~ 8 齿 , 胃上刺与第 1 齿距离较大 ,约为第 2齿至第 3齿距离的 2倍 ;额角后脊伸至头胸甲后缘附近 。额角侧脊较低而钝 ,伸至胃上刺下方 。头胸甲具眼眶触角沟 、颈沟 。额角侧沟较深 ,伸至胃上刺下方 。额角后脊中央沟明显 ,但较浅而窄 ,断续后伸 。无额胃沟 。肝脊较宽而钝 ,前半水平伸 ,后部稍低 。 眼胃脊约占头胸甲眼眶缘与肝刺间距离的后部 2/5。头胸甲具触角刺 、肝刺 、胃上刺 。 眼眶角圆形 。前侧角圆无颊刺 ;腹部第 4 节中部至第 6节背中央具纵脊 。第 6节长为高的 1. 1倍 。尾节稍长于第 6节 ,末端尖 ,无侧缘刺 。对虾头胸甲分区情况参见附录 A。

　　第 1触角柄刺伸至第 1节中部 ,外缘末端刺较小 , 内侧附肢伸至柄第 1 节末或稍超出 ,第 1 触角鞭较短 ,下鞭约为头胸甲的 2/3,上鞭梢短于下鞭 ,上鞭基部较粗部分约占鞭长的 1/3。第 2触角鳞片超出第 1触角柄末端 。第 3额足伸至第 1触角柄第 3节末端(成体雄性) ,雌性及幼雄性伸至柄第 1节末端 ,雄性指 节 几 乎 与 掌 节 等 长 , 接 于 掌 的 近 末 端 1/5处 , 掌 末 有 丛 毛 。 雌 性 者 指 为 掌 长 的 1/2~ 1/3。第 1 步足伸至或稍超 出 第 2 触 角 柄 腕 末 端 。 第 3 步 足 最 长 , 伸 至 第 1 触 角 柄 末 , 或 以 指 节 超 出 之 。第 5 步足伸至第 2触角柄第 1节中部 。第 1 步足有基节刺和座节刺 ,第 2 步足仅有基节刺 。第 1 步足至第 4 步足具外肢 ,第 5 步足无外肢(对虾外形 、体节 、附肢情况参见附录 A) 。

　　5. 2 雄性交接器

　　背中叶末端突小 ,半圆形 ,侧叶较宽 ,顶端较圆 ; 明显地超出中叶之外 ,末部有雏形小齿 。斑节对虾雄性交接器见图 2。

　　图 2 斑节对虾雄性交接器

　　5. 3 雄性附肢

　　略呈梯形 ,长为最大宽的近 2倍 ,末半部较窄 ,基部较宽 ,边缘着生硬刺 。斑节对虾雄性附肢见图 3。

　　图 3 斑节对虾雄性附肢

　　2

　　GB/T26619—2011

　　5. 4 雌性交接器

　　第 4 步足间有一粗大的钙化隆起 ,边缘密生较长的刚毛 ,形似花冠 ,后有 1 端突与纳精囊前中央纵裂口相接 。纳精囊盘状 ,宽大于长 ,约为长的 1. 2倍 , 中央纵行的开口边缘厚大成唇 。斑节对虾雌性交接器见图 4。

　　图 4 斑节对虾雌性交接器

　　5. 5 可量性状

　　5. 5. 1 第 1触鞭较长 ,约为头胸甲长的 2/3。

　　5. 5. 2 眼胃脊约占头胸甲眼眶缘与肝刺间距离的后部 2/5。

　　5. 5. 3 第 6节长为高的 1. 1倍 。

　　5. 5. 4 尾节稍长于第 6节 。

　　5. 5. 5 第 1触角鞭下鞭约为头胸甲的 2/3,上鞭基部较粗部分约占鞭长的 1/3。

　　5. 6 可数性状

　　额角齿式 7~ 8/2~ 3, 以 7/3者较多 。

　　6 生长与繁殖

　　6. 1 寿命

　　在天然水域中雄虾寿命一般为 1 年 ~ 1. 5 年 ,雌虾寿命大约 2 年 。

　　6. 2 体长体重关系

　　斑节对虾南海西北部水域野生群体的体长与体重关系见式(1) 、式(2) :

　　雄虾 :W = 7. 636 6× 10 L . (r=0. 981 5,n=48) ( 2 )

　　雌虾 :W = 1. 1274×10-- 6(5)L3(3).1151(0411) (r=0. 995 3,n= 52) …… …… …… …… …… …… ( 1 )

　　式中 :

　　W— 体重 ,单位为克(g) ;

　　L— 体长 ,单位为毫米(mm) 。

　　不同 日龄养殖斑节对虾的体长 、体重实测值参见附录 B。

　　6. 3 繁殖

　　6. 3. 1 生物学最小型

　　斑节对虾第 1 次性成熟的最小个体体长为 189 mm ,最小体重 95 g。

　　6. 3. 2 产卵

　　斑节对虾的繁殖期较长 ,7月至第二年 2 月均为繁殖产卵期 。卵子分批发育成熟 ,分次产出 。

　　3

　　GB/T26619—2011

　　6. 3. 3 繁殖力

　　斑节对虾的怀卵量因个体大小而异 , 为 109× 104 粒/尾 ~ 211. 8× 104 粒/尾 ,平均 154× 104 粒 ,产卵量 30×104 粒 ~ 100×104 粒 。

　　6. 3. 4 卵子特征

　　斑节对虾卵呈球形 ,黄绿色 ,稍透明 ,卵径 0. 27 mm~ 0. 31mm ,平均 0. 29 mm。在静止水中 , 卵慢慢下沉池底 。卵裂的方式为全均等分裂 。

　　7 细胞遗传学特性

　　斑节对虾的染色体数目为 2n= 88。

　　8 生化遗传学特性

　　8. 1 同工酶酶谱

　　斑节对虾成体肌肉中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的电泳图谱见图 5,表现为一条酶带 。

　　图 5 斑节对虾成体肌肉中 LDH 同工酶电泳图谱

　　8. 2 群体遗传变异范围

　　斑节对虾三亚种群和纳颉岛种群的平均杂合度分别是 0. 359 6 和 0. 3254,厦门养殖群体的多态位点比例 P 为 61. 96% ,预期杂合度 He 为 0. 151,观察杂合度 Ho 为 0. 120。

　　9 检测方法

　　9. 1 形态特征

　　长度测量用直尺 ,精确到 1 mm。

　　9. 2 生长

　　9. 3 繁殖力测定

　　长度测量用直尺 ,精确到 1 mm,重量(湿重)采用吸水纸吸去体表水分后再用托盘扭力天平称重 ,精确到0. 1 g,所得到的数据用 Excel进行统计与回归分析 ,体重与体长的关系应用 W=aLb 模型进行拟合。

　　用天平或杆秤称产卵前 、后雌性亲虾的重量 ,前后两次称重之差即为产卵的重量 。用电子天平称刚产出的卵 1. 0 g左右 ,在解剖镜下计数 ,平行两次 ,平均值为卵密度(粒/g) 。产卵量按式(3)计算 :

　　G = (W1 -W2 )(n1/2w样1 + n2/2w样2) …………………………( 3 )

　　式中 :

　　G— 产卵量 ,单位为粒 ;

　　W1— 产卵前亲虾重量 ,单位为克(g) ;

　　W2— 产卵后亲虾重量 ,单位为克(g) ; n1— 试样 1 的卵粒数 ,单位为粒 ;

　　w样1— 试样 1 重量 ,单位为克(g) ;

　　n2— 试样 2 的卵粒数 ,单位为粒 ; w样2— 试样 1 重量 ,单位为克(g) 。

　　9. 4 细胞遗传学特性

　　取雄性斑节对虾 ,在其腹部 1、2节间侧注射秋水仙素溶液(浓度按 1. 5 μg/g体重) , 注射完毕后在水族箱中暂养 4 h~ 6 h,取出解剖 ,获取其精巢 ,用 0. 7%氯化钾(KCl)低渗 ,卡诺氏(Carony’s)液固定 ,

　　4

　　GB/T26619—2011

　　气干法制片 ,吉姆萨(Gimsa)染色 ,镜检 ,选择分散良好的染色体计数 。计数方法按 GB/T 18654. 12 的规定执行 。

　　9. 5 生化遗传学特性

　　取肌肉组织加入 5 倍体积的 0. 05 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7. 0)(配制方法见附录 C) 冰浴匀浆 , 14000 r/min下 ,4 ℃离心 15 min,取上清液与甘油-溴酚蓝加样缓冲液(配制方法见附录 C) 混合 ,立即电泳或 -20℃保存 ,24h 内 200V 电泳 12h,采用 TG缓冲系统 ,缓冲液的配制见附录 C。 电泳采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,分离胶和浓缩胶的浓度分别为 7. 5%和 2. 5% ,染色液的配制按 GB/T 19782的规定执行 。

　　群体遗传学特征中 ,三亚种群和纳颉岛群体的数据是对 30尾样品的肌肉和肝胰腺两种组织中的苹果酸酶(ME) 、苹果 酸 脱 氢 酶(MDH) 、谷 氨 酸 脱 氢 酶(GDH) 、乳 酸 脱 氢 酶(LDH) 、磷 酸 葡 萄 糖 变 位 酶(PGM) 、碱性磷酸酶(ALP) 、酸性磷酸酶(ACP) 、超氧化物歧化酶(SOD)和酯酶(EST)9 种同工酶的检测结果 。厦门养殖群体的数据是对 40尾样品的肌肉和肝胰腺两种组织中的酯酶(EST) 、酸性磷酸酶 (ACP) 、碱性磷酸酶(ALP) 、乳酸脱氢酶(LDH) 、苹果酸脱氢酶(MDH) 、苹 果 酸 酶(ME) 、乙 醇 脱 氢 酶(ADH) 、超氧化物歧化酶(SOD)和谷氨酸脱氢酶(GDH) 9 种同工酶的检测结果 。 多态位点比例(P) 、平均杂合度观察值(Ho) 、预期杂合度(He)分别按式(4) 、式(5) 、式(6)计算 :

　　P = N1/n× 100% …………………………( 4 )

　　式中 :

　　P— 多态位点比例 ;

　　N1— 多态位点数 ;

　　n— 检测位点总数 。

　　Ho = ( ∑ H1 )/n …………………………( 5 )

　　式中 :

　　Ho— 平均杂合度观察值 ;

　　H1— 多态位点杂合度观察值 ;

　　n— 观察位点总和 。

　　He =[∑ (1- ∑q2 )]/n …………………………( 6 )

　　式中 :

　　He— 预期杂合度 ;

　　q— 纯合基因型的频率 ;

　　n— 观察位点总和 。

　　5

　　GB/T26619—2011

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　对虾头胸甲分区及外形

　　A. 1 对虾头胸甲的分区

　　对虾头胸甲的分区见图 A. 1。

　　6

　　1— 额角 ;

　　2— 额角侧沟 ;

　　3— 额角沟 ;

　　4— 额角脊 ;

　　5— 眼后沟 ;

　　6— 眼胃脊 ;

　　7— 颈沟 ;

　　8— 胃上刺 ;

　　9— 颈脊 ;

　　10— 额角侧沟 ;

　　11— 中央沟 ;

　　12— 额角后脊 ;

　　13— 额角侧脊 ;

　　14— 心鳃沟 ;

　　

　　15— 眼眶刺 ;

　　16— 眼后刺 ;

　　17— 触角刺 ;

　　18— 触角脊 ;

　　19— 鳃甲刺 ;

　　20— 颊刺 ;

　　21— 眼眶触角沟 ;

　　22— 肝刺 ;

　　23— 肝沟 ;

　　24— 肝脊 ;

　　25— 肝上刺 ;

　　26— 亚缘脊 ;

　　27— 心鳃脊 ;

　　28— 颊刺 ;

　　

　　29— 眼眶触角沟 ;

　　30— 肝刺 ;

　　31— 颈脊 ;

　　32— 胃上刺 ;

　　33— 颈沟 ;

　　34— 肝上刺 ;

　　35— 额角侧沟 ;

　　36— 中央沟 ;

　　37— 额角后脊 ;

　　38— 额角侧脊 ;

　　39— 触角刺 ;

　　40— 眼眶刺 ;

　　41— 眼后刺 。

　　图 A. 1 对虾头胸甲分区

　　GB/T26619—2011

　　A. 2 对虾外形

　　对虾外形(侧面)及体节 、附肢情况见图 A. 2。

　　图 A. 2 对虾外形(侧面)

　　7

　　GB/T26619—2011

　　附 录 B

　　(资料性附录)

　　不同日龄养殖斑节对虾体长、体重实测值

　　不同 日龄养殖斑节对虾体长 、体重实测值见表 B. 1。

　　表 B. 1 不同日龄养殖斑节对虾体长、体重实测值

　　日龄/d

　　46

　　66

　　82

　　102

　　128

　　142

　　156

　　178

　　202

　　218

　　238

　　255

　　雄虾体长/mm

　　25. 2

　　51. 8

　　68. 8

　　85. 1

　　103. 6

　　116. 3

　　122. 2

　　132. 3

　　142. 1

　　146. 3

　　150. 5

　　155. 2

　　雄虾体重/g

　　0. 27

　　2. 28

　　5. 27

　　9. 86

　　17. 62

　　24. 78

　　28. 67

　　36. 24

　　44. 75

　　48. 76

　　53. 01

　　58. 04

　　雌虾体长/mm

　　22. 4

　　51. 6

　　66. 7

　　83. 9

　　109

　　118. 1

　　130. 1

　　145. 3

　　155. 2

　　163. 2

　　171. 4

　　175. 5

　　雌虾体重/g

　　0. 20

　　2. 38

　　5. 09

　　10. 04

　　21. 80

　　27. 65

　　36. 84

　　51. 12

　　62. 13

　　72. 11

　　83. 38

　　89. 43

　　注 : 雄虾样本数 716尾 ,雌虾样本数 784尾 。

　　8

　　GB/T26619—2011

　　附 录 C

　　(规范性附录)

　　溶液的配制

　　C. 1 0. 1 mol/L磷酸缓冲液(pH7. 0)的配制

　　1 mol/L磷酸氢二钾(K2 HPO4 ) 61. 5 mL, 1 mol/L磷酸 二 氢 钾(KH2PO4 ) 38. 5 mL, 用 水 稀 释 至1 000 mL。

　　C. 2 加样缓冲液的配制

　　0. 25%溴酚蓝 ,0. 25%二甲苯青 FF,30%甘油水溶液 ,混合均匀后 4 ℃保存 。

　　C. 3 TG 电泳缓冲液

　　C. 3. 1 储存液的配制

　　15. 1 g三羟甲基氨基 甲 烷(Tris) , 94 g 甘 氨 酸(电 泳 级) (pH8. 3) , 50 mL 10%十 二 烷 基 磺 酸 钠(SDS , 电泳级) ,定容到 1 000 mL。

　　C. 3. 2 使用液的配制

　　稀释储存液 ,使终浓度达到 25 mol/LTris,250 mmol/L甘氨酸 ,0. 1% SDS。

　　9