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GB/T 20886.2-2021 酵母产品质量要求 第2部分:酵母加工制品

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资料介绍

  ICS 67 . 040 CCS X 69

  中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

  GB/T 20886 . 2—2021代替 GB/T 23530—2009

  酵母产品质量要求

  第 2 部分:酵母加工制品

  Qualityrequirementsforyeastproducts—

  part2:processedyeastproducts

  2021-12-31 发布 2022-07-01 实施

  国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

  发

  布

  GB/T 20886 . 2—202 1

  前 言

  本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

  本文件是 GB/T 20886《酵母产品质量要求》的第 2 部分。 GB/T 20886 已经发布了以下部分:

  — 第 1 部分:食品加工用酵母;

  — 第 2 部分:酵母加工制品。

  本文件代替 GB/T 23530—2009《酵母抽提物》,与 GB/T 23530—2009 相比,主要技术变化如下:

  — 增加了酵母加工制品、酵母水解物、核苷酸型酵母水解物、风味型酵母水解物、酵母细胞壁、培养基用酵母加工制品的术语和定义(见 3.1、3.5~3.9) ;

  — 更改了酵母抽提物定义(见 3 . 2 , 2009 年版的 3 . 1 . 1) ;

  — 更改了“I+G 型酵母抽提物”的名称,改为“核苷酸型酵母抽提物”(见 3 .3 , 2009 年版的 4 .2) ;

  — 更改了酵母抽提物分类[见 5 .1a) , 2009 年版的第 4 章];

  — 增加了按应用进行的产品分类(见 5 . 2) ;

  — 增加了酵母水解物的理化要求(见 6 . 2 . 3) ;

  — 增加了风味型酵母水解物的理化要求(见 6 . 2 . 4) ;

  — 增加了酵母细胞壁的理化要求(6 . 2 . 5) ;

  — 增加了培养基用酵母加工制品的理化要求(见 6 . 2 . 6) 。

  请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

  本文件由全国食品工业标准化技术委员会(SAC/TC 64)提出并归口 。

  本文件起草单位:安琪酵母股份有限公司、大连珍奥生物技术股份有限公司、广西一品鲜生物科技有限公司、珠海天香苑生物科技发展股份有限公司、凯爱瑞配料贸易(上海)有限公司、山东圣琪生物有限公司、帝斯曼(中国)有限公司、英联马利(北京)食品销售有限公司、中国食品发酵工业研究院有限公司。

  本文件主要起草人:武竹英、陈蓉、陈玉平、周世伟、陈雪松、王杰红、邓娟娟、易勇、杜建华、李天宇、郭新光、刘明、黄国新、李沛、吴李娣、张敬松、张继祥、过菲、王丽霞、罗必英、孟镇、吴晓倩、廖英扬、刘帅、潘玉。

  本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:

  — 2009 年首次发布为 GB/T 23530—2009 ;

  — 本次为第一次修订。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  引 言

  随着发酵工业的迅速发展,食品加工用酵母及其相关产品种类向多元化发展,产品质量提高到一个新的水平,行业从技术到品种都有了长足的发展与进步。 制定 GB/T 20886《酵母产品质量要求》,是对食品加工用酵母及其相关产品的质量和对应检测方法的规范化和标准化,是规范食品加工用酵母及其相关产品行业秩序、促进产业发展的基础性工作。

  GB/T 20886《酵母产品质量要求》拟由三部分构成:

  — 第 1 部分:食品加工用酵母;

  — 第 2 部分:酵母加工制品;

  — 第 3 部分:富营养素酵母。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  酵母产品质量要求

  第 2 部分:酵母加工制品

  1 范围

  本文件规定了酵母加工制品的术语和定义、缩略语、产品分类、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存。

  本文件适用于酵母加工制品的生产、检验和销售。

  2 规范性引用文件

  下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中,注 日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注 日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

  GB/T 191 包装储运图示标志

  GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备

  GB/T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备

  GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备

  GB 5009 . 4 食品安全国家标准 食品中灰分的测定

  GB 5009 . 5—2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定

  GB 5009 . 44—2016 食品安全国家标准 食品中氯化物的测定

  GB 5009 . 91 食品安全国家标准 食品中钾、钠的测定

  GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法

  3 术语和定义

  下列术语和定义适用于本文件。

  3.1

  酵母加工制品 processedyeastproducts

  以食品加工用酵母为主要原料,在酵母自身的酶或外加酶的作用下 自溶或酶解,经分离或不分离、干燥或不干燥等工艺制成的产品。

  3.2

  酵母抽提物 yeastextract

  以食品加工用酵母为主要原料,在酵母自身酶或外加食品加工用酶的作用下,酶解自溶并分离提取后,经过或不经过热加工等工艺,得到的含有氨基酸、肽、核苷酸等酵母细胞中的可溶性成分的产品,属于食品配料。

  注:生产过程中根据需要可加入食用盐。

  3.3

  核苷酸型酵母抽提物 richnucleotideyeastextract

  以食品加工用富核酸酵母为主要原料,在酵母自身酶或外加食品加工用酶的作用下,酶解自溶并分

  GB/T 20886 . 2—202 1

  离提取后,经过或不经过热加工等工艺,得到的含有酵母自身的氨基酸、肽、核苷酸等酵母细胞中的可溶性成分的产品,属于食品配料。

  注:生产过程中根据需要可加入食用盐。

  3.4

  风味型酵母抽提物 flavouredyeastextract

  以酵母抽提物为主要原料,根据需要加入麦芽糊精、葡萄糖、谷氨酸钠、5′-呈味核苷酸二钠、食用盐

  等食品配料进行调配,或经美拉德反应等工艺,赋予产品特殊风味的产品,属于食品配料(酵母抽提物基

  料不应低于 55% ,以干基计)。

  3.5

  酵母水解物 autolyzedyeast

  自溶酵母

  酵母自溶物

  以食品加工用酵母为主要原料,在酵母自身的酶或外加食品加工用酶的作用下,经酶解 自溶、浓缩或干燥等工艺,制得的含酵母全细胞成分的产品,属于食品配料。

  注:生产过程中根据需要可加入食用盐。

  3.6

  核苷酸型酵母水解物 richnucleotideautolyzedyeast

  以食品加工用富核酸酵母为主要原料,在酵母 自身的酶或外加食品加工用酶的作用下,经酶解 自溶、浓缩或干燥等工艺制得的含酵母全细胞成分的产品,属于食品配料。

  注:生产过程中根据需要可加入食用盐。

  3.7

  风味型酵母水解物 flavouredautolyzedyeast

  风味型酵母自溶物

  以酵母水解物为主要原料,根据需要加入麦芽糊精、葡萄糖、谷氨酸钠、5′-呈味核苷酸二钠、食用盐

  等食品配料进行调配,或经过美拉德反应等工艺,赋予产品特殊风味的产品,属于食品配料(酵母水解物

  基料不应低于 55% ,以干基计)。

  3.8

  酵母细胞壁 yeastcellwall

  以食品加工用酵母为主要原料,经酶解自溶、分离、提取后获得的,含有酵母葡聚糖、甘露寡糖、蛋白质和少量几丁质的酵母细胞的外壁物质,属于食品配料。

  3.9

  培养基用酵母加工制品 processedyeastproductsusedforculturemedium

  用作微生物培养营养源的酵母加工制品,包括培养基用酵母抽提物(酵母浸出物、酵母蛋白胨),培养基用酵母水解物(酵母自溶物)等。

  4 缩略语

  下列缩略语适用于本文件。

  AMP : 5′-腺苷酸二钠(Disodium adenosine-5′-monophosphate)

  CMP : 5′-胞苷酸二钠(Disodium cytidine-5 -monophosphate)

  GMP : 5′-鸟苷酸二钠(Disodium guanylate-5′-monophosphate)

  IMP : 5′-肌苷酸二钠(Disodium inosinate-5′-monophosphate)

  UMP : 5′-尿苷酸二钠(Disodium uridine-5 -monophosphate)

  GB/T 20886 . 2—202 1

  5 产品分类

  5 . 1 按工艺分类

  酵母加工制品按工艺分类,可分为:

  a) 酵母抽提物。包括纯品型酵母抽提物和核苷酸型酵母抽提物。核苷酸型酵母抽提物又可分为Ⅰ 型和 Ⅱ 型。

  b ) 风味型酵母抽提物。

  c ) 酵母水解物。包括纯品型酵母水解物和核苷酸型酵母水解物。

  d ) 风味型酵母水解物。

  e ) 酵母细胞壁。

  f) 培养基用酵母加工制品。

  5 . 2 按应用分类

  酵母加工制品按应用分类,可分为:

  a) 食品配料用酵母加工制品,包括酵母抽提物、风味型酵母抽提物、酵母水解物、风味型酵母水解物和酵母细胞壁。

  b ) 发酵用酵母加工制品,包括培养基用酵母加工制品。

  6 要求

  6 . 1 感官要求

  应符合表 1 的规定。

  表 1 感官要求

  6 . 2 理化要求

  6 . 2 . 1 酵母抽提物

  应符合表 2 的规定。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  表 2 酵母抽提物的理化要求

  6 . 2 . 2 风味型酵母抽提物

  应符合表 3 的规定。

  表 3 风味型酵母抽提物的理化要求

  6 . 2 . 3 酵母水解物

  应符合表 4 的规定。

  表 4 酵母水解物的理化要求

  GB/T 20886 . 2—202 1

  表 4 酵母水解物的理化要求(续)

  6 . 2 . 4 风味型酵母水解物

  应符合表 5 的规定。

  表 5 风味型酵母水解物的理化要求

  6 . 2 . 5 酵母细胞壁

  应符合表 6 的规定。

  表 6 酵母细胞壁的理化要求

  6 . 2 . 6 培养基用酵母加工制品

  应符合表 7 的规定。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  表 7 培养基用酵母加工制品理化要求

  7 试验方法

  7 . 1 一般要求

  试验方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合 GB/T 6682—2008 中的三级水要求,所用试剂,在未注明其他规格时,均指分析纯。 分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按 GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603 的规定制备。 试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。

  7 . 2 感官要求

  取适量样品,放入无色、洁净、干燥的玻璃杯(或白瓷盘)中,置于明亮处,在 自然光下用肉眼观察其形态、色泽,嗅其气味,检查有无正常视力可见杂质。

  7 . 3 水分

  按附录 A 执行。

  7 . 4 氯化钠

  按 GB 5009 . 44—2016 中 电位滴定法测定。 样品的处理按 GB 5009 . 44—2016 中 5 . 2 . 2 执行;将GB 5009 . 44—2016 公式(3) 中 的质量转换系数由 0 . 035 5 改为 0 . 058 5,计量单位转换为克每百克

  (g/100 g)。

  7 . 5 总氮

  按附录 B执行。

  7 . 6 氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)

  按附录 C执行。

  7 . 7 铵盐

  按附录 D执行。

  7 . 8 不溶物

  按附录 E 执行。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  7 . 9 谷氨酸、谷氨酸占总蛋白质百分比

  按附录 F执行。

  7 . 10 总灰分

  按附录 G 执行。

  7 . 1 1 核苷酸、x(IMP+GMP+AMP)∶x(CMP+UMP)

  按附录 H 执行。

  7 . 12 钾

  按 GB 5009 . 91 规定的方法测定。

  7 . 13 多糖

  按附录 I 执行。

  7. 14 PH

  按附录 J 执行。

  8 检验规则

  8 . 1 组批

  同原料、同工艺、同一生产线连续生产的、质量均一的产品为一批。

  8 . 2 抽样

  8 . 2 . 1 产品按批抽样。 批量不大于 600 件时,从不少于 3 件包装中抽取样品;批量大于 600 件时,从不少于 0.5%比例的包装中抽取样品。每份样本总量不少于三倍试验检测量。

  8.2.2 桶装产品应从表面 10 cm 以下处抽取样品。取样器应洁净、干燥。

  8 . 2 . 3 抽取样品三份,签封。 粘贴标签,在标签上注明产品名称、生产厂名及地址、批号、取样 日期及地点、取样人姓名。 一份用于感官和理化检验,一份用于微生物检验,一份封存,保留半个月备查。 做微生物检验时,取样器和玻璃瓶应事先灭菌(样品不应接触瓶口),当抽取的样本总量少于 200 g 时,应适当加大抽样比例。

  8 . 3 出厂检验

  8 . 3 . 1 产品出厂前,应按本文件规定逐批进行检验。 检验符合本文件要求后方可出厂。

  8 . 3 . 2 检验项 目:

  — 酵母抽提物及酵母水解物:感官、总氮、氯化钠,针对核苷酸型产品还需检测核苷酸含量和x( IMP+GMP+AMP) ∶ x(CMP+UMP) 。

  — 风味型酵母抽提物及风味型酵母水解物:感官、总氮和氯化钠。

  — 酵母细胞壁:感官、总氮、多糖、水分。

  — 培养基用酵母加工制品:感官、总氮、pH。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  8 . 4 型式检验

  8 . 4 . 1 检验项 目:本文件中全部要求项 目 。

  8 . 4 . 2 一般情况下,同一类产品的型式检验每年至少进行一次,有下列情况之一者,亦应进行:

  a ) 原辅材料有较大变化时;

  b) 更改关键工艺或设备时;

  c) 新试制的产品或正常生产的产品停产三个月后,重新恢复生产时;

  d ) 出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时;

  e ) 国家监督机构按有关规定需要抽检时。

  8 . 5 判定规则

  8 . 5 . 1 抽取样品经检验,检验项目全部符合要求,判该批产品符合本文件。

  8 . 5 . 2 检验项目如有一项至两项不符合要求,应重新 自 同批产品中抽取两倍量样品进行复检,以复检结果为准;若仍有一项不符合要求,判定该批产品不符合本文件。 检验结果如有三项及以上指标不符合要求,判定该批产品不符合本文件。

  9 标志、包装、运输、贮存

  9 . 1 标志

  9 . 1 . 1 销售包装使用标签时,还应注明产品分类。

  9 . 1 . 2 包装储运图示的标志应符合 GB/T 191 的有关规定。

  9 . 2 包装

  包装容器应整洁、无破损,应符合国家相关规定。

  9 . 3 运输

  9 . 3 . 1 运输工具应保持清洁、干燥,无外来气味和污染物。

  9 . 3 . 2 产品在运输时,保持干燥、洁净,不应与有毒、有害、有腐蚀性物品混装混运,避免 日 晒和雨淋。

  9 . 3 . 3 货物装卸时应轻拿轻放。

  9 . 4 贮存

  9 . 4 . 1 成品不应露天堆放,不应与有霉变、有毒、有异味、有腐蚀性物质混放。

  9 . 4 . 2 成品应贮存在清洁、干燥、通风的仓库内。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 A (规范性)水分的测定

  A.1 仪器设备

  A.1 . 1 电热干燥箱:控温精度 ±2 ℃ 。

  A.1 .2 电子天平:感量 0.1 mg。

  A.1 . 3 称量皿:50 mm×30 mm。

  A.1 . 4 干燥器:用变色硅胶作干燥剂。

  A.2 试验步骤

  根据产品状态称取 0.3 g~2.0 g(精确至 0.000 1 g)样品于烘干至恒重的称量皿中均匀铺开,然后放入 103 ℃ ±2 ℃电热干燥箱内,烘 6 h后,加盖取出移入干燥器内冷却,30 min后称量。

  A.3 试验数据处理

  水分的含量按式(A. 1)计算:

  x …………………………( A.1 )

  式中:

  x1 — 样品的水分含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  m1 — 烘干前称量皿加样品的质量,单位为克(g) ;

  m2 — 烘干后称量皿加样品的质量,单位为克(g) ;

  m — 称量皿的质量,单位为克(g)。

  计算结果表示到小数点后一位。

  A.4 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过其算术平均值的 5%。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 B (规范性)总氮的测定

  B.1 试验步骤

  按 GB 5009 . 5—2016 第一法。

  B.2 试验数据处理

  样品的除 NaCl 干基率按式(B.1)计算:

  式中:

  ∞ — 样品的除 NaCl 干基率;

  100 — 换算系数;

  X1 — 样品的水分含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  X2 — 样品中氯化钠含量,单位为克每百克(g/100 g)。

  总氮的含量按式(B. 2)计算:

  X

  式中:

  X3 — 试样中总氮的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  V1 — 试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积,单位为毫升(mL) ;

  V2 — 试剂或材料空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积,单位为毫升(mL) ;

  c1 — 硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L) ;

  0 . 014 0 — 1 . 0 mL硫酸[c(1 / 2H 2 SO4) = 1 . 000 mol/ L]或盐酸[c( HCl) = 1 . 000 mol/ L]标准滴定溶液相当的氮的质量,单位为克(g) ;

  m3 — 试样的质量,单位为克(g) ;

  ∞ — 样品的除 NaCl干基率,%,计算细胞壁总氮含量(以干基计)时,∞ 为 V3 — 吸取消化液的体积,单位为毫升(mL) ;

  100 — 换算系数。

  计算结果表示到小数点后一位。

  B.3 精密度

  在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的 10%。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 C

  (规范性)

  氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)的测定

  C.1 氨基酸态氮的测定

  C.1 . 1 第一法 滴定法(仲裁法)

  C.1 . 1 . 1 原理

  利用氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定后定量,以酸度计指示终点。

  C.1 . 1 . 2 试剂或材料

  C.1 . 1 .2. 1 氢氧化钠标准溶液[c(NaOH) =0.05 mol/L]。

  C.1 . 1 .2.2 甲醛溶液(36%~38%):应不含有聚合物(没有沉淀且溶液不分层)。

  C.1 . 1 . 3 仪器设备

  C.1 . 1 .3. 1 酸度计:直接读数,pH 测量范围 0~14,精度 ±0.01。

  C.1 . 1 .3 .2 电磁搅拌器。

  C.1 . 1 .3 .3 碱式滴定管。

  C.1 . 1 . 4 试验步骤

  称取样品 5 g(精确至 0.000 1 g) ,加水溶解并定容至 100 mL。吸取样品溶液 5.0 mL 于 100 mL烧杯中,加入 55 mL水,用氢氧化钠标准溶液(C.1.1.2.1)滴定至 pH 8.2,并保持 1 min 不变,此结果为游离酸度,不予计量体积。慢慢加入甲醛溶液(C.1.1.2.2) 10 mL,放置 1 min后,用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至 pH 9.20,记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL)。同时做空白试验,记录加入甲醛溶液后,空白试验所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL)。

  C.1 . 1 . 5 试验数据处理

  按式(C. 1)计算氨基酸态氮的含量:

  X

  式中:

  X4 — 样品的氨基酸态氮的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  c1 — 氢氧化钠标准滴定溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L) ;

  V4 — 加入甲醛溶液后,滴定样品消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL) ;

  V5 — 加入甲醛溶液后,空白试验时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL) ;

  20 — 样品稀释倍数;

  0.014 — 与 1.00 mL氢氧化钠标准溶液[c(NaOH) = 1.000 mol/L]相当的以克表示的氨基酸态氮的质量;

  m4 — 样品的质量,单位为克(g) ;

  ∞ — 样品的除 NaCl 干基率,%。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  计算结果表示到小数点后两位。

  C.1 . 1 . 6 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的 5%。

  C.1 .2 第二法 分光光度法

  C.1 . 2 . 1 原理

  位于酵母抽提物中游离氨基酸末端的—NH2 ,与合成剂 1-2 萘醌 4-磺酸钠(NQS)反应,产生的螯合物对于 475 nm 波长的光具有明显的吸收特性。用甘氨酸为基准物,制备不同浓度的标准溶液,以其浓

  度和相应吸光度值建立标准曲线,得到浓度和吸光度的线性关系,进而测试并计算出待测样品的氨基酸态氮含量。

  C.1 . 2 . 2 试剂或材料

  C.1 .2.2. 1 甘氨酸:纯度>98%。

  C.1 .2.2.2 萘醌 4-磺酸钠(NQS)。

  C.1 . 2 . 2 . 3 硼酸 。

  C.1 .2 .2 .4 无水乙醇。

  C.1 .2.2.5 氢氧化钠溶液:32%(质量分数)。

  C.1 .2.2.6 硼酸缓冲剂(pH 8.8)。

  称取 1.5 g 硼酸,加水溶解并定容至 500 mL,用 32%氢氧化钠将 pH 调整到 8.8。该溶液在 4 ℃条

  件下可保存 1 周 。

  C.1 .2.2.7 萘醌 4-磺酸钠试剂或材料。

  称取 500 mg NQS,加入 50 mL水和 50 mL无水乙醇。该溶液在 4 ℃条件下可保存 1 周。

  C.1 .2 .2 .8 甘氨酸基准溶液。

  甘氨酸母液的制备:准确称取约 250 mg±1 mg 的甘氨酸,用水溶解并定容到 250 mL。该溶液在4 ℃ 条件下可保存 1 周。

  甘氨酸子液的制备:分别取 5 mL、10 mL、20 mL甘氨酸母液于 100 mL 容量瓶中,定容至刻度,配制成质量浓度分别为 0.05 g/L、0.1 g/L、0.2 g/L 的甘氨酸子液。

  注:在绘制标准曲线时,至少要配制 3 个不同浓度的甘氨酸子液;每次测定前,需重新配制甘氨酸子液。

  C.1 . 2 . 3 仪器设备

  C.1 . 2 . 3 . 1 聚丙烯(PP)试管:10 mL。

  C.1 . 2 . 3 . 2 聚碳酸酯(PC)比色皿:3 mL。

  C.1 .2 .3 .3 可见光分光光度计。

  C.1 .2.3.4 用于 10 mL试管加热的加热器,40 ℃。

  C.1 . 2 . 3 . 5 单标线移液管:1 mL。

  C.1 .2 .3 .6 数显连续分配器。

  C.1 .2.3.7 电子天平:感量 0.1 mg。

  C.1 . 2 . 4 样品

  称取样品 8.0 g~10.0 g(精确至 0.000 1 g) ,用去离子水溶解并定容到 100 mL,移取 1 mL 初次定容溶液到 100 mL容量瓶中,再次定容到刻度。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  C.1 . 2 . 5 试验步骤

  C.1 . 2 . 5 . 1 测定

  分别取 5 个试管,按表 C. 1 顺序依次加入相应试剂或材料后,塞紧管口,用旋涡混合器轻轻混匀,然

  后将试管在 40 ℃的干燥器中放置 90 min。取出试管后,每支试管中加入 4 mL 去离子水,翻转混合,用空白溶液调零,在 475 nm 处测定各样品的吸光度。

  表 C.1 溶液配制梯度表

  C.1 . 2 . 5 . 2 标准曲线的建立

  以甘氨酸子溶液浓度对应的氨基酸态氮的含量(见表 C. 2)为纵坐标,测得的 OD 值为横坐标绘制标准曲线。

  表 C.2 不同浓度的甘氨酸子溶液对应的氨基酸态氮含量

  C.1 . 2 . 6 试验数据处理

  氨基酸态氮的含量,按式(C. 2)计算:

  X4 = × 100 =(k× D+b)× 1 000 ……………( C.2 )

  式中:

  X4 — 样品氨基酸态氮含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  k — 标准曲线斜率,需介于 0.036 5~0.039 5 之间;

  D — 样品对 475 nm 波长光的吸光度值;

  b — 标准曲线截距;

  m5 — 样品质量,单位为克(g) ;

  GB/T 20886 . 2—202 1

  狑 — 样品的除 NaCl 干基率,% ;

  100 — 样品定容体积,单位为毫升(mL) ;

  100 — 样品溶液稀释倍数; 1 000— 转换系数。

  计算结果表示到小数点后两位。

  C.1 . 2 . 7 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的 5%。

  C.2 氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)的计算

  氨基酸态氮占总氮百分比以质量分数计,按式(C. 3)计算:

  狑 …………………………( C.3 )

  式中:

  狑1 — 样品氨基酸态氮占总氮百分比,% ;

  x3 — 总氮含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  x4 — 氨基酸态氮含量,单位为克每百克(g/100 g)。

  计算结果表示到小数点后一位。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 D (规范性)铵盐的测定

  D.1 溶液

  所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

  D.1 . 1 氢氧化钠溶液(400 g/L)

  称取氢氧化钠 40 g,溶于 100 mL水中,静置,吸取上层清液于带橡皮塞的瓶内。

  D.1 .2 硼酸溶液(20 g/L)

  称取 20 g 硼酸,加水溶解后并稀释至 1 000 mL。

  D.1 . 3 盐酸标准滴定溶液[c(Hcl)= 0 . 1 mol/L]

  按 GB/T 601 配制与标定。

  D.1 .4 甲基红乙醇溶液( 1 g/L)

  称取 0.1 g 甲基红,溶于 95%乙醇,用 95%乙醇稀释至 100 mL。

  D.1 .5 溴甲酚绿乙醇溶液( 1 g/L)

  称取 0.1 g 溴甲酚绿,溶于 95%乙醇,用 95%乙醇稀释至 100 mL。

  D.1 . 6 溴甲酚绿-甲基红混合指示剂

  1 份甲基红乙醇溶液与 5 份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。

  D.2 仪器设备

  D.2 . 1 凯氏定氮仪:成套仪器或自行组装的仪器。

  D.2.2 电子天平:感量 0.1 mg。

  D.2 . 3 滴定管:50 mL。

  D.3 试验步骤

  D.3. 1 先在接收瓶中加入 25 mL 硼酸溶液(D. 1. 2) , 以及 1 滴~ 2 滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂

  (D. 1 . 6) , 并使冷凝管的下端伸入液面下。

  D.3.2 称取样品 1.0 g~2.0 g,用少量水多次溶解并转移至凯氏定氮装置的反应室中。将 10 mL 氢氧

  化钠溶液(D. 1 . 1)倒入小烧杯中,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞塞紧,并加水于小玻杯内以

  防漏气。夹紧螺旋夹,开始蒸馏。蒸馏 5 min,移动接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸馏 1 min。然后

  用少量水冲洗冷凝管下端外部。 取下接收瓶,用盐酸标准滴定溶液(D. 1 . 3)滴定至绿色消失转变为灰红色为终点。 同时做空白试验。

  D.4 试验数据处理

  铵盐含量(以氮计)按式(D. 1)计算:

  GB/T 20886 . 2—202 1

  X

  式中:

  X5 — 样品中铵盐的含量(以氮计),单位为克每百克(g/100 g) ;

  c2 — 盐酸标准滴定溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L) ;

  V6 — 样品消耗盐酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL) ;

  V7 — 试剂空白消耗盐酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL) ;

  0.014 0 — 与 1.00 mL盐酸[c(HCl) = 1.000 mol/L]相当的以克表示的氮的质量;

  m6 — 样品的质量,单位为克(g) ;

  ∞ — 样品的除 NaCl 干基率,%。

  计算结果表示到小数点后一位。

  D.5 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的 10%。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 E (规范性)

  不溶物的测定

  E.1 仪器设备

  E.1 . 1 三角瓶:250 mL。

  E.1 . 2 G3 玻璃坩埚过滤器。

  E.1 . 3 电热干燥箱:控温精度 ±2 ℃ 。

  E.1 .4 电子天平:感量 0.1 mg。

  E.1 . 5 干燥器:用变色硅胶作干燥剂。

  E.2 试验步骤

  称取样品 5 g(精确至 0. 01 g) 于 250 mL 三角瓶中,加 75 mL 水,充分溶解。盖上表面皿,微沸 2 min, 用已在 103 ℃ ±2 ℃下恒重并已称量的 G3 玻璃坩埚过滤器过滤,用 50 mL水,分 2~3 次洗涤,用 G3 玻璃坩埚过滤器过滤,将过滤器连同滤渣置于 103 ℃ ±2 ℃干燥 1 h,取出放入干燥器内,冷却后

  称量。

  E.3 试验数据处理

  不溶物的含量按式(E. 1)计算:

  x …………………………( E.1 )

  式中:

  x6 — 样品的不溶物含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  m7 — 烘干后坩埚加样品的质量,单位为克(g) ;

  m8 — 坩埚的质量,单位为克(g) ;

  m9 — 样品的质量,单位为克(g)。

  计算结果表示到小数点后一位。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 F

  (规范性)

  谷氨酸、谷氨酸占总蛋白质百分比的测定

  F.1 谷氨酸含量的测定

  F.1 . 1 原理

  使用离子交换氨基酸分析仪,样品经色谱柱分离后与(水合)茚三酮试剂混合,通过记录仪连续不断

  地、自动测量反应产物在 570 nm 的吸光度。

  F.1 . 2 一般要求

  本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合 GB/T 6682—2008 中的一级水要求。

  F.1 . 3 试剂或材料

  F.1 . 3 . 1 盐酸溶液[c( HCl) =0 . 02 mol/ L] 。

  量取 1 .8 mL浓盐酸,注入 1 000 mL 的水中,摇匀。

  F.1 . 3 . 2 谷氨酸标准储备溶液

  称取 0.735 6 g谷氨酸于 100 mL容量瓶,用盐酸溶液(F. 1.3. 1)溶解,并稀释至刻度。该溶液含谷氨酸 0 . 05 mol/ L。

  F.1 . 3 . 3 谷氨酸标准使用溶液

  吸取谷氨酸标准储备溶液(F.1.3.2) 1 mL,用盐酸溶液(F.1.3.1)稀释至 1 000 mL。每 50 μL该溶液含有 2.5 nmol 的谷氨酸,相当于 50 μL该溶液含有谷氨酸 367.83 ng。

  F.1 . 4 仪器设备

  F.1 . 4 . 1 离子交换氨基酸分析仪。

  F.1 . 4 . 2 容量瓶:100 mL、1 000 mL。

  F.1 .4.3 电子天平:感量 0.1 mg。

  F.1 .4.4 滤膜:0.2 μm。

  F.1 . 5 试验步骤

  F.1 . 5 . 1 样品制备

  称取样品 1 g(精确至 0.000 1 g;当谷氨酸含量大于 7%时,应适当减少称样量),加入 40 mL盐酸溶液(F.1 .3 .1) ,充分搅拌溶解后,全部转移至 100 mL容量瓶中,并用盐酸溶液(F.1 .3 .1 )稀释至刻度。

  取上述溶液 1.00 mL,用盐酸溶液(F.1.3.1)稀释至 100 mL,再用滤膜过滤。该溶液为样品待测液。

  F.1 . 5 . 2 样品测定

  分别取 50 μL 的谷氨酸标准使用溶液和样品待测液上机测定。仪器最佳条件选择和操作方法依照

  设备制造商的操作说明。 根据获得的色谱图,比较标准溶液和样品溶液的保留时间来鉴别谷氨酸所产生的峰。 记录样品中谷氨酸的峰面积为 AU,标准溶液中谷氨酸的峰面积为 AS 。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  F.1 . 6 试验数据处理

  谷氨酸的含量按式(F. 1)计算。

  犡7 =(犃U ×犿S/犃S5)010××13 × 100 × 10-9 × 100 = 1 S

  ……………………( F.1 )

  式中:

  犡7 — 样品中谷氨酸的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犃U — 50 μL样品待测液在仪器上产生的峰面积;

  犿S — 50 μL谷氨酸标准使用溶液中含有谷氨酸的质量,单位为纳克(ng) ;

  犃S — 50 μL谷氨酸标准使用溶液在仪器上产生的峰面积;

  100 × 10 3 — 转换系数;

  100 × 10 - 9 — 转换系数。

  50 — 谷氨酸标准使用溶液体积,单位为微升(μL) ;

  犿10 — 样品的质量,单位为克(g) ;

  狑 — 样品的除 NaCl 干基率,%。

  计算结果表示到小数点后一位。

  F.1 . 7 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的 10%。

  F.2 谷氨酸占总蛋白质百分比计算

  谷氨酸占总蛋白质百分比按公式(F. 2)计算:

  狑 …………………………( F.2 )

  式中:

  狑2 — 样品中谷氨酸占总蛋白质的百分比,% ;

  犡7 — 样品中谷氨酸含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡3 — 样品中总氮含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  6 . 25 — 氮折算成蛋白质的折算系数。

  计算结果表示到小数点后一位。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 G

  (规范性)

  总灰分的测定

  G.1 试验步骤

  按照 GB 5009 . 4 规定的方法执行。

  G.2 试验数据处理

  总灰分的含量按公式(G. 1)计算:

  犡

  式中:

  犡8 — 试样中总灰分的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犿11 — 坩埚和灰分的质量,单位为克(g) ;

  犿12 — 坩埚的质量,单位为克(g) ;

  犿13 — 坩埚和试样的质量,单位为克(g) ;

  100 — 单位换算系数;

  犡2 — 样品中氯化钠含量,单位为克每百克(g/100 g) ,计算细胞壁总氮含量时,犡2 为 0 ;

  犡1 — 样品的水分含量,单位为克每百克(g/100 g)。

  计算结果表示到小数点后一位。

  G.3 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的 5%。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 H

  (规范性)

  核苷酸、x(IMP+GMP+AMP)∶x(CMP+UMP)的测定

  H.1 原理

  同一时间进入色谱柱的各组分,由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同,随流动相在色谱柱两相之间进行反复多次的分配,由于各组分在色谱柱中的移动速度不同,经过一定长度的色谱柱后,彼此分离开来,按顺序流出色谱柱,进入信号检测器,在记录仪或数据处理装置上显示出各组分的谱峰数值,根据保留时间定性,以峰面积大小,按外标法定量。

  H.2 一般要求

  本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合 GB/T 6682—2008 中的一级水要求。

  H.3 试剂

  H.3. 1 5′-胞苷酸二钠(CMP)标准品:分子式为 C9 H12 N3 Na2 O8 P,纯度 ≥98%。

  H.3.2 5′-尿苷酸二钠(UMP) 标准品:分子式为 C9 H11 N2 Na2 O9 P,纯度 ≥98%。

  H.3.3 5′-鸟苷酸二钠(GMP)标准品:分子式为 C10 H12 N5 Na2 O8 P,纯度 ≥98%。

  H.3.4 5′-肌苷酸二钠(IMP)标准品:分子式为 C10 H11 N4 Na2 O8 P,纯度 ≥98%。

  H.3.5 5′-腺苷酸二钠(AMP)标准品:分子式为 C10 H12 N5 Na2 O7 P,纯度 ≥98%。

  H.3.6 七水合硫酸镁(MgSO4 ·7H2 O):纯度 ≥99.0%。

  H.3.7 磷酸二氢钾(KH2 PO4):纯度 ≥99.0%。

  H.4 仪器设备

  H.4 . 1 高效液相色谱仪(配紫外检测器和柱温箱系统)。

  H.4.2 色谱柱:C18 柱(250 mm×4.6 mm 或其他等效色谱柱)。

  H.4.3 过滤装置:1 000 mL 真空抽滤器,0.45 μm 水系滤膜。

  H.4.4 针筒式微孔滤膜:0.22 μm。

  H.4 . 5 容量瓶:50 mL、100 mL。

  H.4.6 电子天平:感量 0.1 mg。

  H.5 试验步骤

  H.5 . 1 参考色谱条件

  H.5. 1 . 1 流动相:称取 4.19 g MgSO4 ·7H2 O 和 13.61 g KH2 PO4 ,用水溶解并稀释至 1 000 mL。用

  0.45 μm 水系滤膜过滤,超声除气,作为流动相。

  H.5 . 1 . 2 流速:1 . 0 mL/ min。

  H.5 . 1 . 3 检测波长:260 nm。

  H.5 . 1 . 4 柱温箱温度:25 ℃ 。

  H.5. 1 .5 进样量:5 μL。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  H.5 . 2 样品制备

  H.5 . 2 . 1 标准储备溶液的制备

  称取各标准品 50 mg(精确至 0.1 mg) ,用水溶解、定容至 50 mL 容量瓶中,摇匀,用 0.22 μm 滤膜过滤,质量浓度为 1 mg/mL。

  H.5 . 2 . 2 样品溶液的制备

  称取样品约 0.5 g(精确至 0.000 1 g) ,用水溶解、定容至 100 mL容量瓶中,摇匀,用 0.22 μm 滤膜过

  滤,样品溶液需配制 2 份作为平行样。

  H.5 . 3 标准溶液制备

  按表 H . 1 制备标准系列溶液。

  表 H.1 标准系列溶液的制备

  H.5 . 4 测定

  将标准系列和供试品溶液分别进样,进样量为 5 μL,根据标准品的保留时间定位样品中 CMP、

  UMP、GMP、IMP、AMP 的色谱峰。 根据样品的峰面积,以外标法计算各组分的百分含量。

  H.6 试验数据处理

  样品中各核苷酸钠盐水合物的含量按公式(H .1)计算(以除 NaCl 干基计):

  Xm K × 100 …………………………

  式中:

  Xm — 样品中核苷酸钠盐水合物各组分(XCMP、XUMP、XGMP、XIMP、XAMP)的含量,单位为克每百

  克(g/100 g) ;

  C — 查标准曲线获得样品溶液中 CMP/UMP/GMP/IMP/AMP 的含量,单位为微克每毫升

  (μg/mL) ;

  V — 样品溶液的定容体积,单位为毫升(mL) ;

  F — 稀释倍数;

  m14 — 称样质量,单位为克(g) ;

  GB/T 20886 . 2—202 1

  狑 — 样品的除 NaCl 干基率,% ;

  10 - 6 — 单位转换系数;

  犓 — 5′-核苷酸二钠盐折换为对应的 5′-核苷酸钠盐水合物的系数,见表 H .2 。

  计算结果表示到小数点后一位。

  表 H.2 K 值

  样品中总核苷酸含量按公式(H . 2)计算:

  犡9 = 犡CMP + 犡UMP + 犡GMP + 犡IMP + 犡AMP …………………( H . 2 )

  式中:

  犡9 — 样品中核苷酸的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡CMP — 5′-胞苷酸二钠(CMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡UMP — 5′-尿苷酸二钠(UMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡GMP — 5 -鸟苷酸二钠(GMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡IMP — 5 -肌苷酸二钠(IMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡AMP — 5′-腺苷酸二钠(AMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g)。

  样品中 犡( IMP+GMP+AMP) ∶ 犡(CMP+UMP) 按公式( H . 3 ) 计算 :

  犡(IMP+GMP+AMP) ∶ 犡(CMP+UMP) =(犡IMP + 犡GMP + 犡AMP) ∶(犡CMP + 犡UMP) ………( H . 3 )式中:

  犡CMP — 5′-胞苷酸二钠(CMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡UMP — 5′-尿苷酸二钠(UMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡GMP — 5′-鸟苷酸二钠(GMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡IMP — 5′-肌苷酸二钠(IMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡AMP — 5′-腺苷酸二钠(AMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100 g)。

  计算结果表示到小数点后一位。

  H.7 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的 10%。

  H.8 定量限

  以信噪比为 10 ∶ 1 时对应的浓度作为定量限,单个核苷酸定量限为 40 mg/kg。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 I

  (规范性)

  酵母细胞壁中多糖的测定

  I.1 原理

  酵母细胞壁中多糖物质主要是葡聚糖和甘露寡糖。 将酵母细胞壁中葡聚糖和甘露寡糖酸水解为葡萄糖和甘露糖后,利用液相色谱进行检测。

  I.2 一般要求

  本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合 GB/T 6682—2008 中的一级水要求。

  I.3 试剂或材料

  I.3. 1 盐酸:37%~38%(质量分数)。

  I.3 . 2 葡萄糖:分析纯。

  I.3 . 3 甘露糖:分析纯。

  I.3 . 4 氢氧化钠:分析纯。

  I.3.5 葡萄糖和甘露糖混合标液(2 g/L)。

  分别称取葡萄糖和甘露糖各 0.200 0 g,用纯水定容至 100 mL。

  I.3.6 氢氧化钠溶液:300 g/L。

  I.4 仪器和设备

  I.4 . 1 水浴锅 。

  I.4 . 2 旋涡混合器。

  I.4 .3 压力蒸汽灭菌器。

  I.4 . 4 高效液相色谱仪:带示差检测器和糖柱(6 . 5 mm×300 mm) 。

  I.4.5 电子天平:感量 0.1 mg。

  I.5 试验步骤

  I.5 . 1 样品处理

  准确称取样品 400 mg(精确至 0.1 mg) ,放入一个 20 mL 的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中,加入6 .0 mL盐酸(I.3 .1 ) ,小心地将试管盖紧后用旋涡混合器混合,得到均一的悬浮液。将小试管放入 30 ℃水浴中处理 45 min,每 15 min用旋涡混合器振荡混合一次。然后将悬浮物定量的转移到 200 mL耐热带盖玻璃瓶中,用 100 mL~120 mL 的水,分几次洗涤小试管,洗涤液并入耐热带盖玻璃瓶中。将耐热带盖玻璃瓶放入压力蒸汽灭菌器,121 ℃下处理 60 min。取出后冷却,用氢氧化钠溶液将溶液调 pH 到6~7,然后定容至 200 mL。使用 0.45 μm 孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。

  I.5 . 2 色谱条件

  采用纯水作为流动相,流速为 0.5 mL/min,柱温 80 ℃ ,待仪器基线平稳后再进样。

  I.5 .3 标准曲线的绘制

  分别吸取萄葡糖和甘露糖混合标液(I. 3 . 5) 1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL 到 10 mL 容量瓶中,用

  GB/T 20886 . 2—202 1

  水定容到刻度,得到甘露糖、葡萄糖各为 200 mg/L、400 mg/L、600 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L 的混合标样。在上述色谱条件下准确进样 20 μL,得到色谱峰面积和标准物质量浓度之间的回归方程,绘制

  标准曲线。

  I.5 . 4 样品测定

  在同样的色谱条件下,将处理好的样品注入色谱仪中,记录各色谱峰的保留时间和峰面积。 用糖标样色谱峰的保留时间定性,用糖标样色谱峰的峰面积来定量。

  I.6 试验数据处理

  葡聚糖或甘露寡糖的含量按公式(I. 1)计算:

  犡犻 …………………………( I.1 )

  式中:

  犡犻 — 样品中葡聚糖或甘露寡糖的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犃 — 根据样品溶液的峰面积,在标准曲线上查得的样品溶液的葡萄糖或甘露糖的含量,单位为

  毫克每升(mg/L) ;

  0 . 2 — 样品处理后定容的体积,单位为升(L) ;犿15 — 称取样品的质量,单位为毫克(mg) ;

  0 . 9 — 将葡萄糖或甘露糖换算成葡聚糖或甘露寡糖的系数。

  酵母细胞壁中多糖的含量按公式(I. 2)计算:

  犡10 = 犡11 + 犡12 …………………………( I.2 )

  式中:

  犡10 — 样品中多糖的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡11 — 样品中葡聚糖的含量,单位为克每百克(g/100 g) ;

  犡12 — 样品中甘露寡糖的含量,单位为克每百克(g/100 g)。

  计算结果表示到小数点后一位。

  I.7 精密度

  在重复性检测条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的 10%。

  GB/T 20886 . 2—202 1

  附 录 J

  (规范性)

  PH 的测定

  J.1 仪器和设备

  酸度计(pH 计)。

  J.2 试验步骤

  称取试样 2 g(精确至 0.01 g) ,加水至 100 mL溶解,用酸度计测定溶液 pH,并记录读数。

  J.3 精密度

  在重复性条件下获得的两次独立 pH 测定结果的绝对差值应不超过 0.04。

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