GB/T 20770-2008 粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 67 . 050 X 04

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 20770—2008代替 GB/T 20770—2006

　　粮谷中 486 种农药及相关化学品

　　残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　Determination of486 pesticidesand related chemicals

　　residuesingrains—LC-MS-MS method

　　2008-12-31 发布 2009-05-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 20770—2008

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 原理 1

　　4 试剂和材料 1

　　5 仪器 2

　　6 试样制备与保存 2

　　7 测定步骤 2

　　8 结果计算 5

　　9 精密度 5

　　附录 A(资料性附录) 486 种农药及相关化学品中文与英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和

　　混合标准溶液浓度表 6

　　附录 B(资料性附录) 486 种农药及相关化学品监测离子对 、碰撞气能量 、源内碎裂电压和

　　保留时间 21

　　附录 C(资料性附录) 486 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图 37

　　附录 D(资料性附录) 486 种农药及相关化学品精密度数据表 62

　　附录 E(资料性附录) 486 种农药及相关化学品英文中文名称对照索引(按英文字母顺序) 77

　　Ⅰ

　　GB/T 20770—2008

　　前 言

　　本标准代替 GB/T 20770—2006《粮谷中 372 种农药及相关化学品多残留测定方法 液相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱法》。

　　本标准与 GB/T 20770—2006 相比，主要变化如下：

　　— 可测定的农药品种由 372 种扩大为 486 种，增加了 ESI 负源检测的农药品种;

　　— 改变了前处理方法，选择了新的测试仪器和测试条件 。

　　本标准的附录 A 、附录 B、附录 C、附录 D、附录 E 为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归 口 。

　　本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 、山东农业大学 。

　　本标准主要起草人：庞国芳 、刘永明 、范春林 、曹彦忠 、曹静 、郑锋 、连玉晶 、贾光群 、张进杰 、李学民 、吴艳萍 、李金 。

　　本标准于 2006 年首次发布 。

　　Ⅲ

　　GB/T 20770—2008

　　粮谷中 486 种农药及相关化学品

　　残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　1 范围

　　本标准规定了大麦 、小麦 、燕麦 、大米 、玉米中 486 种农药及相关化学品(参见附录 A 和附录 E) 残留量液相色谱-串联质谱测定方法 。

　　本标准适用于大麦 、小麦 、燕麦 、大米 、玉米中 486 种农药及相关化学品残留的定性鉴别，376 种农药及相关化学品残留量的定量测定 。

　　本标准定量测定的 376 种农药及相关化学品方法检出限为 0 . 02 μg/kg~ 0 . 96 mg/kg(参见附录 A) 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB 5491 粮食 、油料检验 扦样 、分样法

　　GB/T 6379 . 1 测 量 方 法 与结 果 的 准 确度( 正 确度 与 精 密 度 ) 第 1 部 分：总 则 与 定 义(GB/T 6379 . 1—2004 , ISO 5725-1:1994 , IDT)

　　GB/T 6379 . 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第 2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379 . 2—2004 , ISO 5725-2:1994 , IDT)

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008 , ISO 3696:1987 , MOD)

　　3 原理

　　用乙腈均质法提取试样中的农药及相关化学品，凝胶渗透色谱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量 。

　　4 试剂和材料

　　水为 GB/T 6682 规定的一级水 。

　　4 . 1 乙腈：色谱纯 。

　　4 . 2 甲醇：色谱纯 。

　　4 . 3 环己烷：色谱纯 。

　　4 . 4 乙酸乙酯：色谱纯 。

　　4 . 5 正己烷：色谱纯 。

　　4 . 6 甲苯：优级纯 。

　　4 . 7 丙酮：色谱纯 。

　　4 . 8 异辛烷：色谱纯 。

　　4 . 9 0 . 1%甲酸溶液(体积分数)。

　　4 . 10 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0 . 375 g 乙酸铵加水稀释至 1 000 mL 。

　　4 . 1 1 乙腈+甲苯(3+1 , 体积比)。

　　4 . 12 乙腈+水(3+2 , 体积比)。

　　1

　　GB/T 20770—2008

　　4 . 13 乙酸乙酯+环己烷(1+1 , 体积比)。

　　4 . 14 无水硫酸钠：分析纯 。用前在 650 ℃灼烧 4 h ,贮于干燥器中，冷却后备用 。

　　4 . 15 微孔过滤膜(尼龙)：13 mm×0 . 2 μm 和 13 mm×0 . 45 μm 。

　　4 . 16 农药及相关化学品标准物质：纯度 ≥95% 。

　　4 . 17 农药及相关化学品标准溶液

　　4 . 17 . 1 标准储备溶液

　　准确称取 5 mg ~ 10 mg(精确至 0 . 1 mg)农药及相关化学品各标准物分别于 10 mL容量瓶中，根据标准物的溶解度和测定的需要选甲醇 、乙腈 、甲苯 、甲苯+丙酮混合液 、异辛烷等溶剂溶解并定容至刻度，溶剂选择参见附录 A 。标准储备溶液避光 0 ℃ ~ 4 ℃保存，可使用一年 。

　　4 . 17 . 2 混合标准溶液(混合标准溶液 A 、B、C、D、E 、F 和 G)

　　按照农药及相关化学品的性质和保留时间，将 486 种农药及相关化学品分成 A 、B、C、D、E 、F 和 G七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度 。本标准对 486 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录 A 。

　　依据每种农药及相关化学品的分组 、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于 100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 。 混合标准溶液避光 0 ℃ ~ 4 ℃保存，可使用一个月 。

　　4 . 17 . 3 基质混合标准工作溶液

　　农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用空白样品基质溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 A 、B、C、D、E 、F 和 G ,用于做标准工作曲线 。

　　基质混合标准工作溶液应现用现配 。

　　5 仪器

　　5 . 1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI) 。

　　5 . 2 凝胶渗透色谱仪：配有 400 mm×25 mm(内径)，内装 BIO-Beads S-X3 填料或相当的净化柱 。

　　5 . 3 分析天平：感量为 0 . 1 mg 和 0 . 01 g 。

　　5 . 4 均质器：最大转速为 24 000 r/min 。

　　5 . 5 梨形瓶：150 mL 和 250 mL 。

　　5 . 6 氮气吹干仪 。

　　5 . 7 离心管：80 mL 。

　　5 . 8 移液器：1 mL 。

　　5 . 9 样品瓶：2 mL,带聚四氟乙烯旋盖 。

　　5 . 10 离心机：最大转速为 4 200 r/min 。

　　5 . 1 1 旋转蒸发器 。

　　6 试样制备与保存

　　6 . 1 试样的制备

　　按 GB 5491 扦取的粮谷样品经粉碎机粉碎，过 20 目筛，混匀，密封，作为试样，标明标记 。

　　6 . 2 试样的保存

　　试样于常温下保存 。

　　7 测定步骤

　　7 . 1 提取

　　称取 10 g试样(精确至 0 . 01 g) ,放入盛有 15 g 无水硫酸钠的具塞离心管中，加 35 mL 乙腈，均质

　　2

　　GB/T 20770—2008

　　提取 1 min , 3 800 r/min 离心 5 min,上清液通过装有无水硫酸钠的筒形漏斗，收集于梨形瓶中，残渣再用 30 mL 乙腈提取一次，合并提取液，将提取液用旋转蒸发器于 40 ℃水浴蒸发浓缩至约 0 . 5 mL,加入5 mL 乙酸乙酯+环己烷(1+1)进行溶剂交换，重复两次，最后使样液体积约为 5 mL , 待净化 。

　　7 . 2 凝胶渗透色谱净化7 . 2 . 1 条件

　　a) 净化柱：400 mm×25 mm(内径)，内装 BIO-Beads S-X3 填料或相当者;

　　b) 检测波长：254 nm ;

　　c) 流动相：乙酸乙酯+环己烷(1+1 , 体积比);

　　d) 流速：5 mL/min ;

　　e) 进样量：5 mL ;

　　f) 开始收集时间：22 min ;

　　g) 结束收集时间：40 min 。

　　7 . 2 . 2 净化

　　将上述提取液转移至 10 mL容量瓶中，用 5 mL 乙酸乙酯+环己烷(1+1)分两次洗涤梨形瓶，并转移至上述 10 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀 。将样液过 0 . 45 μm微孔滤膜滤入 10 mL试管中，供凝胶渗透色谱仪 净 化，收 集 22 min ~ 40 min 的 馏 分 于 200 mL 梨 形 瓶 中，并 在 40 ℃水 浴 旋 转 蒸 发 至0 . 5 mL 。将浓缩 液 置 于 氮 气 吹 干 仪 上 吹 干，迅 速 加 入 1 mL 的 乙 腈+水 (3+2) 溶 解 残 渣，混 匀，经0 . 2 μm 滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定 。

　　7 . 3 液相色谱-串联质谱测定7 . 3 . 1 条件

　　7 . 3 . 1 . 1 A、B、C、D、E、F 组液相色谱-串联质谱测定条件(ESI正离子源)

　　a) 色谱柱：ZORBOX SB-C18 , 3 . 5 μm , 100 mm × 2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 1 ;

　　表 1 流动相及梯度洗脱条件

　　步骤

　　总时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(0 . 1%甲酸水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0

　　0 . 00

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　1

　　3 . 00

　　400

　　70 . 0

　　30 . 0

　　2

　　6 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　3

　　9 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　4

　　15 . 00

　　400

　　40 . 0

　　60 . 0

　　5

　　19 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　6

　　23 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　7

　　23 . 01

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：10 μL ;

　　e) 电离源模式：电喷雾离子化;

　　f) 电离源极性：正模式;

　　g) 雾化气：氮气;

　　3

　　GB/T 20770—2008

　　h) 雾化气压力：0 . 28 MPa ;

　　i) 离子喷雾电压：4 000 V ;

　　j) 干燥气温度：350 ℃ ;

　　k) 干燥气流速：10 L/min ;

　　l) 监测离子对 、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 1 . 2 G 组液相色谱-串联质谱测定条件(ESI负离子源)

　　a) 色谱柱：ZORBOX SB-C18 , 3 . 5 μm , 100 mm×2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 2 ;

　　表 2 流动相及梯度洗脱条件

　　步骤

　　总时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(5 mmol/L 乙酸铵水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0

　　0 . 00

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　1

　　3 . 00

　　400

　　70 . 0

　　30 . 0

　　2

　　6 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　3

　　9 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　4

　　15 . 00

　　400

　　40 . 0

　　60 . 0

　　5

　　19 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　6

　　23 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　7

　　23 . 01

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：10 μL ;

　　e) 电离源模式：电喷雾离子化;

　　f) 电离源极性：负模式;

　　g) 雾化气：氮气;

　　h) 雾化气压力：0 . 28 MPa ;

　　i) 离子喷雾电压：4 000 V ;

　　j) 干燥气温度：350 ℃ ;

　　k) 干燥气流速：10 L/min ;

　　l) 监测离子对 、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 2 定性测定

　　在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度 >50%,允许 ±20%偏 差;相 对 丰 度 >20% ~ 50%,允 许 ±25%偏 差;相 对 丰 度 >10% ~ 20%,允许 ±30%偏差;相对丰 度 ≤10%,允 许 ±50%偏 差)，则 可 判 断 样 品中 存 在 这 种 农 药 或 相 关 化学品 。

　　7 . 3 . 3 定量测定

　　本标准中液相色谱-串联质谱采用外标校准曲线法定量测定 。为减少基质对定量测定的影响，需用空白样品提取液来配制所使用的一系列基质标准工作溶液，用基质标准工作溶液分别进样来绘制标准曲线 。并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内 。486 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图参见附录 C 。

　　7 . 4 平行试验

　　按以上步骤对同一试样进行平行试验测定 。

　　4

　　GB/T 20770—2008

　　7 . 5 空白试验

　　除不称取试样外，均按上述步骤进行 。

　　8 结果计算

　　液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式(1)计算：

　　xi = ci × × …………………………( 1 )

　　式中：

　　xi— 试样中被测组分含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　ci— 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) ;

　　V— 试样溶液定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　m— 样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g) 。

　　计算结果应扣除空白值 。

　　9 精密度

　　本标准精密度数据是按照 GB/T 6379 . 1 和 GB/T 6379 . 2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以 95%的可信度来计算 。本标准方法的精密度数据参见附录 D 。

　　5

　　GB/T 20770—2008

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　486 种农药及相关化学品中文与英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度表

　　486 种农药及相关化学品中文与英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度表见表 A. 1 。

　　表 A.1 486 种农药及相关化学品中文与英文名称、方法检出限、分组、溶剂选择和混合标准溶液浓度表

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　检出限/ (μg/kg)

　　溶剂

　　混合标准溶液浓度/(μg/mL)

　　A组

　　1

　　苯胺灵

　　propham

　　55 . 00

　　甲苯

　　11 . 00

　　2

　　异丙威

　　isoprocarb

　　1 . 15

　　甲醇

　　0 . 23

　　3

　　3 , 4 , 5-混杀威

　　3 , 4 , 5-trimethacarb

　　0 . 17

　　甲醇

　　0 . 03

　　4

　　环莠隆

　　cycluron

　　0 . 10

　　甲醇

　　0 . 02

　　5

　　甲萘威

　　carbaryl

　　5 . 16

　　甲醇

　　1 . 03

　　6

　　毒草胺

　　propachlor

　　0 . 14

　　甲醇

　　0 . 03

　　7

　　吡咪唑

　　rabenzazole

　　0 . 67

　　甲醇

　　0 . 13

　　8

　　西草净

　　simetryn

　　0 . 07

　　甲醇

　　0 . 01

　　9

　　绿谷隆

　　monolinuron

　　1 . 78

　　甲醇

　　0 . 36

　　10

　　速灭磷

　　mevinphos

　　0 . 78

　　甲醇

　　0 . 16

　　11

　　叠氮津

　　aziprotryne

　　0 . 69

　　甲醇

　　0 . 14

　　12

　　密草通

　　secbumeton

　　0 . 04

　　甲醇

　　0 . 01

　　13

　　嘧菌磺胺a

　　cyprodinil

　　0 . 37

　　甲醇

　　0 . 07

　　14

　　播土隆

　　buturon

　　4 . 48

　　甲醇

　　0 . 90

　　15

　　双酰草胺

　　carbetamide

　　1 . 82

　　甲醇

　　0 . 36

　　16

　　抗蚜威

　　pirimicarb

　　0 . 08

　　甲醇

　　0 . 02

　　17

　　异 噁草松

　　clomazone dimethazone

　　0 . 21

　　甲醇

　　0 . 04

　　18

　　氰草津

　　cyanazine

　　0 . 08

　　甲醇

　　0 . 02

　　19

　　扑草净

　　prometryne

　　0 . 08

　　甲醇

　　0 . 02

　　20

　　对氧磷

　　paraoxon methyl

　　0 . 38

　　甲醇

　　0 . 08

　　21

　　4 , 4 ′-二氯二苯甲酮a

　　4 , 4 ′-dichlorobenzophenone

　　6 . 80

　　甲醇

　　1 . 36

　　22

　　噻虫啉

　　thiacloprid

　　0 . 19

　　甲醇

　　0 . 04

　　23

　　吡虫啉

　　imidacloprid

　　11 . 00

　　甲醇

　　2 . 20

　　24

　　磺噻隆

　　ethidimuron

　　0 . 75

　　甲醇

　　0 . 15

　　25

　　丁嗪草酮

　　isomethiozin

　　0 . 53

　　甲醇

　　0 . 11

　　26