GB/T 40225-2021 肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法

　　ICS 07 . 080 CCS A 40

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 40225—2021

　　肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法

　　Determinationofactinantibody—westernblottingmethod

　　2021-05-21 发布 2021-12-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

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　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)提出并归口 。

　　本文件起草单位：中国测试技术研究院、成都正能生物技术有限责任公司、深圳市第二人民医院、甘肃中商食品质量检验检测有限公司、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、上海市计量测试技术研究院。

　　本文件主要起草人：李怀平、周李华、邱俊康、马丽侠、顾大勇、张秦川、张译文、蒋子敬、王伟、叶德萍、何海宁、洪霞、刘刚。

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　　肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法

　　1 范围

　　本文件描述了肌动蛋白抗体的免疫印迹检测方法。

　　本文件适用于基于免疫印迹法原理的肌动蛋白抗体的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　肌动蛋白 actin

　　一类形成微丝的球状多功能蛋白质，细胞骨架的主要成分，广泛表达于真核细胞中。

　　注 1 ： 目前发现肌动蛋白至少存在 6 种异构体形式，主要分布在心肌、骨骼横纹肌和平滑肌组织中，调控细胞的收缩能力，也表达于非肌肉细胞，调节细胞结构和活力。

　　注 2：肌动蛋白分子质量为 45 ku±3 ku(1 u≈1 Da),具有高度保守性，在细胞中的表达相对稳定，因此它常被用作校正系统的内参。

　　3.2

　　肌动蛋白抗体 actinantibody

　　以肌动蛋白为抗原，免疫动物之后获得的动物血清中能够与肌动蛋白特异性“抗原-抗体结合”的免疫球蛋白的总称。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件。

　　APS：过硫酸铵(ammonium peroxodisulphate)

　　BCA：二喹啉甲酸(bicinchoninic acid)

　　ECL：化学发光试剂(electrogenerated chemiluminescence)

　　HRP：辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)

　　NP-40：乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P 40)

　　PBS：磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline)

　　PBST：磷酸盐吐温缓冲液(phosphate buffer saline with Tween)

　　PMSF：苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride)

　　PVDF：聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride)

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　　SDS：十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)

　　TBS: Tris 缓冲盐溶液(tris-buffered saline)

　　TBST : Tris 缓冲盐吐温溶液 (tris-buffered saline with Tween)

　　TEMED：四甲基乙二胺(N, N, N′, N -Tetramethylethylenediamine)

　　5 原理

　　免疫印迹法，又称蛋白质印迹。 其基本原理是通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳区分待测样品不同的组分，再在电流的作用下，使蛋白质从凝胶转移至固相载体(膜)上，通过特异性抗体作为探针，对靶抗原蛋白质进行检测，通过分析特异性反应的位置和强度获得特定蛋白质在所分析的细胞或(和)组织中表达情况的信息。 免疫印迹试验通常由 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白质的印迹和检测两个部分组成。

　　6 试剂和材料

　　除非另有规定，仅使用分析纯试剂或生化试剂，试验用水为 GB/T 6682 规定的一级水。

　　6 . 1 硝酸纤维膜或 PVDF膜。

　　6 . 2 肌动蛋白一抗抗体：beta actin单抗。

　　6 . 3 HRP标记二抗抗体：HRP标记的羊抗鼠 IgG或 HRP标记的羊抗兔 IgG。

　　6 . 4 NP-40 裂解液。

　　6 . 5 PMSF。

　　6 . 6 BCA蛋白测定试剂盒。

　　6 . 7 ECL发光液。

　　6 . 8 TEMED。

　　6 . 9 甲醇 。

　　6 . 10 Tween-20 。

　　6. 1 1 β-巯基乙醇。

　　6 . 12 聚丙烯酰胺凝胶储液：30%丙烯酰胺-亚甲基双丙烯酰胺凝胶储液，按照 A. 1 配制。

　　6. 13 浓缩胶缓冲液(0.5 mol/L Tris · HCl, pH=6.8) ,按照 A.2 配制。

　　6. 14 分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris · HCl, pH=8.8) ,按照 A.3 配制。

　　6 . 15 上样缓冲液，按照 A. 4 配制。

　　6. 16 10×电泳缓冲液，按照 A. 5 配制。

　　6. 17 10×转移缓冲液，按照 A. 6 配制。

　　6. 18 1×电泳缓冲液，按照 A. 7 配制。

　　6. 19 1×转移缓冲液，按照 A. 8 配制。

　　6.20 10×PBS缓冲液(0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液，pH=7.4) ,按照 A.9 配制。

　　6.2 1 1 × PBS缓冲液(0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液，pH=7.4) ,按照 A.10 配制。

　　6.22 10×TBS缓冲液(0.1 mol/L Tris盐缓冲液，pH=7.4) ,按照 A.11 配制。

　　6.23 1×TBS缓冲液(0.01 mol/L Tris盐缓冲液，pH=7.4) ,按照 A.12 配制。

　　6 . 24 洗膜缓冲液，按照 A. 13 配制。

　　6 . 25 封闭缓冲液，按照 A. 14 配制。

　　6.26 5%浓缩胶，按照 A.15 配制。

　　6.27 12%分离胶，按照 A.16 配制。

　　6 . 28 丽春红染色液。

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　　6 . 29 显影液。

　　6 . 30 定影液。

　　6.3 1 电泳蛋白 Marker: 10 ku~170 ku。

　　7 仪器设备

　　7 . 1 垂直凝胶系统。

　　7.2 二氧化碳培养箱，37 ℃ ±0.5 ℃。

　　7 . 3 电泳仪：恒压不低于 220 V,恒流不低于 400 mA。 推荐使用带有计时器的电源。

　　7 . 4 转移系统。

　　7 . 5 化学发光仪。

　　7 . 6 电子天平，感量为 0 . 1 mg。

　　7.7 离心机：适用 15 mL离心管，转速不低于 10 000 r/min。

　　7 . 8 旋涡振荡器。

　　7.9 pH 计，精度为 0.01。

　　7 . 10 移液器 。

　　8 样品

　　8 . 1 自制的肌动蛋白抗体建议按照预估效价调整适当稀释梯度进行预试验。

　　8 . 2 肌动蛋白抗体产品，首次使用时可按照产品说明书进行稀释或选择适当稀释梯度进行预试验，待确定待测样稀释比例后，后续可沿用合适的固定稀释比例。

　　9 测定步骤

　　9 . 1 一般原则

　　9 . 1 . 1 抗原可采用不同来源的细胞制备，如 HeLa 细胞、293T 细胞等。

　　9 . 1 . 2 抗体稀释比例和抗原上样量可根据实际试验情况和肌动蛋白抗体效价进行适当调整。

　　9 . 2 抗原的制备

　　9 . 2 . 1 当经过处理后的细胞到达处理时间或者细胞密度达到 80%~95%时，收集细胞。 从二氧化碳培养箱中取出细胞培养瓶，置于冰上，用移液器吸出培养液。 在培养瓶中加入 4 ℃冰箱预冷 30 min 后的1×PBS,缓慢平动培养瓶，使缓冲液充分洗涤细胞表面，倒掉 PBS,重复操作 2 次 ~3 次;在最后一次洗涤后用移液器尽可能吸干残留的缓冲液，以洗去瓶中残留的培养基。 注意全程在冰上操作。

　　9 . 2 . 2 向培养瓶中加入 4 ℃冰箱预冷 30 min后的 NP-40 裂解液(每 75 cm2 培养瓶约加 1 mL),放置在冰上裂解 20 min。 然后用细胞刮子沿着瓶壁刮细胞。 吸出刮好的细胞裂解液置于 15 mL离心管中(置于冰上)。

　　9 . 2 . 3 重复步骤 9 . 2 . 2,尽可能将多的细胞裂解液收集到 15 mL 的离心管中，插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次 2 s~3 s,重复 3 次 。如仍有细胞碎片或沉淀，宜 4 ℃ , 10 000 r/ min,离心 10 min,取上清。

　　9 . 2 . 4 取出少量细胞裂解液测定蛋白浓度(可用 BCA 蛋白测定试剂盒测定)，其余细胞裂解液可分装保存在- 70 ℃以下备用。

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　　9 . 3 抗原内参储备液的制备

　　抗原内参储备液母液制备：称取肌动蛋白粉末 1 mg(精确至 0 . 1 mg),加入 1 mL蒸馏水溶解，使母液浓度为 1 mg/mL。

　　9 . 4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

　　9 . 4 . 1 检查配胶装置，安装制胶配件，制胶灌胶(可使用商品化预制胶)，组装电泳槽，注入电泳缓冲液。

　　9 . 4 . 2 关于分离胶浓度选择：按照目标蛋白分子质量范围选择待配制分离胶的浓度，见表 1 。 肌动蛋白分子质量为 45 ku±3 ku,可选择 8%~12%浓度的分离胶，本文件给出了 12%分离胶的配制，见 A. 16 。

　　表 1 目标蛋白分子质量与分离胶浓度关系表

　　9 . 4 . 3 抗原上样前需与 2×上样缓冲液等体积混匀，95 ℃变性 5 min。 用 2×上样缓冲液稀释抗原内参至 10 ng/μL, 95 ℃变性 5 min。 变性后的抗原和抗原内参按照规定上样量上样。 抗原可参考 5 μg、 10 μg、20 μg、40 μg、60 μg 总蛋白/泳道的上样量进行上样，抗原内参可参考 50 ng/泳道进行上样。 建议在邻近的齿孔加入 5 μL 电泳蛋白 Marker。

　　9 . 4 . 4 将电泳槽连接电源进行电泳，注意正负极的区分。 电压调至 80 V~ 120 V,分离胶电泳时间为1 h~2 h或直至溴酚蓝到达分离胶底部时，停止电泳。

　　9 . 5 印迹培养

　　9 . 5 . 1 电泳结束后比照 Marker 的大小，选择包含抗原内参凝胶部分，轻轻切下后将凝胶取出，放置于4 ℃冰箱预冷 30 min 的 1×转移缓冲液中。

　　9 . 5 . 2 按照即将切下的目的胶块的大小来剪相应大小的硝酸纤维膜或 PVDF膜，剪下后在左上角剪小角以区分正反面，后将其浸泡于甲醇中活化约 1 min;之后取出放到配制好的 1×转移缓冲液中平衡超过 5 min。

　　9 . 5 . 3 将转膜夹放于盛有 1×转移缓冲液的盘中，白板(阳极)在上，黑板(阴极)在下，由下向上依次放置 1 块海绵、3 层 ~5 层滤纸，用玻璃棒轻轻赶走气泡后，放上已平衡好的硝酸纤维膜或 PVDF 膜，注意不要有气泡，再放切好的凝胶、3 层 ~5 层滤纸、1 块海绵。 最后合上转膜夹，将其放置于转膜槽中。

　　9 . 5 . 4 转膜槽中倒入 4 ℃冰箱预冷 30 min 的 1×转膜液，加入冰块，盖上转膜盖。 然后将转膜槽放置于泡沫箱中，加入冰水混合物，以防止转膜过程中产生的热量。 检查电极方向并连接电线。 在 180 mA恒流(或 90 V恒压)条件下，转移时间为 1 . 5 h。

　　9 . 5 . 5 转膜结束后，确认 Marker是否转移成功。 将硝酸纤维素膜或 PVDF膜浸没在丽春红染色液中，摇动 5 min~10 min或更长时间;取出印迹膜，用蒸馏水或 1 × PBS 当溶液漂洗 2 次 ~3 次，可出现清晰条带，记录结果。 弃去凝胶。

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　　9 . 6 免疫反应

　　9 . 6 . 1 封闭

　　将印迹膜轻轻取出后，放置于封闭缓冲液中，室温条件下摇床 2 h 或者置于 4 ℃冰箱中封闭 8 h~ 12 h 。

　　9 . 6 . 2 孵育一抗

　　将待测样品抗 肌 动 蛋 白 抗 体 与 封 闭 缓 冲 液 按 照 1 ∶ 2 500 , 1 ∶ 5 000 , 1 ∶ 10 000 , 1 ∶ 20 000 , 1 ∶ 40 000 比例混合。 将印迹膜置于 10 mL该混合液中，避免产生气泡，室温条件下轻轻摇动 2 h 或者4 ℃冰箱孵育 8 h~12 h。

　　9 . 6 . 3 洗涤一抗

　　将印迹膜置于 20 mL洗膜缓冲液中，置于摇床上，室温缓慢平摇 10 min,随后倒掉并更换新的洗膜缓冲液，重复操作 3 次 。

　　9 . 6 . 4 孵育二抗

　　将 HRP标记的二抗与封闭缓冲液按照 1 ∶ 5 000 比例混合。 将印迹膜置于 10 mL该混合液中，室温条件下轻轻摇动，37 ℃孵育 1 h。 二抗的来源应与一抗保持一致。

　　9 . 6 . 5 洗涤二抗

　　步骤与 9 . 6 . 3 相同。

　　9 . 7 信号采集

　　9 . 7 . 1 洗膜完毕后，准备剪刀、镊子、发光液等显影相关工具和试剂。

　　9 . 7 . 2 取等量的 ECL A、B液混匀，暗室中打开红外灯，不应有任何白炽光，将混合液加于印迹膜上反应 1 min~2 min。 混合液的量按照印迹膜的数量配制，一般约 1 mL/张 。

　　9 . 7 . 3 在显影板上依次放上保鲜膜、印迹膜、保鲜膜。 装入化学发光仪中进行信号采集和图像收集。

　　9 . 8 分子质量测定

　　待测样品应在 45 ku±3 ku位置出现肉眼可见的相应大小条带。 也可使用图像处理软件做条带灰度值分析，定量分析阳性的显著性。

　　9 . 9 效价验证

　　9.9. 1 按照 20 μg 总蛋白/泳道的上样量，待测样品按照 9 . 5 . 2 的要求进行稀释，各稀释度均应出现45 ku±3 ku大小条带，每个稀释梯度条带大小一致，条带信号从 1 ∶ 2 500 至 1 ∶ 40 000 逐渐减弱。 抗体 1 ∶ 40 000 稀释比应有明显阳性信号。 图谱见附录 B。

　　9.9.2 按照 5 μg、10 μg、20 μg、40 μg、60 μg 总蛋白/泳道的上样量进行免疫印迹检测，待测样品稀释比为 1 ∶ 10 000 进行测试。 待测样品中均应出现 45 ku±3 ku 大小条带，每个上样量条带大小一致，条带信号从 5 μg 总蛋白/泳道至 60 μg 总蛋白/泳道逐渐增强。 抗体检测 5 μg 总蛋白/泳道的上样量应有明显阳性信号。 图谱见附录 B。

　　9 . 10 物种反应

　　分别用 NIH3T3 细胞(小鼠细胞)、C6 细胞(大鼠细胞)、COS7 细胞(猴细胞)、CHO-K1 细胞(仓鼠细胞)代替 HeLa 细胞(人细胞)样品进行测试，待测样品稀释成 1 ∶ 10 000 后进行测试。 各细胞样品均

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　　应出现 45 ku±3 ku大小条带，大小一致，信号均为显著的阳性信号。

　　9 . 1 1 稳定性试验

　　将抗体原液放于密闭的、内壁硅化处理的聚丙烯管中，置于 37 ℃ ± 0 . 5 ℃二氧化碳培养箱进行热处理 7 d。 对照抗体置于 -20 ℃存放 7 d。 两组样本处理后在室温进行目测及采用分光光度法测定吸光度 OD600 , 目测没有显著沉淀，吸光度偏差小于 10%视为无质量变化。

　　9 . 12 抗体特异性

　　免疫印迹检测不同物种细胞应在 45 ku±3 ku 位置观察到单 一 目 的条带，且可与肌动蛋白标准物质或商品化的肌动蛋白在同一位置检测出条带。

　　10 质量保证和控制

　　10 . 1 人员

　　从事肌动蛋白抗体检测的技术人员应具备免疫学、化学或相关学科的理论基础知识，应完全了解细胞培养的相关工作，掌握免疫印迹法检测等相关基础实验。

　　10 . 2 仪器设备

　　应定期对相关检测仪器进行检定或校准。

　　10 . 3 试剂

　　肌动蛋白抗体检测涉及的相关试剂需从具备专业资质并经过验证核实的供应商处采购，且具备检验合格证明文件。

　　检测涉及的细胞应按照国家相关指导性文件要求使用和管理。

　　检测试剂的使用应具有严格的文件记录制度，包括试剂的标识、使用时间等信息。

　　10 . 4 实验室通用要求

　　免疫印迹检测实验室应满足生物安全一级(BSL-1) 实验室要求，遵循分区明确、单一流向、因地制宜、方便使用的原则。

　　细胞房应按照国家相关文件要求建设和管理。

　　10 . 5 样品保存

　　贮存于 -20 ℃ ± 1 ℃冰箱，避免反复冻融。

　　1 1 结果报告

　　肌动蛋白抗体检测后应附试验报告或等同的指导性文件，文件内容应至少包括以下部分：

　　a) 产品名称;

　　b ) 抗体总量;

　　c) 抗体分子质量;

　　d) 效价范围;

　　e) 物种验证;

　　f) 抗体保存条件及期限。

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　　附 录 A (规范性)试 剂 配 制

　　A.1 聚丙烯酰胺凝胶储液

　　Acr(丙烯酰胺) 29 g

　　Bis(甲叉双丙烯酰胺) 1 g

　　加蒸馏水定容至 100 mL

　　将上述各成分充分溶解于 80 mL蒸馏水，加蒸馏水定容至 100 mL,过滤后置于棕色瓶中，4 ℃可贮

　　存 30 d~60 d。

　　A.2 浓缩胶缓冲液：0.5 mol/LTris· Hcl，PH= 6.8

　　将上述 Tris base充分溶解于 80 mL蒸馏水，加 6 mol/L盐酸调 pH 至 6.8,加蒸馏水定容至 100 mL,储存于 4 ℃ 。

　　A.3 分离胶缓冲液：1 .5 mol/LTris· Hcl，PH= 8.8

　　将上述 Tris base充分溶解于 80 mL蒸馏水，加 6 mol/L盐酸调 pH 至 8.8,加蒸馏水定容至 100 mL,储存于 4 ℃ 。

　　A.4 上样缓冲液

　　0.5 mol/L Tris · HCl pH 6.8 5 mL SDS 0 . 4 g

　　Glycerol(甘油) 2 mL β-巯基乙醇(β-ME) 0.4 mL Bromophenol Blue(BPB, 溴酚蓝) 20 mg加蒸馏水定容至 10 mL注：最后加甘油和 BPB。

　　将上述 0 . 5 mol/ L Tris · HCl、SDS及适量加蒸馏水(控制三者总体积 ≤8 mL),搅拌充分溶解;再加入 β-ME、BPB,搅拌充分溶解，加蒸馏水定容至 10 mL,储存于 4 ℃ 。

　　A.5 10 × 电泳缓冲液

　　Tris base(Tris碱) 31 g

　　Glycine(甘氨酸) 188 g

　　SDS 10 g

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　　加蒸馏水定容至 1 000 mL

　　将上述 Tris base、Glycine、SDS充分溶解于 800 mL 蒸馏水，加蒸馏水定容至 1 000 mL, 储存于

　　室温。

　　A.6 10×转移缓冲液

　　注：10×转移缓冲液不含甲醇，稀释成 1×转移缓冲液后，加入甲醇溶液使甲醇终浓度为 20% 。

　　将上述 Tris base、Glycine、SDS充分溶解于 800 mL 蒸馏水，加蒸馏水定容至 1 000 mL, 储存于

　　室温。

　　A.7 1 × 电泳缓冲液

　　10×电泳缓冲液 100 mL

　　加蒸馏水定容至 1 000 mL

　　将上述 100 mL 10×电泳缓冲液用蒸馏水稀释并定容至 1 000 mL,充分混匀，储存于 4 ℃ 。

　　A.8 1 ×转移缓冲液

　　10×转移缓冲液 100 mL

　　Methonol(甲醇) 200 mL

　　加蒸馏水定容至 1 000 mL

　　注 ：甲醇现用现加。

　　将上述 100 mL 10×转移缓冲液和 600 mL 蒸馏水混合，再加入 200 mL 甲醇，加蒸馏水定容至1 000 mL,储存于 4 ℃。

　　A.9 10×PBS缓冲液(0. 1 mol/L磷酸盐缓冲液)，PH= 7.4

　　将上述成分充分溶解于 800 mL蒸馏水，加 6 mol/L盐酸调节 pH 到 7 . 4,加蒸馏水定容至 1 000 mL,储存于室温。

　　A.10 1 × PBS缓冲液(0.0 1 mol/L磷酸盐缓冲液)，PH= 7.4

　　方法一：将 A. 9 中 100 mL 10×PBS缓冲液用蒸馏水稀释并定容至 1 000 mL,充分混匀，储存于 4 ℃ 。

　　方法二：按照如下配方，将各成分充分溶解于 800 mL蒸馏水，加 6 mol/ L 盐酸调节 pH 到 7 . 4,加蒸馏水定容至 1 000 mL,高温高压灭菌 ≥20 min(可选做)，储存于室温或 4 ℃ 。

　　磷酸二氢钾(KH2 PO4) 0.24 g

　　磷酸氢二钠(Na2 HPO4) 1.44 g

　　A.1 1 10 × TBS缓冲液(0. 1 mol/LTris盐缓冲液)，PH= 7.4

　　将上述成分充分溶解于 800 mL蒸馏水，加 6 mol/L盐酸调节 pH 到 7 . 4,加蒸馏水定容至 1 000 mL,储存于室温。

　　A.12 1 × TBS缓冲液(0.0 1 mol/LTris盐缓冲液)，PH= 7.4

　　方法一：将 A. 11 中 100 mL 10 × TBS 缓冲液用蒸馏水稀释并定容至 1 000 mL,充分混匀，储存于4 ℃ 。

　　方法二：按照如下配方，将各成分充分溶解于 800 mL蒸馏水，加 6 mol/ L 盐酸调节 pH 到 7 . 4,加

　　蒸馏水定容至 1 000 mL,高温高压灭菌 ≥20 min(可选做)，储存于室温或 4 ℃ :

　　A.13 洗膜缓冲液：即 TBST或 PBST，含 0. 1 %Tween-20 的 1 ×TBS或 PBS缓冲液

　　称取上述 Tween-20 , 100 mL 10×TBS或 10×PBS缓冲液，加蒸馏水混匀、稀释并定容至 1 000 mL,储存于室温或 4 ℃ 。

　　A.14 封闭缓冲液：即含 5%脱脂奶粉的 TBST或 PBST

　　脱脂牛奶 5 g

　　洗膜缓冲液 100 mL

　　封闭缓冲液现用现配。 称取上述脱脂牛奶 5 g,充分溶解于 100 mL洗膜缓冲液中，储存于 4 ℃ 。

　　A.15 5%浓缩胶

　　5%浓缩胶的组分见表 A. 1 。

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　　表 A.1 5%浓缩胶的组分

　　按照上述体积配制，在最后一步配制时，加入 TEMED 和 10%过硫酸铵。

　　A.16 12%分离胶

　　12%分离胶的组分见表 A. 2 。

　　表 A.2 12%分离胶的组分

　　按照上述体积配制，在最后一步配制时，加入 TEMED 和 10%过硫酸铵。

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　　附 录 B (资料性)效 价 验 证

　　20 μg 总蛋白/泳道的上样量的显影图谱见图 B. 1,抗原样本不同上样量下肌动蛋白抗体效果测定的显影图谱见图 B. 2 。

　　图 B.1 20 μg总蛋白/泳道上样量的显影图谱

　　图 B.2 抗原样本不同上样量的显影图谱

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　　参 考 文 献

　　[1] Hames BD, Rickwood D. Gel Electrophoresis of Proteins : A Practical Approach, Third, Oxford University Press , 1998.