GB/T 25172-2020 猪常温精液生产与保存技术规范

　　ICS 65 . 020 . 30 B 43

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 25172—2020

　　代替 GB/T 25172—2010

　　猪常温精液生产与保存技术规范

　　Technicalspecificationforproductionandpreservationoffreshboarsemen

　　2020-1 1-19 发布 2021-06-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 25172—2020

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1 . 1—2009 给出的规则起草。

　　本标准代替 GB/T 25172—2010《猪常温精液生产与保存技术规范》，与 GB/T 25172—2010 相比主要变化如下：

　　— 增加了“GB 23238”和“GB/T 6682”(见第 2 章);

　　— 增加了“宜用设备采精法，按使用说明书操作”(见 5 . 1 . 2 . 3) ;

　　— 将精子畸形率由“≤ 18%”修改为“≤20%”(见 5.2.2 , 2010 年版的 5.2) ;

　　— 删除了“细菌菌落数”(见 5 . 2 , 2010 年版的 5 . 2) ;

　　— 精子活力证实方法增加了“使用自动分析仪器应按其检测方法操作”(见 5 . 2 . 3 . 2) ;

　　— 将稀释液 pH 值“6.4~7.2”修改为“6.8~7.2”(见 4.5.4 , 2010 年版的 6.1.3) ;

　　— 将稀释后精液“每头份剂量”“总精子数”修改为“剂量、每剂量中直线前进运动精子数应符合GB 23238 的规定。”(见 5 . 4 . 1 , 2010 年版的 6 . 2 . 5) ;

　　— 将“精液产品质量(见表 2)”修改为“常温精液产品质量和标志应符合 GB 23238 的规定。”(见5 . 6 . 4 , 2010 年版的 8 . 4) 。

　　本标准由中华人民共和国农业农村部提出。

　　本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口 。

　　本标准起草单位：青岛市畜牧兽医研究所、华南农业大学、北京养猪育种中心、黄岛区家畜改良站。本标准主要起草人：戈新、张守全、王建华、周海深、张宝珣、李培培、刘玉华、程明、孟庆利。

　　GB/T 25172—2020

　　猪常温精液生产与保存技术规范

　　1 范围

　　本标准规定了猪常温精液生产与保存的基本要求和技术要求，描述了对应的试验方法，给出了保存和运输的内容。

　　本标准适用于猪的常温精液生产与保存。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注 日期的引用文件，仅注 日期的版本适用于本文件 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB 23238 种猪常温精液

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　原精液 rawsemen

　　采集后未经稀释的精液。

　　3.2

　　常温精液 freshsemen

　　经稀释后在 16 ℃ ~18 ℃下保存，仍具有受精能力的精液。

　　注：改写 GB 23238—2009,定义 3 . 2 。

　　3.3

　　精子活力 sperm motility

　　在 37 ℃下呈直线前进运动的精子占总精子数的百分率。

　　3.4

　　精子密度 sperm concentration

　　单位体积精液中的精子数。

　　3.5

　　精子畸形率 abnormalsperm percentage

　　畸形精子占总精子数的百分率。

　　4 基本要求

　　4 . 1 种公猪

　　应健康且达到种用要求。 成年公猪宜每周采精二次至三次，青年公猪宜每周一次至二次。

　　GB/T 25172—2020

　　4 . 2 采精员

　　应经过专业培训，工作时应着洁净工作衣、帽，穿长胶鞋，戴无毒塑料手套。

　　4 . 3 采精室

　　应设置采精区和安全区。 采精区设置假台猪，地面防滑，并保持清洁、安静和避光。

　　4 . 4 精液处理室

　　应设置精液检查、稀释和分装区，温度宜控制在 22 ℃ ~25 ℃ ,避免太阳光直射或紫外灯照射。配

　　备仪器和用品参见附录 A。

　　4 . 5 稀释液

　　4 . 5 . 1 配制用水应符合 GB/T 6682 中二级水或三级水的要求。

　　4 . 5 . 2 商品稀释剂按说明书使用。 不得使用过期或变质稀释剂。

　　4 . 5 . 3 自配稀释液所用试剂应为分析纯，稀释液配方参见附录 B。

　　4.5.4 稀释液 pH 值应为 6.8~7.2。

　　4.5.5 使用前 1 h 配制，配制后应及时贴上标签，标明品名、配制 日期和时间、经手人。

　　4.5.6 稀释液应密封后置于冰箱中 0 ℃ ~4 ℃冷藏，保存时间不应超过 24 h。

　　5 技术要求

　　5 . 1 精液采集

　　5 . 1 . 1 采精前准备

　　5 . 1 . 1 . 1 集精杯或保温杯(内置无毒塑料袋并覆盖四层纱布或一层精液过滤纸)、载玻片、盖玻片、精液

　　处理器皿应预热至 37 ℃。

　　5. 1 . 1 .2 显微镜载物台恒温板应预热至 37 ℃。精子密度仪使用前应预热。

　　5 . 1 . 2 采精

　　5 . 1 . 2 . 1 应剪去公猪包皮部长毛，清洁体表，擦干水渍。

　　5. 1 .2.2 应挤净包皮积液，先用 0.1%高锰酸钾溶液清洗腹部和包皮，再用温水清洗后擦干。

　　5 . 1 . 2 . 3 宜用设备采精法，按使用说明书操作。 手握法采精时，应一只手戴双层无毒聚乙烯手套，按摩公猪包皮部，待公猪爬跨假台猪并伸出阴茎，脱去外层手套，握紧龟头，使其不能旋转，顺势将阴茎的“S”状弯曲延直。 另一只手持集精杯或保温杯，弃去最初射出的少量精液，收集精液至射精完毕。

　　5 . 1 . 2 . 4 采精完毕后，应标记公猪耳号，送至精液处理室。

　　5 . 2 精液检验

　　5 . 2 . 1 检验项目

　　外观、气味、采精量、精子活力、精子密度和精子畸形率。

　　5 . 2 . 2 原精液质量

　　应符合表 1 的规定，其中任何一项不符合要求的则废弃。

　　GB/T 25172—2020

　　表 1 原精液质量

　　5 . 2 . 3 证实方法

　　5 . 2 . 3 . 1 采精量

　　采用称量法计算采精量，1 g 相当于 1 mL。

　　5 . 2 . 3 . 2 精子活力

　　取中层精液 10 μL~15 μL,在 200 倍~400 倍显微镜下检查。每份精液取样二次，每个样观察三个

　　视野，计算平均值。 使用自动分析仪器应按其检测方法操作。

　　5 . 2 . 3 . 3 精子密度

　　采用精子密度仪测定。 应定期用血细胞计数板法校正。

　　5 . 2 . 3 . 4 精子畸形率

　　采用伊红或姬姆萨染色法检查时，在 200 倍~400 倍显微镜下观察左、中、右三个视野中不少于 200

　　个精子。 也可采用相差显微镜直接观察。 每二个月抽检一次。

　　5 . 3 精液稀释

　　5 .3 . 1 精液采集后应尽快稀释，放置时间不宜超过 15 min。

　　5.3.2 采用等温稀释。精液与稀释液温差不得超过 1 ℃ ,根据精液温度调节稀释液温度，不得反向操作。

　　5 . 3 . 3 将稀释液沿杯壁缓慢加入精液中，轻轻摇动或沿一个方向搅拌，混合均匀。 高倍稀释时，先低倍稀释(1 ∶ 1) ~(1 ∶ 2) , 30 s 后再加入余下的稀释液。

　　5.3.4 稀释液总量以体积V计，数值以毫升(mL)表示，按式(1)计算：

　　V v2 -v1 ……………………( 1 )

　　式中：

　　v1 — 采精量，单位为毫升(mL) ;

　　c — 精子密度，单位为 108 个每毫升(108 个/mL) ;

　　s — 每剂量中直线前进运动精子数，单位为 108 个;

　　v2 — 剂量，单位为毫升(mL)。

　　5 .3 .5 精液稀释后应静置 5 min,按 5 .2 .3 .2 检测精子活力，活力不得低于 70% 。

　　GB/T 25172—2020

　　5 . 4 精液分装

　　5 . 4 . 1 剂量、每剂量中直线前进运动精子数应符合 GB 23238 的规定。

　　5 . 4 . 2 可采用袋装或瓶装，应使用对精子无毒害作用且灭菌的一次性塑料或硅胶制品。

　　5 . 4 . 3 分装完毕，应排出空气后密封。

　　5 . 5 记录

　　应及时将精液检验、精液稀释、精液分装的处理和结果填入精液质量检测登记表，登记表见附录 C。

　　5 . 6 精液保存和运输

　　5.6. 1 精液应置于 22 ℃ ~25 ℃下 1 h~2 h后，平放入 16 ℃ ~18 ℃恒温箱内避光保存;也可用12 层~ 15 层纱布(或干毛巾)包严直接放入恒温箱内。

　　5.6.2 保存的精液每隔 4 h~8 h摇动一次并记录，摇动时应轻缓均匀。

　　5 . 6 . 3 每批精液应留样备查。 同批号的精液在有效期内应抽样检查并记录，常温精液保存登记表见附录 D。

　　5 . 6 . 4 常温精液产品质量和标志应符合 GB 23238 的规定。

　　5.6.5 精液应置于 16 ℃ ~18 ℃的恒温箱内避光运输，运输过程中避免强烈震动和碰撞。

　　GB/T 25172—2020

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　精液处理室配备仪器和用品

　　精液处理室配备仪器和用品见表 A. 1 。

　　表 A.1 精液处理室配备仪器和用品

　　GB/T 25172—2020

　　表 A.1(续)

　　GB/T 25172—2020

　　附 录 B

　　(资料性附录)

　　常见常温精液稀释液配方

　　常见常温精液稀释液配方见表 B. 1 。

　　表 B.1 常见常温精液稀释液配方

　　附 录 C

　　(规范性附录)

　　精液质量检测登记表

　　精液质量检测登记表见表 C. 1 。

　　表 C.1 精液质量检测登记表

　　附 录 D

　　(规范性附录)

　　常温精液保存登记表

　　常温精液保存登记表见表 D. 1 。

　　表 D.1 常温精液保存登记表