GB/T 26621-2011 日本对虾

　　ICS 65. 150 B 51

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 26621—2011

　　日 本 对 虾

　　Kurumaprawn

　　2011-06-16发布 2011-11-01实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T26621—2011

　　前 言

　　本标准的附录 A 和附录 B为规范性附录 。

　　本标准由中华人民共和国农业部提出 。

　　本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归 口 。

　　本标准起草单位 : 中国水产科学研究院黄海水产研究所 。

　　本标准主要起草人 :刘萍 、李健 、孔杰 、刘志鸿 、庄志猛 、张岩 、王清印 。

　　Ⅰ

　　GB/T26621—2011

　　日 本 对 虾

　　1 范围

　　本标准规定了 日本对虾(Marsupenaeusjaponicus)的主要外部形态构造特征 、生长与繁殖 、遗传学特性以及检测方法 。

　　本标准适用于日本对虾的种质检测和鉴定 。

　　2 学名与分类

　　2. 1 学名

　　日本对虾 Marsupenaeusjaponicus(Bate,1988) 。

　　2. 2 分类位置

　　甲壳纲(Crustacea) ,十足目(Decapoda) ,对虾科(Penaeidae) ,囊对虾属(Marsupenaeus) 。

　　3 主要形态构造特征

　　3. 1 外部特征

　　日本对虾甲壳光滑无毛 ,体上有十几条棕色和兰色相间的横带 。 附肢呈黄色 ,尾肢后部色泽鲜艳 、呈鲜兰色和黄色 ,边缘呈红色 。额角侧沟很深 ,延伸至头胸甲的后缘 。额角后脊较额角侧沟宽 ,具中央沟 。尾节背面有深的纵沟 ,末端尖 ,两侧有 3对细小活动刺 。肝脊和额胃脊明显 。

　　日本对虾的外部形态见图 1。

　　图 1 日本对虾外部形态

　　雄虾第 1腹肢的内肢变形特化成交接器 ,呈倒钟形 , 中叶末端形成横圆突起折向腹面 ,显著超出侧叶末端 ,顶端稍圆 ,雄性 交 接 器 见 图 2。 雄 性 附 肢 由 2 节 构 成 , 末 端 鳞 片 状 , 近 乎 椭 圆 形 , 长 约 为 宽 的2倍 ,边缘着生细端刺 。

　　雌虾第 4对和第 5对步足之间基部的腹甲上 ,有一囊状交接器为纳精囊 ,前端开 口 ,其前方有一圆突 ,见图 3。

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　　图 2 日本对虾雄性交接器(2. 背面 ; 1. 腹面)

　　图 3 日本对虾雌性交接器

　　3. 2 可量性状

　　3. 2. 1 第 1触角柄第 1节的柄刺和外缘末端刺小而尖细 , 内侧附肢伸至第 1 节末 ,末节约为第 2 节长度的 1/3;第 1触角触鞭很短 ,仅为头胸甲长的 1/4,上鞭稍长于下鞭 。

　　3. 2. 2 第 2触角鳞片末缘略超出额角的末端 ,其触鞭长度约为体长的 1. 5倍 。

　　3. 2. 3 第 3 颚足细长 。雄性超出第 1触角柄基节末端 ;雌性较短 ,不到末端 ;指节细小 ,雄性约为掌节长的 1/2,雌性约为指节长的 2/3。

　　3. 2. 4 眼胃脊明显 , 占 自眼眶边缘至肝刺间距离的 3/5。

　　3. 3 可数性状

　　额角齿式 :上额角齿数/下额角齿数为 8~ 10/1~ 2。

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　　4 生长繁殖特性

　　4. 1 生长

　　由于雌雄对虾性成熟时间不同 , 因而雌雄对虾的生长类型显著不同 。雌性 、雄性日本对虾在南海北部自然海区体长与体重关系式分别以式(1)和式(2)表示 。

　　W ♂ = 9. 949×10-6L3. 029 5 …………………………( 2 )

　　W ♀ = 6. 378×10-6L3. 116 …………………………( 1 )

　　式中 :

　　W— 体重 ,单位为克(g) ;

　　L— 体长 ,单位为毫米(mm) 。

　　4. 2 繁殖

　　4. 2. 1 生物学最小型

　　性成熟的最小体长为 118 mm ,最小体重为 20 g。

　　4. 2. 2 交配与产卵

　　日本对虾产卵期较长 ,南海北部群体 2 月 至 8 月均有性成熟个体出现 ,产卵高峰期在 2 月 至 5 月 。在 10月上旬至 11月初雌虾最后一次蜕皮后进行交配 ,交配时雄虾将精荚投入雌虾交接器纳精囊内 ,外覆翼状精荚栓 。翌年春季产卵 ,纳精囊内精子与卵子同时排出 。 卵粒直径 0. 26 mm~ 0. 28 mm , 为沉性卵 ,呈灰绿色或浅褐色 。受精后卵膜举起 ,卵膜径 0. 33 mm~0. 44 mm。

　　4. 2. 3 怀卵量

　　发育成熟 的 亲 虾 在 水 温 升 至 26 ℃ 左 右 开 始 产 卵 , 为 多 次 产 卵 。 雌 虾 怀 卵 量 20× 104 粒 ~ 50×104 粒 。

　　5 遗传学特性

　　5. 1 染色体数目

　　日本对虾的染色体数目为 2n= 86。

　　5. 2 生化遗传学特性

　　5. 2. 1 同工酶图谱

　　日本对虾成体肌肉中的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱见图 4,表现为一条酶带 。

　　图 4 日本对虾肌肉 LDH 同工酶电泳图谱

　　5. 2. 2 群体遗传变异范围

　　日本对虾平均多态位点比例为 18. 2% ;平均杂合度的观测值为 0. 1042±0. 004 5。

　　6 检测方法

　　6. 1 染色体的检测

　　6. 1. 1 染色体的制备

　　6. 1. 1. 1 日本对虾胚胎或幼体放入含 0. 02%秋水仙素的海水中培养 3 h~4 h。

　　6. 1. 1. 2 移去海水 ,加入 0. 075 mol/L氯化钾溶液中室温下处理 20 min~ 30 min。

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　　15(6.)1m.i(1)n.更(3)换(移)一去次(低)固(渗)定(溶)液(液),,更(加)换(入)2(预)次(冷)次(现)配,最(卡)后更(诺)( 换 1(Carn)的 C(氏 固)aoy(液)(氏(甲)固(醇)定∶液固定 3(冰 乙 酸)m(3)n1。) 固 定 , 每 隔

　　6. 1. 1. 4 将胚胎或幼体滴到冰冻的载玻片上 ,室温下干燥 。

　　6. 1. 1. 5 用磷酸缓冲液(0. 1 mol/L,pH7. 2) 将吉姆萨(Giemsa) 原液稀释为 4%的溶液染色 15 min。吉姆萨染色液的配制见附录 A。

　　6. 1. 2 染色体观察

　　选择染色体形态好的分裂相 100个计数 ,确定染色体数目 。

　　6. 2 同工酶检测

　　6. 2. 1 样品的采集与保存

　　日本对虾成体(活体)运到实验室 ,保存于 -70℃超低温冰箱中 。

　　6. 2. 2 样品制备

　　从液氮中分别取出样品(肌肉) ,加入 5倍体积的 0. 1 mol/L磷酸缓冲液(PBS)后冰浴匀浆 ,4 ℃离心(15 000 r/min,10 min) ,取上清液加入少量 1%溴酚兰 ,再加入等体积的 40%蔗糖溶液 。 -20 ℃保存待测 。

　　6. 2. 3 电泳

　　同工酶电泳采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳 。 电泳在 4 ℃冰箱中进行 。 电泳参数如下 。

　　乳酸脱氢(凝胶浓度)酶(T染):色液配(T浓 缩 胶)附(0%)录(pB(H)。6. 7) ,T分 离 胶 = 7. 5%(pH8. 9) 。

　　6. 2. 4 结果计算

　　多态位点比例按式(3)计算 :

　　P=N1/N2 ×100% …………………………( 3 )

　　式中 :

　　P— 多态位点比例 ;

　　N1— 多态位点数 ;

　　N2— 观察位点总数 。

　　平均杂合度观察值按式(4)计算 :

　　Ho=H1/N …………………………( 4 )

　　式中 :

　　Ho— 平均杂合度观察值 ;

　　H1— 观察到的杂合个体数 ;

　　N— 观察的个体总数 。

　　7 判定规则

　　检测结果不符合第 3 章和 5. 1要求的 ,则判定为不合格项 ;有不合格项的样品为不合格样品 。合格样品数与样品总数的比为合格率 。

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　　附 录 A

　　(规范性附录)

　　吉姆萨(Giemsa)染色液的配制

　　A. 1 Giemsa染色液母液

　　称取 0. 5 g Giemsa粉 ,量取甘油 33 mL,在研钵中先用少量甘油与 Giemsa粉混合 ,研磨至无颗粒时再将剩余甘油加入 ,在 56 ℃条件下温浴 2 h后 ,加入 33 mL 甲醇 ,混匀 。并保存于棕色瓶中备用 。

　　A. 2 磷酸缓冲液(0. 2 mol/L,pH7. 2)

　　磷酸缓冲液由 A液和 B液按比例混合而成 。

　　A. 2. 1 A液(0. 2 mol/L,Na2 HPO4 )

　　取 36. 1 g磷酸氢二钠(Na2 HPO4 · H2 O)定容于 1 000 mL 的蒸馏水中 ; 或取 71. 63 g磷酸氢二钠(Na2 HPO4 · 2H2 O)定容于 1 000 mL 的蒸馏水中 , 即可 。

　　A. 2. 2 B液(0. 2 mol/L,NaH2PO4 )

　　取 27. 6 g磷酸二氢钠(NaH2PO4 · H2 O)定容于 1 000 mL 的蒸馏水中 ; 或取 31. 21 g磷酸二氢钠(NaH2PO4 · 2H2 O)定容于 1 000 mL 的蒸馏水中 , 即可 。

　　A. 2. 3 取 A液 720 mL、B液 28 mL,两者混合即可 。

　　A. 3 Giemsa染色液

　　取 100 mL 的磷酸缓冲液 ,加入 4 mL Giemsa染色原液即可 。

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　　附 录 B

　　(规范性附录)

　　同工酶染色液及其所需溶液的配制

　　B. 1 1 mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液的配制

　　800 mL水中加入 121. 1 gTris碱 ,加入浓 HCl调节 pH 至 8. 0,加水定容至 1000mL,分装后高压灭菌 。

　　B. 2 同工酶染色液的配制

　　见表 B. 1。

　　表 B. 1 同工酶染色液的配制

　　药 品

　　浓 度

　　剂量/mL

　　Tris-HCl

　　0. 2 mol/L(pH8. 0)

　　50

　　乳酸锂

　　1. 0 mol/L(pH8. 0)

　　8

　　辅酶 Ⅰ (NAD)

　　10 mg/mL

　　1

　　硝基四唑蓝(NBT)

　　5 mg/mL

　　1

　　甲基吩嗪甲基硫酸盐(PMS)

　　5 mg/mL

　　1

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