GB/T 43636-2024 法庭科学 DNA二代测序检验规范

　　ICS 07. 140 CCS A 92

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 43636—2024

　　法庭科学 DNA 二代测序检验规范

　　Forensicsciences—Specificationsfornextgeneration

　　sequencing-basedDNA examination

　　2024-03-15发布 2024-10-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 43636—2024

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 、缩略语 1

　　4 总体要求 3

　　5 原理 3

　　6 器材和试剂 4

　　7 检验流程 4

　　8 数据分析 5

　　9 遗传参数计算 8

　　附录 A (资料性) 法庭科学 DNA二代测序检验记录表 9

　　参考文献 17

　　Ⅰ

　　GB/T 43636—2024

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中华人民共和国公安部提出 。

　　本文件由全国刑事技术标准化技术委员会(SAC/TC179)归 口 。

　　本文件起草单位 :公安部鉴定中心 、四川大学 、中国医学科学院阜外医院 、广东省公安厅 、中央军委政法委员会侦查技术中心 、中国政法大学 、北京生物医药研究所 。

　　本文件主要起草人 : 叶健 、季安全 、王乐 、康克莱 、侯一平 、周洲 、张驰 、李海燕 、刘开会 、张广峰 、汤鹏 、袁丽 、戴文申 、赵杰 。

　　Ⅲ

　　GB/T 43636—2024

　　法庭科学 DNA 二代测序检验规范

　　1 范围

　　本文件规定了利用二代测序技术进行法庭科学人类 DNA遗传标记靶向测序检验的总体要求以及检验器材和试剂 、检验流程 、数据分析 、遗传参数计算的基本要求 。

　　本文件适用于从事法庭科学人类遗传标记检验的实验室和产品制造商针对人类生物检材与样本的STR、SNP、InDel等遗传标记以及线粒体 DNA进行二代测序检验分析 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 27025 检测和校准实验室能力的通用要求

　　GB/T 43633 法庭科学 DNA实验室建设规范

　　GB/T 43635 法庭科学 DNA实验室检验规范

　　3 术语和定义、缩略语

　　3. 1 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　3. 1. 1

　　DNA测序 DNA sequencing

　　对 DNA分子的核苷酸排列顺序的测定 , 即测定组成 核 酸 分 子 的 腺 嘌 呤(A) 、鸟 嘌 呤(G) 、胞 嘧 啶(C)和胸腺嘧啶(T)的排列顺序 。

　　3. 1.2

　　二代测序 nextgeneration sequencing;NGS

　　区别于传统 Sanger(双脱氧链终止法)测序 ,能够一次并行对大量核酸分子进行序列测定的技术 。 3. 1.3

　　靶向测序 targeted sequencing

　　针对特定基因集或基因组区域内已知和新型变异进行的测序 。

　　3. 1.4

　　桥式 PCR bridgepolymerasechain reaction

　　单链文库 DNA一端序列与芯片表面固定的寡核苷酸特异性结合 , 当连接片段的另一端弯曲 ,与芯片表面固定的另一条互补寡核苷酸 “形成桥 ”, 以文库 DNA 为模板进行扩增的反应 。

　　3. 1.5

　　乳化 PCR emulsion polymerasechain reaction

　　将用于 PCR扩增的水相体系与油相体系混合 ,形成大量油包水的微乳液独立 PCR扩增空间 ,在其中扩增得到大量相同来源扩增产物的反应 。

　　1

　　GB/T 43636—2024

　　3. 1.6

　　DNA 纳米球 DNA nanoball;DNB

　　在二代测序的模 板 扩 增 过 程 中 , 先 将 DNA 进 行 片 段 化 处 理 , 加 接 头 序 列 和 环 化 形 成 单 链 环 状DNA,然后通过滚环扩增将单链环状 DNA扩增 2~ 3个数量级最终产生的产物 。

　　3. 1.7

　　单次测序 singlerun sequencing

　　测序仪器运行一个测序流程 ,如一次单向测序或一次双向测序的行为 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 20] 3. 1. 8

　　文库 library

　　通过生物来源的 、人工合成的或克隆技术等所得到的一个重建分子群 。

　　注 : 例如基因组文库 、互补 DNA文库 、噬菌体展示肽文库等 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 5,有修改] 3. 1.9

　　接头 adapter

　　用于标记和固定待测序片段的一小段已知序列的 DNA 片段 。

　　3. 1. 10

　　标签 index

　　条码 barcode

　　一段特征性的脱氧核苷酸短片段 ,在多样本混合检测时 ,充当识别特定样本来源的唯一标志 。

　　3. 1. 11

　　测序通量 sequencingthroughput

　　单次测序可获得序 列 信 息 的 基 因 片 段 数 量 或 可 测 定 的 脱 氧 核 糖 核 酸 和 核 糖 核 酸(以 碱 基 表 示)数量 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 21]

　　3. 1. 12

　　测序读长 read length ofsequencing

　　测序能测得的最长 DNA 片段的长度 。

　　注 : 通常以碱基数表示 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 24,有修改]

　　3. 1. 13

　　测序深度 depth ofsequencing

　　待测样本中某个指定的核苷酸或某条指定的序列被检测的次数 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 31,有修改]

　　3. 1. 14

　　碱基识别正确率 accuracy ofbasecalling

　　单次测序正确碱基数占可识别碱基总数的比例 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 27,有修改]

　　3. 1. 15

　　碱基识别错误率 inaccuracy ofbasecalling

　　单次测序错误碱基数占可识别碱基总数的比例 ,与碱基识别正确率(3. 1. 14)相对 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 28,有修改]

　　2

　　GB/T 43636—2024

　　3. 1. 16

　　碱基识别质量 quality ofbasecalling

　　衡量碱基正确识别的概率 。通常以数字值直接表示 。

　　碱基识别质量与碱基识别错误率之间的关系可用式(1)表示 :

　　Q = - 10 ·lgP ……………………( 1 )

　　式中 :

　　Q — 碱基识别质量 ;

　　P — 碱基识别错误率 。

　　[来源 :GB/T 30989—2014,3. 29,有修改]

　　3. 1. 17

　　分析阈值 analyticalthreshold

　　能将检测到的信号与基线噪声进行可靠区分的最低测序深度(占比) 。

　　3.2 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件 。

　　DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid)

　　DNB:DNA纳米球(DNA Nanoball)

　　InDel:插入或缺失(Insertion Deletion)

　　NGS:二代测序(NextGeneration Sequencing)

　　PCR:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)

　　SNP:单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism)

　　STR:短串联重复序列(ShortTandem Repeat)

　　4 总体要求

　　4. 1 实验室建设应符合 GB/T 43633(法庭科学 DNA实验室建设规范)的要求 。

　　4.2 实验人员应熟悉并掌握基于二代测序进行法庭科学遗传标记检验的原理和方法 ,并能正确使用分析软件对测序结果进行分析与评价 。

　　4.3 实验室应有完备的文书体系 ,准确 、清晰 、完整地记录实验流程和结果 ,相关格式参见附录 A。 原始记录 、报告等应归档留存 ,保证其具有可追溯性 。

　　4.4 实验室的环境与设施应符合 GB/T 27025的要求 。实验室应设置文库构建区 、核酸定量区 。 为了有效防止 DNA污染 ,实验室应设 置 分 隔 独 立 的 工 作 区 域 进 行 PCR 扩 增 前 操 作(试 剂 配 制 、样 本 制 备等)和后续 PCR扩增 、测序分析等检验操作 ,并标识区分不同工作区 。检验流程应单向流动 ,必要时实现人员的单向流动 。所有实验操作应在规定区域进行 。

　　5 原理

　　将生物检材或样本制备成待测样品 ,通过桥式 PCR、乳化 PCR或 DNA纳米球扩增等 PCR 扩增技术 ,将待测样品量放大 ,并收集成文库 ,然后进行平行循环测序 。利用边合成边测序的策略 ,加入一种或多种带标记或不带标记的底物核苷酸 ,在聚合酶的作用下 ,按照碱基互补配对原则 ,进行 DNA 链的延伸 ,延伸一轮测取一轮底物与模板结合后发出的信号 ,包括荧光信号 、电信号或半导体芯片检测的离子信号等 ,收集该信号并确定所测位点的碱基信息 。 当上一轮测序完成后 ,重复测序过程 , 即实现大规模并行基因测序 。

　　3

　　GB/T 43636—2024

　　6 器材和试剂

　　6. 1 通则

　　6. 1. 1 对于采用的检验器材和试剂等产品应按照 GB/T 27025的要求经方法确认后方可使用 。

　　6. 1.2 对于采用的商业化或自行开发的法庭科学遗传标记二代测序检测试剂应进行质量评价验证 ,包括但不限于准确性 、灵敏度 、稳定性 、均衡性 、重复性 、检材适应性 、种属特异性等 。

　　6.2 器材

　　主要检验器材包括 :

　　a) 二代 测 序 仪 ; 碱 基 识 别 质 量 大 于 20, 碱 基 识 别 质 量 过 滤 之 后 的 测 序 准 确 率 大 于 或 等 于

　　99. 9% ,测序通量适合相应法庭科学遗传标记检验 ;

　　b) PCR仪 ;

　　c) 荧光定量 PCR仪 ;

　　d) 离心机 ;

　　e) 低温冰箱 ;

　　f) 移液器 。

　　6.3 试剂

　　主要检验试剂包括 :

　　a) DNA提取试剂 :用于释放 、分离获得各类生物样本中的所有 DNA并进行纯化 ;

　　b) PCR 复 合 扩 增 试 剂 : 用 于 大 规 模 平 行 复 合 扩 增 针 对 STR、SNP、InDel等 遗 传 标 记 或 线 粒 体DNA 的各目标位点靶序列 ,试剂盒内至少应包含 :扩增引物 、扩增酶及缓冲液 ;

　　c) 文库构建试剂 :用 于 核 酸 样 品 的 测 序 文 库 构 建 , 试 剂 盒 内 至 少 应 包 含 : 接 头 、DNA 连 接 酶 或DNA 聚合酶 、缓冲液 ;

　　d) 测序试剂 :用于对测序文库进行二代测序 ,试剂盒内至少应包含 : 测序引物 、测序反应酶及缓冲液 。

　　7 检验流程

　　7. 1 通则

　　检验流程应符合相应试剂说明书和仪器操作规范要求 ,并进行实验室内部方法验证 ,制定相应的作业指导书 , 内容至少包括 :

　　a) 检验步骤 :至少包括 DNA提取与定量 、测序文库构建 、测序文库纯化与定量 、测序检验等 ;

　　b) 质量控制 :至少包括 DNA质量和浓度控制 、文库片段长度和浓度控制 、测序原始数据质量控制 、测序结果质量评价等 。

　　7.2 DNA提取与纯化

　　按照 GB/T 43635(法庭科学 DNA实验室检验规范)的方法开展实验 ,并对 DNA 提取的质量和浓度进行质量控制 。宜采用荧光定量方法对 DNA 浓度进行定量 ,应对符合文库构建的质量要求指标进行方法验证 。如果核酸样品质量不符合要求 ,应重新提取或增加样品量再进行相应操作 。

　　4

　　GB/T 43636—2024

　　7.3 目标序列扩增

　　将适量的 DNA加至引 物 混 合 液 和 PCR 预 混 体 系 中 进 行 PCR 扩 增 , 扩 增 后 选 择 合 适 的 方 式 对PCR产物进行纯化 。扩增反应体系及循环参数参照相应试剂说明书操作 。 实验应设置阳性对照和阴性对照 。

　　7.4 文库构建

　　主要步骤包括添加接头 、文库纯化 、文库质量控制和文库均一化 。材料和方法以文库构建试剂说明书为准 ,其他注意事项包括 :

　　a) 清晰标记添加的标签接头 , 防止标签之间造成污染 ;

　　b) 标签接头连接后采用磁珠法或相关文库纯化试剂对扩增产物进行纯化处理 ;

　　c) 文库质量控制宜 采 用 荧 光 定 量 方 法 检 测 文 库 浓 度 , 可 选 择 采 用 生 物 分 析 仪 检 测 文 库 片 段 大小 ,实验室应采用方法验证确定符合测序要求的文库质量要求指标 ;

　　d) 符合质量要求的文库进行均一化和混合 ,均一化浓度以测序试剂和测序仪器要求为准 。

　　7.5 测序模板制备

　　测序文库均一化 、混合后 ,宜采用桥式 PCR、乳化 PCR或 DNA纳米球扩增等方法进行信号放大处理 ,使信号强度满足测序识别要求 。材料和方法以测序模板制备试剂说明书为准 。

　　7.6 测序

　　测序即加入底物核苷酸 ,在测序酶的作用下使底物核苷酸与测序文库中的待测样品进行结合 , 同时收集该过程中产生的信号 ,包括但不限于荧光信号 、电信号或离子信号 。材料和方法参照相应二代测序试剂说明书 ,其他注意事项包括 :

　　a) 根据采用的检测试剂和二代测序平台摸索确定合适的文库上机浓度 ;

　　b) 根据检测的法庭科学遗传标记特性选择合适的测序读长以保证测序结果准确和完整 ;

　　c) 根据不同测序平台的特性和检测样本量选择合适测序通量的测序试剂 、确定合适的测序深度并进行充分验证 ,保证测序结果准确 。

　　8 数据分析

　　8. 1 通则

　　8. 1. 1 软件的分析流程开放

　　应选用公开数据分析流程 、算法和数据分析参数的生物信息学软件 ,进行法庭科学遗传标记二代测序数据分析 ,确保二代测序实验结果准确 、可溯源 。

　　8. 1.2 测序原始数据质量控制

　　8. 1.2. 1 原始数据质量评估

　　通过测序质量值量化评估原始数据质量 ,宜评估的指标包括碱基质量 、序列质量 、序列长度 、N(未测到或不确定碱基)的比例 、接头含量等 。

　　8. 1.2.2 数据过滤

　　根据评估结果过滤去除原始数据中的接头 、低质量或未检出的碱基及序列 ,宜过滤的内容包括(以

　　5

　　GB/T 43636—2024

　　下过滤参数应根据检测不同的法庭科学遗传标记或使用不同的二代测序平台进行调整 ,并经过实验室验证) :

　　a) 检测接头序列并进行剪切 ;

　　b) 去除含一定数目 N碱基的序列 ;

　　c) 设定低质量碱基的判定阈值 ,去除含一定比例以上低质量碱基的序列 ;

　　d) 设定滑动窗 口 ,去除序列平均碱基值低于阈值的序列 ;

　　e) 去除剪切后低于一定长度的序列 ;

　　f) 其他经过验证的剪切去除序列方式 。

　　8. 1.3 数据比对分析

　　采用适合的软件分析数据质量控制后的测序数据 ,对目标法庭科学遗传标记进行分型并统计测序深度 。

　　8.2 STR分型

　　8.2. 1 二代测序 STR数据分析软件应支持将 STR作为序列多态遗传标记进行分型 , 即长度相同而序列不同的 STR等位基因可被识别为不同的等位基因 。序列多态分型结果命名应与现有长度多态命名兼容 ,并具备序列唯一性 。

　　8.2.2 以 GRCh38作为比对参考序列 , 以其正向序列作为 STR序列比对依据 。

　　8.2.3 测序读长应足够覆盖 STR扩增子长度 ,不应通过序列拼接的方式进行 STR分型 ,应舍去未测通扩增子的数据 。

　　8.3 SNP分型

　　8.3. 1 以 GRCh38作为比对参考序列 。

　　8.3.2 采用 dbSNP数据库中 ID号码(rs#)的方式进行 SNP位点命名 。

　　8.4 InDel分型

　　8.4. 1 以 GRCh38作为比对参考序列 。

　　8.4.2 插入等位基因以序列信息标示 ,缺失等位基因用“-”进行标示 。

　　8.5 线粒体 DNA测序

　　以人类线粒体 DNA参考序列(NCBIReference Sequence: NC_012920. 1)作为比对参考序列 ,进行序列比对 、拼接和定位 ,标出与之不同的碱基作为特征点 。

　　8.6 测序深度阈值设定与使用

　　8.6. 1 各基因座/位点设定合适的测序深度(占比)作为分型研判的分析阈值 。若序列的测序深度占比(在该基因座/位点总测序深度中的比例)低于分析阈值时研判为噪声序列可被过滤 ;若序列的测序深度占比高于或等于分析阈值时应进一步研判序列的类型 。

　　8.6.2 实验室应根据自行检测数据设定分析阈值中的测序深度占比 。 阈值设定方法参照表 1、表 2 和图 1 的示例 。针对已知分型的单一来源样本 ,统计某位点的噪声序列最高测序深度占该位点总测序深度的比例达 1%(位点总测序深度为 5 000,噪声序列最高测序深度为 50,见表 1) 。检测不少于 50例样本 ,获得每例样本某位点的噪声序列最高测序深度占该位点总测序深度的比例(见图 1) ,在图 1 的示例中可设定测序深度占比 1. 5%作 为 该 位 点 的 阈 值 比 例 。对 于 STR 基 因 座 , 应 先 确 定 等 位 基 因 和 影 子峰 ,再统计噪声序列的最高测序深度占比 ,在表 2 的示例样本中噪声序列的最高测序深度占比 1. 8% 。

　　6

　　GB/T 43636—2024

　　表 1 已知分型样本的某 SNP位点的序列情况

　　序列

　　已知类型

　　SNP分型

　　测序深度

　　测序深度占比

　　TGAATGCCATCCGTATCACCTGTTGAAGGTTCACC

　　等位基因

　　T

　　4 940

　　4 940/5 000= 98. 8%

　　TGAATGCCATCCGTATCACCTGTAGAAGGTTCACC

　　噪声序列

　　A

　　50

　　50/5 000= 1%

　　TGAATGCCATCCGTATCACCTGTCGAAGGTTCACC

　　噪声序列

　　C

　　10

　　10/5 000= 0. 2%

　　图 1 各样本中某位点的噪声序列最高测序深度占比情况

　　表 2 已知分型样本的某 STR基因座的序列情况

　　长度

　　序列

　　已知类型

　　测序深度

　　测序深度占比

　　12

　　[ATCT] 12

　　等位基因

　　2 500

　　2 500/5 000= 50%

　　10

　　[ATCT] 10

　　等位基因

　　2 100

　　2 100/5 000= 42%

　　11

　　[ATCT] 11

　　影子峰

　　150

　　150/5 000= 3%

　　9

　　[ATCT] 9

　　影子峰

　　130

　　130/5 000= 2. 6%

　　11

　　[ATCT] 5 AACT[ATCT] 5

　　噪声序列

　　90

　　90/5 000= 1. 8%

　　12

　　AACT[ATCT] 11

　　噪声序列

　　25

　　25/5 000= 0. 5%

　　10

　　AACA[ATCT] 9

　　噪声序列

　　5

　　5/5 000= 0. 1%

　　8.6.3 设定待分析样本的某基因座/位点的分析阈值时 ,根据 8. 6. 2 中的方法设定测序深度占比 ,再计算得到对应测序深度值(即某基因座/位点的总测序深度与测序深度占比的乘积) 。若该值大于或等于10则作为该基因座/位 点 的 分 析 阈 值 , 若 该 值 小 于 10则 以 测 序 深 度 10作 为 该 基 因 座/位 点 的 分 析阈值 。

　　8.6.4 参照以下示例样本应用分析阈值进行分型研判 。

　　示例 1: 按照 8. 6. 2 中的方法设定测序深度占比 1%作为某 SNP位点的阈值比例 。样本 A 的该 SNP位点的总测序深度为 4 000,则测序深度小于 40的序列(该示例中分别为 30、20、10)研判为噪声序列 ,详见表 3。

　　7

　　GB/T 43636—2024

　　表 3 某 SNP位点的序列情况示例

　　序列

　　SNP分型

　　测序深度

　　测序深度占比

　　研判类型

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACATGGGTACTAAT

　　A

　　3 930

　　98. 25%

　　等位基因

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACGTGGGTACTAAT

　　G

　　30

　　0. 75%

　　噪声序列

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACTTGGGTACTAAT

　　T

　　20

　　0. 5%

　　噪声序列

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACCTGGGTACTAAT

　　C

　　10

　　0. 25%

　　噪声序列

　　示例 2: 按照 8. 6. 2 中的方法设定测序深度占比 2%作为某 STR基因座的阈值比例 。样本 B 的该 STR基因座的总测序深度为 10 000,则测序深度小于 200的序列(该示例中分别为 100、20) 研判为 噪 声 序 列 。对 于 测 序 深 度 占 比 3%的序列 ,需进一步研判确定为等位基因或者噪声序列 ,详见表 4。

　　表 4 某 STR基因座的序列情况示例

　　长度

　　序列

　　测序深度

　　测序深度占比

　　研判类型

　　18

　　[GGAA] 12 [GGCA] 6

　　4 500

　　45%

　　等位基因

　　18

　　[GGAA] 11 [GGCA] 7

　　4 200

　　42%

　　等位基因

　　17

　　[GGAA] 11 [GGCA] 6

　　480

　　4. 8%

　　影子峰

　　17

　　[GGAA] 10 [GGCA] 7

　　400

　　4%

　　影子峰

　　18

　　[GGAA] 11 [GGCA] 2 GGAA[GGCA] 4

　　300

　　3%

　　噪声序列

　　17

　　[GGAA] 12 [GGCA] 2 GGGA[GGCA] 2

　　100

　　1%

　　噪声序列

　　17

　　[GGAA] 11GGGA[GGCA] 5

　　20

　　0. 2%

　　噪声序列

　　示例 3: 按照 8. 6. 2 中的方法设定测序深度占比 1%作为某 SNP位点的阈值比例 。样本 C 的该 SNP位点的总测序深度为 500,根据设定测序深度占比计算对 应 测 序 深 度 值 为 5,则 按 照 8. 6. 3 中 的 要 求 设 定 测 序 深 度 10作 为 分 析 阈 值 。测序深度为 8 和 9 的序列即使 满 足 测 序 深 度 占 比 大 于 1% , 但 需 要 根 据 分 析 阈 值 测 序 深 度 的 最 低 要 求 判 定 为 噪 声 序列 ,详见表 5。

　　表 5 某 SNP位点的序列情况示例

　　序列

　　SNP分型

　　测序深度

　　测序深度占比

　　研判类型

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACATGGGTACTAAT

　　A

　　483

　　96. 6%

　　等位基因

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACGTGGGTACTAAT

　　G

　　9

　　1. 8%

　　噪声序列

　　TACATAGGTGGGAAAGCAGAACACTTGGGTACTAAT

　　T

　　8

　　1. 6%

　　噪声序列

　　9 遗传参数计算

　　9. 1 将 STR作为序列多态性遗传标记进行法庭科学参数和亲权指数计算 。 即长度相同而序列不同的STR等位 基 因 是 独 立 的 不 同 等 位 基 因 , 所 采 用 人 群 频 率 数 据 应 是 序 列 多 态 STR 等 位 基 因 频 率 统 计数据 。

　　9.2 在进行法庭科学参数和亲权指数计算过程中 ,需要充分考虑所检遗传标记间连锁关系的影响 。

　　8

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　法庭科学 DNA 二代测序检验记录表

　　法庭科学 DNA二代测序检验记录表见表 A. 1~表 A. 6。

　　表 A. 1 扩增模板 DNA定量结果登记表

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　扩增模板 DNA定量结果登记表

　　操作人 :

　　扩增模板 DNA定量时间 : 自 年 月 日 时 分 至 年 月 日 时 分(24小时制)

　　定量仪器 : □Qubit荧光计 □实时荧光定量 PCR仪 □其他

　　仪器编号 :

　　定量试剂 : □试剂 一 □试剂二 □其他

　　试剂 LOT号 :

　　样本编号

　　浓度

　　样本编号

　　浓度

　　样本编号

　　浓度

　　浓度单位默认为 ng/μL,若使用其他浓度单位需填写在表格中 。

　　第 页/共 页

　　9

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.2 扩增作业单

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　DNA检验记录 — 扩增作业单

　　操作人 :

　　扩增时间 : 自 年 月 日 时 分 至 年 月 日 时 分(24小时制)

　　扩增试剂 : □试剂 一 □试剂二 □试剂三 □试剂四 □其他

　　试剂 LOT号 :

　　扩增仪器编号 : 扩增体系 : μL 循环数 :

　　序号

　　位置

　　样本编号

　　模板

　　序号

　　位置

　　样本编号

　　模板

　　序号

　　位置

　　样本编号

　　模板

　　序号

　　位置

　　样本编号

　　模板

　　1

　　A1

　　25

　　A4

　　49

　　A7

　　73

　　A10

　　2

　　B1

　　26

　　B4

　　50

　　B7

　　74

　　B10

　　3

　　C1

　　27

　　C4

　　51

　　C7

　　75

　　C10

　　4

　　D1

　　28

　　D4

　　52

　　D7

　　76

　　D10

　　5

　　E1

　　29

　　E4

　　53

　　E7

　　77

　　E10

　　6

　　F1

　　30

　　F4

　　54

　　F7

　　78

　　F10

　　7

　　G1

　　31

　　G4

　　55

　　G7

　　79

　　G10

　　8

　　H1

　　32

　　H4

　　56

　　H7

　　80

　　H10

　　9

　　A2

　　33

　　A5

　　57

　　A8

　　81

　　A11

　　10

　　B2

　　34

　　B5

　　58

　　B8

　　82

　　B11

　　11

　　C2

　　35

　　C5

　　59

　　C8

　　83

　　C11

　　12

　　D2

　　36

　　D5

　　60

　　D8

　　84

　　D11

　　13

　　E2

　　37

　　E5

　　61

　　E8

　　85

　　E11

　　14

　　F2

　　38

　　F5

　　62

　　F8

　　86

　　F11

　　15

　　G2

　　39

　　G5

　　63

　　G8

　　87

　　G11

　　16

　　H2

　　40

　　H5

　　64

　　H8

　　88

　　H11

　　17

　　A3

　　41

　　A6

　　65

　　A9

　　89

　　A12

　　18

　　B3

　　42

　　B6

　　66

　　B9

　　90

　　B12

　　19

　　C3

　　43

　　C6

　　67

　　C9

　　91

　　C12

　　20

　　D3

　　44

　　D6

　　68

　　D9

　　92

　　D12

　　21

　　E3

　　45

　　E6

　　69

　　E9

　　93

　　E12

　　22

　　F3

　　46

　　F6

　　70

　　F9

　　94

　　F12

　　23

　　G3

　　47

　　G6

　　71

　　G9

　　95

　　G12

　　24

　　H3

　　48

　　H6

　　72

　　H9

　　96

　　H12

　　模板一栏单位默认为 ng,若使用其他单位需填写在表格中 。

　　第 页/共 页

　　10

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.3 文库构建作业单

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　DNA检验记录 — 文库构建作业单( 测序平台)

　　操作人 :

　　建库时间 : 自 年 月 日 时 分 至 年 月 日 时 分(24小时制)

　　建库方法 : □手动 □ 仪器编号 : 建库试剂 : □建库试剂 一 □建库试剂二 □其他

　　试剂 LOT号 : 标签试剂 : □标签试剂 一 □其他

　　试剂 LOT号 : 纯化试剂 : □纯化试剂 一 □其他

　　试剂 LOT号 :

　　样本编号

　　标签号

　　样本编号

　　标签号

　　样本编号

　　标签号

　　第 页/共 页

　　11

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.4 文库定量结果登记表

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　文库定量结果登记表

　　操作人 :

　　文库定量时间 : 自 年 月 日 时 分 至 年 月 日 时 分(24小时制)

　　定量仪器 : □Qubit荧光计 □实时荧光定量 PCR仪 □其他

　　仪器编号 :

　　定量试剂 : □试剂 一 □试剂二 □其他

　　试剂 LOT号 :

　　样本编号

　　浓度

　　样本编号

　　浓度

　　样本编号

　　浓度

　　浓度单位默认为 ng/μL,若使用其他浓度单位需填写在表格中 。

　　第 页/共 页

　　12

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.5 测序作业单

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　DNA检验记录 — 测序作业单 * ( 测序平台)

　　操作人 :

　　模板制备时间 : 自 年 月 日 时 分 至 年 月 日 时 分(24小时制)

　　测序芯片 : □芯片 一 □芯片二 □芯片三 □芯片四 □芯片五 芯片编号 :

　　模板制备方法 : □手动 □工作站 仪器编号 :

　　模板制备试剂 : □试剂 一 试剂 LOT号 :

　　□试剂二 试剂 LOT号 :

　　测序时间 : 自 年 月 日 时 分 至 年 月 日 时 分(24小时制)

　　测序仪器 : □仪器 一 □仪器二 □仪器三 仪器编号 :

　　测序试剂 : □试剂 一 试剂 LOT号 :

　　□试剂二 试剂 LOT号 :

　　□试剂三 试剂 LOT号 :

　　测序参数 : ①DNA文库上样浓度 : ②Flows: ③测序读长

　　样本编号

　　标签号

　　样本编号

　　标签号

　　样本编号

　　标签号

　　第 页/共 页

　　* 若模板制备由测序仪器内部完成 ,则不填相应内容 。

　　13

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.6 DNA分型记录单

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　DNA分型记录 — 序列多态 STR分型研判记录单

　　样本编号 :

　　基因座

　　长度分型

　　重复区序列

　　侧翼区变异

　　测序深度

　　序列多态性命名

　　签名/日期 :

　　第 页/共 页

　　14

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.6 DNA分型记录单 (续)

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　DNA分型记录 —SNP分型研判记录单 *

　　样本编号 :

　　位点

　　分型

　　测序深度

　　位点

　　分型

　　测序深度

　　位点

　　分型

　　测序深度

　　签名/日期 :

　　第 页/共 页

　　* InDel分型研判记录单可参照该表格式 。

　　15

　　GB/T 43636—2024

　　表 A.6 DNA分型记录单 (续)

　　× × × × DNA实验室 控制编号 :

　　DNA分型记录 — 线粒体 DNA测序结果记录单

　　案件受理号 :

　　样本编号

　　特征点

　　注 1: 参考序列为修订的剑桥参考序列(revised Cambridge reference sequence,rCRS) 。

　　注 2: “DEL”表示该位点相对 rCRS缺失 ;空白表示某样本不存在特征点 。

　　注 3: 无法明确判读的核苷酸多态性点描述为 :信号较强的碱基/信号较弱的碱基 。

　　签名/日期 :

　　第 页/共 页

　　16

　　GB/T 43636—2024

　　参 考 文 献

　　[1] GB/T 30989—2014 高通量基因测序技术规程