GB/T 20769-2008 水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 67 . 050 X 04

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 20769—2008代替 GB/T 20769—2006

　　水果和蔬菜中 450 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　Determination of450 pesticidesand related chemicalsresidues

　　in fruitsand vegetables—LC-MS-MS method

　　2008-12-31 发布 2009-05-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 20769—2008

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 原理 1

　　4 试剂和材料 1

　　5 仪器 2

　　6 试样制备与保存 2

　　7 测定步骤 3

　　8 结果计算 4

　　9 精密度 5

　　附录 A(资料性附录) 450 种农药及相关化学品中英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和

　　混合标准溶液浓度表 6

　　附录 B(资料性附录) 450 种农药及相关化学品监测离子对 、碰撞气能量 、去簇电压和保留时间 20

　　附录 C(资料性附录) 450 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图 36

　　附录 D(资料性附录) 450 种农药及相关化学品精密度数据表 53

　　附录 E(资料性附录) 450 种农药及相关化学品英文中文名称对照索引(按英文字母顺序) 67

　　Ⅰ

　　GB/T 20769—2008

　　前 言

　　本标准代替 GB/T 20769—2006《水果和蔬菜中 405 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》。

　　本标准与 GB/T 20769—2006 相比，主要变化如下：

　　— 可测定的农药品种由 405 种增加到 450 种，增加了 ESI 负源检测的农药品种;

　　— 增加了 ESI 负源测试条件 。

　　本标准的附录 A 、附录 B、附录 C、附录 D、附录 E 为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归 口 。

　　本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 、山东农业大学 。

　　本标准主要起草人：庞国芳 、李岩 、范春林 、连玉晶 、曹静 、王雯雯 、郑军红 、刘永明 、曹彦忠 、张进杰 、李学民 。

　　本标准于 2006 年首次发布 。

　　Ⅲ

　　GB/T 20769—2008

　　水果和蔬菜中 450 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　1 范围

　　本标准规定了苹 果 、橙 子 、洋 白 菜 、芹 菜 、西 红 柿 中 450 种 农 药 及 相 关 化 学 品(参 见 附 录 A 和 附录 E)残留量液相色谱-串联质谱测定方法 。

　　本标准适用于苹 果 、橙 子 、洋 白 菜 、芹 菜 、西 红 柿 中 450 种 农 药 及 相 关 化 学 品 残 留的 定 性 鉴 别， 381 种农药及相关化学品残留量的定量测定 。

　　本标准定量测定的 381 种 农 药 及 相 关 化 学 品 方 法 检 出限 为 0 . 01 μg/kg ~ 0 . 606 mg/kg(参 见 附录 A) 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 6379 . 1 测 量 方 法 与结 果 的 准 确度( 正 确度 与 精 密 度 ) 第 1 部 分：总 则 与 定 义(GB/T 6379 . 1—2004 , ISO 5725-1:1994 , IDT)

　　GB/T 6379 . 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第 2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379 . 2—2004 , ISO 5725-2:1994 , IDT)

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008 , ISO 3696:1987 , MOD)

　　GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜取样方法(GB/T 8855—2008 , ISO 874 : 1980 , IDT)

　　3 原理

　　试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，Sep-Pak Vac柱1) 净化，用乙腈+甲苯(3+1)洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量 。

　　4 试剂和材料

　　水为 GB/T 6682 规定的一级水 。

　　4 . 1 乙腈：色谱纯 。

　　4 . 2 正己烷：色谱纯 。

　　4 . 3 异辛烷：色谱纯 。

　　4 . 4 甲苯：优级纯 。

　　4 . 5 丙酮：色谱纯 。

　　4 . 6 二氯甲烷：色谱纯 。

　　4 . 7 甲醇：色谱纯 。

　　4 . 8 微孔过滤膜(尼龙)：13 mm×0 . 2 μm 。

　　4 . 9 Sep-Pak Vac1) 氨基固相萃取柱：1 g , 6 mL或相当者 。

　　1) Sep-Pak Vac 柱是 SUPELCO公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可 。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。

　　1

　　GB/T 20769—2008

　　4 . 10 乙腈+甲苯(3+1 , 体积比)。

　　4 . 1 1 乙腈+水(3+2 , 体积比)。

　　4 . 12 0 . 05%甲酸溶液(体积分数)。

　　4 . 13 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0 . 375 g 乙酸铵加水稀释至 1 000 mL 。

　　4 . 14 无水硫酸钠：分析纯 。用前在 650 ℃灼烧 4 h ,贮于干燥器中，冷却后备用 。

　　4 . 15 氯化钠：优级纯 。

　　4 . 16 农药及相关化学品标准物质：纯度 ≥95%,参见附录 A 。

　　4 . 17 农药及相关化学品标准溶液

　　4 . 17 . 1 标准储备溶液

　　分别称取 5 mg ~ 10 mg(精确至 0 . 1 mg)农药及相关化学品标准物于 10 mL容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇 、甲苯 、丙酮 、乙腈或异辛烷等溶剂溶解并定容至刻度，溶剂选择参见附录 A 。标准储备溶液避光 0 ℃ ~ 4 ℃保存，可使用一年 。

　　4 . 17 . 2 混合标准溶液(混合标准溶液 A 、B、C、D、E 、F 和 G)

　　按照农药及相关化学品的性质和保留时间，将 450 种农药及相关化学品分成 A 、B、C、D、E 、F 和 G七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度 。本标准对 450 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录 A 。

　　依据每种农药及相关化学品的分组 、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于 100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 。混合标准溶液避光 0 ℃ ~ 4 ℃保存，可使用一个月 。

　　4 . 17 . 3 基质混合标准工作溶液

　　农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用空白样品基质溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 A 、B、C、D、E 、F 和 G ,用于做标准工作曲线 。

　　基质混合标准工作溶液应现用现配 。

　　5 仪器

　　5 . 1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI) 。

　　5 . 2 分析天平：感量 0 . 1 mg 和 0 . 01 g 。

　　5 . 3 高速组织捣碎机：转速不低于 20 000 r/min 。

　　5 . 4 离心管：80 mL 。

　　5 . 5 离心机：最大转速为 4 200 r/min 。

　　5 . 6 旋转蒸发仪 。

　　5 . 7 鸡心瓶：200 mL 。

　　5 . 8 移液器：1 mL 。

　　5 . 9 样品瓶：2 mL,带聚四氟乙烯旋盖 。

　　5 . 10 氮气吹干仪 。

　　6 试样制备与保存

　　6 . 1 试样的制备

　　按 GB/T 8855 抽取的水果 、蔬菜样品取可食部分切碎，混匀，密封，作为试样，标明标记 。

　　6 . 2 试样的保存

　　将试样置于 0 ℃ ~ 4 ℃冷藏保存 。

　　2

　　GB/T 20769—2008

　　7 测定步骤

　　7 . 1 提取

　　称取 20 g 试 样(精 确 至 0 . 01 g) 于 80 mL 离 心 管 中，加 入 40 mL 乙 腈，用 高 速 组 织 捣 碎 机 在15 000 r/min,匀浆提取 1 min,加入 5 g 氯化钠，再匀浆提取 1 min,在 3 800 r/min 离心 5 min,取上清液20 mL(相当于 10 g试样量)，在 40 ℃水浴中旋转浓缩至约 1 mL , 待净化 。

　　7 . 2 净化

　　在 Sep-Pak Vac 柱 中 加 入 约 2 cm 高 无 水 硫 酸 钠，并 放 入 下 接 鸡 心 瓶 的 固 定 架 上 。 加 样 前 先 用4 mL乙腈+甲苯(3+1)预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，并更换新鸡心瓶接收 。再每次用 2 mL 乙腈+甲苯(3+1) 洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入柱中 。 在柱上加上 50 mL贮液器，用 25 mL 乙腈+甲苯(3+1)洗脱农药及相关化学品，合并于鸡心瓶中，并在 40 ℃水浴中旋转浓缩至约 0 . 5 mL 。将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，迅速加入 1 mL 的乙腈+水(3+2) ,混匀，经 0 . 2 μm 滤膜过滤后进行液相色谱-串联质谱测定 。

　　7 . 3 液相色谱-串联质谱测定7 . 3 . 1 条件

　　7 . 3 . 1 . 1 A、B、C、D、E、F 组液相色谱-串联质谱测定条件

　　a) 色谱柱：Atlantis T3 , 3 μm , 150 mm × 2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 1 ;

　　表 1 流动相及梯度洗脱条件

　　时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(0 . 05%甲酸水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　4 . 00

　　200

　　50 . 0

　　50 . 0

　　15 . 00

　　200

　　40 . 0

　　60 . 0

　　23 . 00

　　200

　　20 . 0

　　80 . 0

　　30 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　35 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　35 . 01

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　50 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：20 μL ;

　　e) 离子源：ESI ;

　　f) 扫描方式：正离子扫描;

　　g) 检测方式：多反应监测;

　　h) 电喷雾电压：5 000 V ;

　　i) 雾化气压力：0 . 483 MPa ;

　　j) 气帘气压力：0 . 138 MPa ;

　　k) 辅助加热气：0 . 379 MPa ;

　　l) 离子源温度：725 ℃ ;

　　m) 监测离子对 、碰撞气能量和去簇电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 1 . 2 G 组液相色谱-串联质谱测定条件

　　a) 色谱柱：Inert sil C8 , 5 μm , 150 mm×2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　3

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 2 ;

　　表 2 流动相及梯度洗脱条件

　　时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(5 mmol/L 乙酸铵水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　4 . 00

　　200

　　50 . 0

　　50 . 0

　　15 . 00

　　200

　　40 . 0

　　60 . 0

　　20 . 00

　　200

　　20 . 0

　　80 . 0

　　25 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　32 . 00

　　200

　　5 . 0

　　95 . 0

　　32 . 01

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　40 . 00

　　200

　　90 . 0

　　10 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：20 μL ;

　　e) 离子源：ESI ;

　　f) 扫描方式：负离子扫描;

　　g) 检测方式：多反应监测;

　　h) 电喷雾电压：-4 200 V ;

　　i) 雾化气压力：0 . 42 MPa ;

　　j) 气帘气压力：0 . 32 MPa ;

　　k) 辅助加热气：0 . 35 MPa ;

　　l) 离子源温度：700 ℃ ;

　　m) 监测离子对 、碰撞气能量和去簇电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 2 定性测定

　　在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度 >50%,允许 ±20%偏 差;相 对 丰 度 >20% ~ 50%,允 许 ±25%偏 差;相 对 丰 度 >10% ~ 20%,允许 ±30%偏差;相对丰 度 ≤10%,允 许 ±50%偏 差)，则 可 判 断 样 品中 存 在 这 种 农 药 或 相 关 化学品 。

　　7 . 3 . 3 定量测定

　　本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定 。 为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内 。450 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图参见附录 C 。

　　7 . 4 平行试验

　　按以上步骤对同一试样进行平行试验 。

　　7 . 5 空白试验

　　除不称取试样外，均按上述步骤进行 。

　　8 结果计算

　　液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式(1)计算：

　　Xi = ci …………………………( 1 )

　　4

　　GB/T 20769—2008

　　式中：

　　xi— 试样中被测组分含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　ci— 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(μg /mL) ;

　　V— 试样溶液定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　m— 样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g) 。

　　计算结果应扣除空白值 。

　　9 精密度

　　本标准精密度数据是按照 GB/T 6379 . 1 和 GB/T 6379 . 2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以 95%的可信度来计算 。本标准方法的精密度数据参见附录 D 。

　　5

　　GB/T 20769—2008

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　450 种农药及相关化学品中英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度表

　　450 种农药及 相 关 化 学 品 中 英 文 名 称 、方 法 检 出限 、分 组 、溶 剂 选 择 和 混 合 标 准 溶 液 浓 度 表 见表 A. 1 。

　　表 A.1 450 种农药及相关化学品中英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度表

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　检出限/(μg/kg)

　　溶剂

　　混合标准溶液浓度/(μg/mL)

　　A

　　组

　　1

　　异丙威

　　isoprocarb

　　0 . 58

　　甲醇

　　0 . 23

　　2

　　3 , 4 , 5-混杀威

　　3 , 4 , 5-trimethacarb

　　0 . 09

　　甲醇

　　0 . 03

　　3

　　环莠隆

　　cycluron

　　0 . 05

　　甲醇

　　0 . 02

　　4

　　甲萘威

　　carbaryl

　　2 . 58

　　甲醇

　　1 . 03

　　5

　　毒草胺

　　propachlor

　　0 . 07

　　甲醇

　　0 . 03

　　6

　　吡咪唑

　　rabenzazole

　　0 . 33

　　甲醇

　　0 . 13

　　7

　　西草净

　　simetryn

　　0 . 03

　　甲醇

　　0 . 01

　　8

　　绿谷隆

　　monolinuron

　　0 . 89

　　甲醇

　　0 . 36

　　9

　　速灭磷

　　mevinphos

　　0 . 39

　　甲醇

　　0 . 16

　　10

　　叠氮津

　　aziprotryne

　　0 . 35

　　甲醇

　　0 . 14

　　11

　　密草通

　　secbumeton

　　0 . 02

　　甲醇

　　0 . 01

　　12

　　嘧菌磺胺

　　cyprodinil

　　0 . 18

　　甲醇

　　0 . 07

　　13

　　播土隆

　　buturon

　　2 . 24

　　甲醇

　　0 . 90

　　14

　　双酰草胺

　　carbetamide

　　0 . 91

　　甲醇

　　0 . 36

　　15

　　抗蚜威

　　pirimicarb

　　0 . 04

　　甲醇

　　0 . 02

　　16

　　异 噁草松

　　clomazone dimethazone

　　0 . 11

　　甲醇

　　0 . 04

　　17

　　氰草津

　　cyanazine

　　0 . 04

　　甲醇

　　0 . 02

　　18

　　扑草净

　　prometryne

　　0 . 04

　　甲醇

　　0 . 02

　　19

　　甲基对氧磷a

　　paraoxon methyl

　　0 . 19

　　甲醇

　　0 . 08

　　20

　　4 , 4 ′-二 氯 二 苯甲酮

　　4 , 4 ′-dichlorobenzophenone

　　3 . 40

　　甲醇

　　1 . 36

　　21

　　噻虫啉

　　thiacloprid

　　0 . 09

　　甲醇

　　0 . 04

　　22

　　吡虫啉

　　imidacloprid

　　5 . 50

　　甲醇

　　2 . 20

　　23

　　磺噻隆

　　ethidimuron

　　0 . 38

　　甲醇

　　0 . 15

　　24

　　丁嗪草酮

　　isomethiozin

　　0 . 27

　　甲醇

　　0 . 11

　　25

　　燕麦敌

　　diallate

　　22 . 30

　　甲醇

　　8 . 92

　　26

　　乙草胺

　　acetochlor

　　11 . 85

　　甲醇

　　4 . 74

　　27

　　烯啶虫胺a

　　nitenpyram

　　4 . 28

　　甲醇

　　1 . 71

　　6

　　表 A.1(续)

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　检出限/(μg/kg)

　　溶剂

　　混合标准溶液浓度/(μg/mL)

　　28

　　盖草津

　　methoprotryne

　　0 . 06

　　甲醇

　　0 . 02

　　29

　　二甲酚草胺