GB/T 18084-2025 地中海实蝇检疫鉴定方法

　　ICS 65. 020.20 CCS B 16

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 18084—2025代替 GB/T 18084—2000

　　地中海实蝇检疫鉴定方法

　　Detection and identification ofCeratitiscapitata (Wiedemann)

　　2025-12-31发布 2026-07-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 18084—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件代替 GB/T 18084—2000《植物检疫 地中海实蝇检疫鉴定方法》,与 GB/T 18084—2000相

　　比 ,除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　— 更改了范围(见第 1 章 ,2000年版的第 1 章) ;

　　— 增加了术语和定义(见第 3 章) ;

　　— 更改了仪器 、用具和试剂(见第 6章 ,2000年版的第 3 章) ;

　　— 删除了抽查和取样(见 2000年版的第 4章和第 5 章) ;

　　— 更改了现场检查(见第 7章 ,2000年版的第 6章) ;

　　— 更改了饲养(见 8. 1,2000年版的 6. 4) ;

　　— 增加了标本制备(见 8. 2) ;

　　— 更改了形态鉴定(见 8. 3,2000年版的第 7章) ;

　　— 增加了分子生物学鉴定(见 8. 5) ;

　　— 更改了结果判断(见第 9章 ,2000年版的第 8章) ;

　　— 增加了标本保存(见第 10章) ;

　　— 增加了 DNA条形码方法和实时荧光 PCR方法(见附录 E) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归 口 。

　　本文件起草单位 :广州海关技术中心 、中国农业大学 、中华人民共和国杭州萧山机场海关 、金华市农业技术推广与种子管理中心 。

　　本文件主要起草人 :李献锋、何旭诺、曹文泽、李志红、李月红、黄伟超、柳丽君、魏霜、李盼畔、刘海军、冯黎霞 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　— 2000年首次发布 GB/T 18084—2000;

　　— 本次为第一次修订 。

　　Ⅰ

　　GB/T 18084—2025

　　地中海实蝇检疫鉴定方法

　　1 范围

　　本文件描述了地中海实蝇 Ceratitiscapitata (Wiedemann,1824)的检疫鉴定方法 。

　　本文件适用于地中海实蝇的检疫鉴定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 36772—2018 小条实蝇属检疫鉴定方法

　　SN/T 1847 寡毛实蝇类害虫分类学术语

　　3 术语和定义

　　GB/T 36772—2018和 SN/T 1847界定的术语和定义适用于本文件 。

　　4 基本信息

　　中文名 :地中海实蝇 。

　　学名 :Ceratitiscapitata (Wiedemann,1824) 。

　　中文异名 :地中海小条实蝇 ,地中海腊实蝇 。

　　英文名 :Mediterranean fruitfly,Medfly。

　　异名 :Tephritiscapitata Wiedemann, 1824、Trypeta capitata (Wiedemann, 1824) 、C. citriperda Macleay,1829、C. hispanica Brême,1842、C. citripeda Efflatoun, 1924、PardalaspisasparagiBezzi, 1924、C. asparagiBezzi,1924。

　　分类地位 :双翅目 Diptera,实蝇科 Tephritidae,实蝇亚科 Trypetinae,腊实蝇族 Ceratii,小条实蝇属Ceratitis,小条实蝇亚属 Ceratitis (Ceratitis) 。

　　小条实蝇属世界已报道超过 100种 ,小条实蝇亚属已报道有 8种 ,地中海实蝇是该属最具经济意义的有害种类 ,它是一种重要的水果害虫 。成虫具有一定的飞行能力 ,可进行短距离扩散传播 , 卵 、幼虫 、蛹可随果实 、包装物 、运输工具 、寄主植物携带的土壤或基质等传播 。

　　地中海实蝇的其他信息见附录 A。

　　5 方法原理

　　5. 1 形态学鉴定

　　通过观察寄主果实的为害状 、传播途径及可能携带虫体的包装物 、运输工具 、土壤或基质等 ,依据成虫的形态学特征进行种类鉴定 。

　　1

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　　5.2 分子生物学鉴定

　　针对幼虫 、蛹或成虫样品 ,通过 DNA条形码序列扩增及与地中海实蝇参考序列的比对 , 或基于实时荧光 PCR 的扩增结果 ,进行种类鉴定 。

　　6 仪器、用具和试剂

　　6. 1 仪器

　　体视显微镜 、生物显微镜 、荧光定量 PCR仪 、普通 PCR仪 、电泳仪 、凝胶成像系统 、干燥箱和冰箱等仪器设备 。

　　6.2 用具

　　实蝇诱捕器 、捕虫网 、养虫箱 、镊子 、毛笔 、放大镜 、解剖针 、解剖刀 、指形管 、载玻片 、盖玻片 、昆虫针 、白瓷盘 、烧杯 、冻存管 、防虫网罩 、干燥器和玻璃棉等用具 。

　　6.3 试剂或材料

　　除非另有规定 ,仅使用分析纯试剂 。

　　6.3. 1 10%氢氧化钠(或 10%氢氧化钾)溶液 :称取氢氧化钠(或氢氧化钾) 10 g 置于 200 mL烧杯中 ,加入约 80 mL 的蒸馏水 ,搅拌溶解后再加蒸馏水定容至 100 mL。

　　6.3.2 封片胶 :称取阿拉伯树胶粉 30 g 于烧杯中 ,加入 50 mL蒸馏水 ,置于 40 ℃ ~ 50 ℃的水浴中加热,使其充分溶解 。加入 200g水合三氯乙醛及 20mL丙三醇 ,置于 55 ℃ ~ 60 ℃的干燥箱内 ,24h后 ,用玻璃棉过滤 。

　　6.3.3 保存液 :量取 75%乙醇溶液 100 mL,加入 1 mL丙三醇 。

　　6.3.4 无水乙醇 。

　　6.3.5 1×三乙酸盐-乙酸缓冲液(1×TAE) 。

　　6.3.6 10×聚合酶链式反应缓冲液(10×PCR Buffer) 。

　　6.3.7 脱氧核糖核苷三磷酸混合液(dNTP Mxiture) 。

　　6.3. 8 Taq酶 。

　　6.3.9 双蒸水(ddH2 O) 。

　　6.3. 10 动物基因组 DNA提取试剂盒 。

　　6.3. 11 引物 。

　　6.3. 12 探针 。

　　6.3. 13 DNA分子质量标记(DNA Marker) 。

　　6.3. 14 琼脂糖 。

　　7 现场检查

　　检查包装物 、运输工具 、寄主植物携带的土壤或基质 ,是否有成虫 、老熟幼虫或蛹 。

　　仔细检查果实表面有无产卵痕迹 ,或果实是否有腐软的现象 ,必要时剖果检查是否有蛆状幼虫 。

　　发现幼虫或蛹可用毛笔进行收集 ,也可用镊子进行拣出 。

　　发现成虫可用捕虫网对成虫进行采集 ,也可用实蝇诱捕器对成虫进行诱捕 。

　　将采集的成虫 、幼虫 、蛹浸泡在 75%乙醇溶液中 ,带回实验室鉴定 。 或将怀疑带虫的果实 、采集的幼虫或蛹带回实验室进一步饲养观察 。

　　2

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　　8 实验室鉴定

　　8. 1 饲养

　　8. 1. 1 卵或幼虫的饲养

　　把采集到的带卵或幼虫的果实放入小号白瓷盘 ,将小号白瓷盘置于装水的大号白瓷盘内 ,用防虫网罩住小号白瓷盘 ,确保网的边 缘 浸 入 水 中 , 将 饲 养 装 置 放 在 温 度 为 25 ℃ ~ 26 ℃ 、相 对 湿 度 为 50% ~ 80%的环境中饲养 6 d~ 13 d至幼虫老熟 。

　　8. 1.2 蛹的饲养

　　取一盛有洁净湿细沙(含水量约 3%) 的养虫杯 ,将现场检查采集的蛹埋入细沙表面以下 3 cm~ 5 cm 处 ,或将采集的老熟幼虫置于细沙表面 ,老熟幼虫会钻入沙中化蛹 。然后置于养虫箱中 ,在温度为25 ℃ ~ 26 ℃ 、相对湿度为 50% ~ 80%条件下饲养 5 d~ 8 d,至成虫羽化 。

　　8. 1.3 成虫的饲养

　　在养虫箱内悬 挂 橙 、芒 果 等 水 果 切 片 于 养 虫 箱 内 供 其 取 食 。 待 成 虫 斑 纹 的 色 泽 和 大 小 稳 定 后(2d~ 5 d)收集成虫 。

　　8.2 标本制备

　　8.2. 1 成虫标本制备

　　将收集的活成虫置于 -20℃以下条件下 ,冷冻 3 h 以上将其杀死 。若收集的是已死亡且干硬的成虫 ,应先进行软化处理 。用蒸馏水或 75%乙醇溶液清洗虫体表面污物 ,用微针插入三角纸近尖角处 ,然后将针尖从成虫中胸腹面垂直插入 ,再用 3 号昆虫针插入三角纸底边中央近边缘处 ,并插入相应的信息标签 ,利用三级台调整虫位和信息标签 。

　　8.2.2 成虫外生殖器玻片标本制备

　　用解剖刀切取成虫腹部 ,置于 10%氢氧化钠(或 10%氢氧化钾) 溶液中 ,浸泡 12 h(或煮沸 3 min)后取出 ,用蒸馏水洗净 。在体视显微镜下 ,用解剖针或镊子挑取阳茎或产卵器置于载玻片上 ,滴入封片胶 ,用解剖针将各部位结构展开 ,盖上盖玻片并粘贴相应的信息标签 。

　　8.2.3 幼虫玻片标本制备

　　用昆虫针在幼虫体壁上刺戳数个小孔 ,置于 10%氢氧化钠(或 10%氢氧化钾)溶液中 ,浸泡 12h(或煮沸 3 min)后取出 ,用解剖针将幼虫体内残留物挤出并用蒸馏水洗净 ,在体视显微镜下挑取口钩 、前气门 、后气门等部位 ,置于载玻片上 ,滴上封片胶 ,用解剖针将所挑取部位结构展开 ,盖上盖玻片并粘贴相应的信息标签 。

　　8.2.4 幼虫、蛹的浸渍标本制备

　　将幼虫或蛹用蒸镏水清洗后 ,投入(60±5) ℃热水中浸泡 5 min~ 10 min,将杀死后的幼虫或蛹冷却至室温后置于保存液中并粘贴相应的信息标签 。

　　8.3 形态鉴定

　　8.3. 1 镜检观察

　　将制作的成虫针插标本置于体视显微镜下 ,生殖器解剖玻片标本和幼虫解剖玻片标本置于生物显

　　3

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　　微镜下 ,观察是否符合以下形态特征 。

　　8.3.2 实蝇科 Tephritidae形态特征

　　实蝇科成虫主要形态特征如下 :

　　— 翅亚前缘脉(Sc)端部几成 90°急剧向前弯曲 ,前弯段细弱 ,终于前缘脉(C)的断裂处 ;

　　— 前缘脉在前缘室段具 2个断裂处 ;

　　— 亚前缘脉完整并与第 1 径 脉(R1 ) 分 离 , 第 1 径 脉(R1 ) 上 具 钝 毛 , 第 2、第 3 合 径 脉(R2+3 ) 不分支 ;

　　— 第 1径脉(R1 )和第 2、第 3合径脉(R2+3)的背侧有细刺状小鬃 ;

　　— 臀室(cup)具一尖角延伸 ;

　　— 足胫节无端前鬃 ;

　　— 雄虫阳茎由细长 、螺旋状卷曲的阳茎基和较为粗大的阳茎端组成 ,雌虫腹部第 7节 ~第 9节形成圆锥形或圆筒形或扁形产卵管 。

　　8.3.3 实蝇亚科 Trypetinae形态特征

　　实蝇亚科成虫主要形态特征如下 :

　　— 后头鬃列均细长且通常为黑色 ;

　　— 中胸背板具肩板鬃(在某些种类中如在 Phytalmini簇中该鬃甚退化) ;

　　— 上前侧片为一缝所分离 ;

　　— 小盾片背面平坦 ;

　　— 翅第 4、第 5合径脉(R4+5)上小鬃常较少 ,且小鬃分布远不及径中横脉(r-m)处 ;

　　— 臀室(cup)与 基中室(bm)近等宽 ,臀室(cup)后端延伸段中等长 ,或甚短 ;

　　— 雌虫具 3个受精囊 。

　　8.3.4 小条实蝇属 Ceratitis形态特征

　　小条实蝇属成虫主要形态特征如下 :

　　— 触角长度显著短于颜 ,第 3节长约 2倍于宽 ,末端圆钝 ,触角芒短毛型 ;

　　— 鬃序完全 ,单眼鬃发达 ,具上 、下侧额鬃各 2对 ,部分类群雄虫头部前对上侧额鬃特化为一狭长而端部扁阔的匙状额附器 ,背中鬃接近或约与前翅上鬃处于同一水平 ;

　　— 基部翅室散布多个暗褐至黑色小斑点或不规则的小斑条 ;

　　— 翅带大部黄色或黄褐色 ,通常具前缘带 、中横带和端前横带各 1 条 ,端前横带通常与其他翅带分离 ,部分种类具后端横带 ;

　　— 臀室(cup)后端部延伸段长 ,通常达臀脉与肘臀脉的合并脉(A1 +CuA2 )长的 1/2;

　　— 肘臀脉(CuA2 )在与臀脉(A1 )相交前凸起 ,第 1、第 2合中脉(M1+2)在到达翅缘前不上拱 ,与翅缘相交成角 ;第 4、第 5合径脉(R4+5)背面小鬃至少伸达径中横脉(r-m) ,径中横脉(r-m) 位于中室的中部 ;

　　— 腹部短宽 ,黄色或黄褐色 ,第 3 和第 4腹节背板常有褐色至黑色斑纹 ,个别种具点状黑斑 ;

　　— 产卵器基节长约是腹背板长的一半 。

　　8.3.5 小条实蝇亚属 Ceratitis (Ceratitis)形态特征

　　小条实蝇亚属成虫主要形态特征如下 :

　　— 中胸盾片具黑色大型斑纹 ,其黑斑与淡色区彼此镶嵌成复杂的花斑 ;

　　— 小盾片端部的 3个黑色斑点联合成为一黑色大斑 ,约占据端部的 1/2~ 2/3;

　　4

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　　— 雄虫头部前对上侧额鬃特化为一极长而端部扁阔的匙形额附器 ;

　　— 翅斑大部分黄色 ,翅前缘带与中横带分离 ;若与中横带连结 ,则雄虫头部额附器末端匙状结构较长 ,且末端平截 。

　　8.3.6 地中海实蝇形态特征

　　8.3.6. 1 成虫

　　成虫主要形态特征如下 :

　　— 体长 3. 5 mm~ 5. 0 mm ,体色黄黑相间 ,腹部和翅上具明显褐色斑纹 ;

　　— 颜面下角有白色的鬃 ,具单眼鬃 ,单眼鬃发达 ,与侧额鬃近等长 ;

　　— 触角第 1节和第 2节红褐色 ,第 3节黄色 ,触角芒黑色 ;

　　— 雄虫前对上侧额鬃特化成端部扁阔的匙状额附器 ,额附器匙状部端尖 、黑色 ,雌虫正常 ;

　　— 中胸背板隆凸 ,乳白色到黄色 ,具分离的黑色斑纹 ,黑色斑纹分布在背部前缘角两侧 、前缘中部 、后缘角两侧 、侧缘的中部 、缝前及缝后两侧 、背部中线处等 ;

　　— 中胸背板背面淡色区被覆细小的银白色鬃 ,肩鬃着生于肩胛黑色斑上 ,背中鬃位于前翅上鬃连线上或稍后处 ;

　　— 小盾片背面隆起 ,具 2对小盾鬃 ,端半部黑色 ,基部侧面具 2个分离的黑色斑 ,并与端部黑色斑间形成灰白色波纹带 ;

　　— 翅透明 、宽短 ,长 3. 6 mm~ 5. 0 mm ,有黄色 、褐色及黑色的斑纹 ,翅有 1 宽的褐黄色中横带 ,从翅的前缘伸至后缘 ,其外侧有 1 覆及中肘横脉(dm-cu)的伸至翅的外缘而不及前缘的带纹 ,翅的前缘带及翅基有深色斑点 ;

　　— 臀室(cup)端部延长 ,两侧近平行 ;

　　— 腹部卵圆形 ,被覆细小的黑色鬃 ,第 2节和第 4节背板基半部各有 1条狭窄横行的淡色带 ;

　　— 雌虫产管长约 1. 0 mm ,产卵管在近中部加宽 ,约 6倍长于最大宽处 。

　　地中海实蝇成虫形态特征见附录 B 中图 B. 1~ 图 B. 8。

　　8.3.6.2 卵

　　卵主要形态特征如下 :

　　— 纺锤形 ,略弯曲 ;

　　— 长 0. 9 mm~ 1. 1 mm ,宽 0. 2 mm~0. 25 mm;

　　— 白色至浅黄色 ,有光泽 ;

　　— 两端尖 ,背面略隆起 ,腹面扁平或略凹陷 ,卵孔区呈瘤状 。

　　地中海实蝇卵形态特征见图 B. 9。

　　8.3.6.3 幼虫

　　幼虫主要形态特征如下 :

　　— 体白色 、细长 、蛆状 ,头部细尖 ,尾部扁平 ,腹面稍弯曲 ;

　　— 1 龄幼虫体长约 1 mm、虫体几乎透明;2龄幼虫部分透明 ,取食的果实在其体内容易可见 ;

　　— 3 龄幼虫体长 6. 5 mm~ 9. 0 mm ,宽 1. 2 mm~ 1. 5 mm;

　　— 口脊 9条 ~ 13条 ,齿短 、钝圆 ,头咽部每侧有一个大的黑色口钩 、口钩高度骨化无端前齿 , 口钩长约是舌骨的 2倍 ,舌骨下方有近圆形突起 ;

　　— 前气门通常有 9 个 ~ 10个管状体 ,后气门裂长是宽的 4. 5 倍 ~ 5 倍 ,气门毛不分叉 ,背侧和腹侧气门裂以一定的角度偏离于中间气门裂 , 中间气门裂相对较为平坦 。

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　　地中海实蝇幼虫形态特征见图 B. 9~ 图 B. 13。

　　8.3.6.4 蛹

　　蛹主要形态特征如下 :

　　— 长椭圆形 ,长 4. 0 mm~4. 3 mm ,宽 2. 1 mm~ 2. 4 mm ,黄褐色至暗褐色 ;

　　— 两前气门之间区凸起 、两后气门之间区凸起并有 1条黄色带 。

　　地中海实蝇蛹形态特征图见图 B. 9。

　　8.4 与近似种的区别

　　地中海实蝇的近似种有马斯卡林实蝇 CeratitiscatoiriiCuerin-Meneville,1843、马 达 加 斯 加 实 蝇C. malgassa Munro,1939和中马达加斯加实蝇 C. manjakatompo Hancock,1984。地中海实蝇与近似种的形态特征比较见附录 C,形态分类检索表见附录 D。

　　8.5 分子生物学鉴定

　　地中海实蝇的分子生物学鉴定采用 DNA条形码方法和实时荧光 PCR方法 ,按附录 E 描述的方法进行 。

　　9 结果判定

　　9. 1 形态学方法

　　以成虫形态特征为鉴 定 依 据 , 符 合 8. 3. 6. 1 形 态 特 征 , 可 判 定 为 地 中 海 实 蝇 , 其 他 虫 态 特 征 可 作参考 。

　　9.2 分子生物学方法

　　DNA条形码方法若待测样品序列与地中海实蝇 DNA条形码参考序列比对结果 ,如序列长度覆盖率 ≥95% ,且最大相似度 ≥99% ,可判定为地中海实蝇 ;若覆盖度或相似度任意一条不满足上述要求 ,则判定为阴性 。

　　实时荧光 PCR方法检测结果为阳性 ,可判定为地中海实蝇 ;若为新寄主或新发地时 ,则应通过成虫形态学鉴定或 DNA条形码方法进一步确认 。

　　10 标本保存

　　用于形态学鉴定的地中海实蝇标本 ,应根据虫态选择不同的方式保存 。幼虫和蛹可制成浸渍标本或将幼虫制成玻片标本 ,成虫应制成针插标本 。成虫针插标本和玻片标本应干燥数日后移入标本柜中保存 ,保存过程要注意防虫防潮 。

　　用于分子生物学鉴定的各虫态标本应置于冻存管 ,加入适量无水乙醇 , -20 ℃冰箱冷冻保存 。 用于分子生物学鉴定所剩余的 DNA进行分装后 , -80 ℃冰箱冷冻保存 。

　　各类型的标本均应记录好名称 、来源 、寄主 、截获地点 、时间 、截获人 、鉴定人等相关信息 ,保存至少6个月 。

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　地中海实蝇其他基本信息

　　A. 1 分布

　　非洲:摩洛哥 、突尼斯 、阿尔及利亚 、安哥拉 、贝宁 、博茨瓦纳 、布基纳法索 、布隆迪 、喀麦隆 、佛得角 、科摩罗 、刚果(布) 、刚果(金) 、科特迪瓦 、埃及 、厄立特里亚 、斯威士兰 、埃塞俄比亚 、加蓬 、加纳 、几内亚 、几内亚比绍 、肯尼亚 、利比里亚 、利比亚 、马达加斯加 、马拉维 、马里 、毛里求斯 、莫桑比克 、纳米比亚 、尼 日尔 、尼 日利亚 、圣多美和普林西比 、塞内加尔 、塞舌尔 、南非 、苏丹 、坦桑尼亚 、多哥 、乌干达 、赞比亚 、津巴布韦 、法属留尼汪岛 、英属圣赫勒拿岛 。

　　欧洲:阿尔巴尼亚 、波黑 、保加利亚 、克罗地亚 、塞浦路斯 、法国 、德国 、希腊 、意大利 、马耳他 、黑山 、葡萄牙 、罗马尼亚 、俄罗斯 、塞尔维亚 、斯洛文尼亚 、西班牙 、瑞士 、乌克兰 。

　　亚洲:伊朗 、伊拉克 、以色列 、约旦 、黎巴嫩 、沙特阿拉伯 、叙利亚 、土耳其 、也门 。

　　美洲:美国 、伯利兹 、哥斯达黎加 、萨尔瓦多 、危地马拉 、洪都拉斯 、尼加拉瓜 、巴拿马 、阿根廷 、玻利维亚 、巴西 、智利 、哥伦比亚 、厄瓜多尔 、巴拉圭 、秘鲁 、乌拉圭 、委内瑞拉 。

　　大洋洲:澳大利亚 。

　　A.2 寄主

　　地中海实蝇是一种多食性害虫 ,寄主范围广 ,可为害桃金娘科 Myrtaceae、蔷薇科 Rosaceae、芸香科Rutaceae、山榄科 Sapotaceae和茄科 Solanaceae等 70多科的 350多种水果和蔬菜 , 已报道的主要寄主见表 A. 1。

　　表 A. 1 地中海实蝇寄主

　　序号

　　科名

　　属名

　　种名

　　1

　　猕猴桃科 Actinidiaceae

　　猕猴桃属 Actinidia

　　中华猕猴桃 Actinidia chinensis

　　美味猕猴桃 A. deliciosa

　　2

　　石蒜科 Amaryllidaceae

　　文殊兰属 Crinum

　　文殊兰 Crinum asiaticum

　　3

　　漆树科 Anacardiaceae

　　腰果属 Anacardium

　　腰果 Anacardium occidentale

　　杧果属 Mangifera

　　杧果 Mangifera indica

　　槟榔青属 Spondias

　　食用槟榔青 Spondiasdulcis

　　4

　　番荔枝科 Annonaceae

　　番荔枝属 Annona

　　毛叶番荔枝 Annona cherimola

　　刺果番荔枝 A. muricata

　　牛心番荔枝 A. reticutata

　　番荔枝 A. squamosa

　　依兰属 Cananga

　　依兰 Cananga odorata

　　5

　　夹竹桃科 Apocynaceae

　　长药花属 Acokanthera

　　长药花 Acokanthera oppositifolia

　　假虎刺属 Carissa

　　双刺假虎刺 Carissabispinosa

　　玫瑰树属 Ochrosia

　　古城玫瑰树 Ochrosia elliptica

　　7

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　　表 A. 1 地中海实蝇寄主 (续)

　　序号

　　科名

　　属名

　　种名

　　5

　　夹竹桃科 Apocynaceae

　　牛角瓜属 Calotropis

　　圆果牛角瓜 Calotropisprocera

　　黄花夹竹桃属 Thevetia

　　黄花夹竹桃 Thevetia peruviana

　　6

　　冬青科 Aquifoliaceae

　　冬青属 Ilex

　　Ilex glabra

　　催吐冬青 Ilex vomitoria

　　7

　　天南星科 Araceae

　　龟背竹属 Monstera

　　龟背竹 Monstera deliciosa

　　8

　　五加科 Araliaceae

　　Astropanax

　　Astropanax volkensii

　　9

　　棕榈科 Arecaceae

　　桄榔属 Arenga

　　桄榔 Arengapinnata

　　果冻椰子属 Butia

　　弓葵 Butiaeriospatha

　　红脉葵属 Latania

　　蓝脉葵 Latanialoddigesii

　　海枣属 Phoenix

　　海枣 Phoenix dactylifera

　　10

　　天门冬科 Asparagaceae

　　天门冬属 Asparagus

　　非洲天门冬 Asparagusdensiflorus

　　11

　　小檗科 Berberidaceae

　　小檗属 Berberis

　　异柄小檗 Berberisholstii

　　12

　　紫草科 Boraginaceae

　　破布木属 Cordia

　　—

　　Ehretia

　　Ehretiapetiolaris

　　13

　　凤梨科 Bromeliaceae

　　凤梨属 Ananas

　　菠萝 Ananascomosus

　　14

　　仙人掌科 Cactaceae

　　刺萼柱属 Acanthocereus

　　Acanthocereuspentagouns

　　仙人掌属 Opuntia

　　梨果仙人掌 Opuntiaficus-indica

　　刺梨 O. vulgaris

　　蛇鞭柱属 Selenicereus

　　量天尺 Selenicereusundatus

　　15

　　红厚壳科 Calophyllaceae

　　红厚壳属 Calophyllum

　　红厚壳 Calophylluminophyllum

　　16

　　山柑科 Capparaceae

　　山柑属 Capparis

　　Capparissandwichiana

　　17

　　番木瓜科 Caricaceae

　　番木瓜属 Carica

　　番木瓜 Carica papaya

　　栎叶木瓜 C. quercifolia

　　18

　　藤黄科 Clusiaceae

　　藤黄属 Garcinia

　　莽吉柿 Garcinia mangostana

　　大叶藤黄 G. xanthochymus

　　19

　　使君子科 Combretaceae

　　榄仁属 Terminalia

　　榄仁树 Terminalia catappa

　　20

　　葫芦科 Cucurbitaceae

　　苦瓜属 Momordica

　　苦瓜 Momordicacharantia

　　西瓜属 Citrullus

　　西瓜 Citrulluslanatus

　　黄瓜属 Cucumis

　　小刺黄瓜 Cucumisanguria

　　甜瓜 C. melo

　　黄瓜 C. sativus

　　C. masima

　　21

　　柿科 Ebenaceae

　　柿属 Diospyros

　　黄柿 D. decandra

　　柿 D. kaki

　　8

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　　表 A. 1 地中海实蝇寄主 (续)

　　序号

　　科名

　　属名

　　种名

　　22

　　杜鹃花科 Ericaceae

　　草莓树属 Arbutus

　　草莓树 Arbutusunedo

　　23

　　豆科 Fabaceae

　　Gourliea

　　Gourlieadecorticans

　　印加树属 Inga

　　Ingafeuillei

　　菜豆属 Phaseolus

　　棉豆 Phaseoluslunatus

　　菜豆 P. vulgaris

　　24

　　大风子科 Flacourtiaceae

　　锡兰莓属 Dovyalis

　　锡兰莓 Dovyalishebecarpa

　　25

　　草海桐科 Goodeniaceae

　　Scaevola

　　黑果草海桐 Scaevola plumieri

　　26

　　胡桃科 Juglandaceae

　　胡桃属 Juglans

　　美国黑胡桃 J. nigra

　　胡桃 J. regia

　　27

　　樟科 Lauraceae

　　鳄梨属 Persea

　　鳄梨 Persea americana

　　Umbellularia

　　加州桂 Umbellularia californica

　　28

　　马钱科 Loganiaceae

　　Strychnos

　　Strychnosatherstonei

　　S. pungens

　　29

　　千屈菜科 Lythraceae

　　石榴属 Punica

　　石榴 Punicagranatum

　　30

　　金虎尾科 Malpighiaceae

　　金虎尾属 Malpighia

　　红叶金虎尾 Malpighia punicifolia

　　Byrsonima

　　厚叶金匙木 Byrsonimacrassifolia

　　31

　　锦葵科 Malvaceae

　　木槿属 Hibiscus

　　玫瑰茄 Hibiscussabdarifa

　　棉属 Gossypium

　　海岛棉 Gossypium barbadense

　　苹婆属 Sterculia

　　无瓣苹婆 Sterculia apetala

　　可可属 Theobroma

　　可可 Theobroma cacao

　　32

　　楝科 Meliaceae

　　Ekebergia

　　Ekebergia capensis

　　33

　　桑科 Moraceae

　　见血封喉属 Antiaris

　　见血封喉 Antiaristoxicaria

　　波罗蜜属 Artocarpus

　　太平洋面包树 Artocarpusaltilis

　　榕属 Ficus

　　无花果 Ficuscarica

　　孟加拉榕 F. benghalensis

　　34

　　芭蕉科 Musaceae

　　芭蕉属 Musa

　　小果野蕉 Musa acuminata

　　大蕉 M. × paradisiaca

　　35

　　桃金娘科 Myrtaceae

　　番樱桃属 Eugenia

　　巴西番樱桃 Eugenia brasiliensis

　　红果仔 E. uniflor

　　野凤榴属 Acca

　　菲油果 Acca sellowiana

　　番石榴属 Psidium

　　番石榴 Psidium guajava

　　草莓番石榴 P. littorale

　　蒲桃属 Syzygium

　　乌墨 Syzygium cumini

　　蒲桃 S. jambos

　　马六甲蒲桃 S. malaccense

　　莲雾 S. samarangense

　　9

　　GB/T 18084—2025

　　表 A. 1 地中海实蝇寄主 (续)

　　序号

　　科名

　　属名

　　种名

　　36

　　蓝果树科 Nyssaceae

　　蓝果树属 Nyssa

　　高山紫树 Nyssa ogeche

　　多花蓝果树 N. sylvatica

　　37

　　木樨科 Oleaceae

　　Forestiera

　　Forestierasegregata

　　环蕊榄属 Noronhia

　　Noronhiaemarginata

　　38

　　酢浆草科 Oxalidaceae

　　阳桃属 Averrhoa

　　木胡瓜 Averrhoabilimbi

　　杨桃 A. carambola

　　39

　　罂粟科 Papaveraceae

　　蓟罂粟属 Argemone

　　蓟罂粟 Argemonemexicana

　　40

　　西番莲科 Passifloraceae

　　西番莲属 Passiflora

　　西番莲 Passiflora caerulea

　　甜百香果 P. ligularis

　　41

　　叶下珠科 Phyllanthaceae

　　叶下珠属 Phyllanthus

　　西印度醋栗 Phyllanthusacidus

　　42

　　鼠李科 Rhamnaceae

　　鼠李属 Rhamnus

　　Rhamnuscalifornica

　　枣属 Ziziphus

　　枣 Ziziphusjujuba

　　43

　　罗汉松科 Podocarpaceae

　　罗汉松属 Podocarpus

　　好望角罗汉松 Podocarpuselongatus

　　44

　　蓼科 Polygonaceae

　　竹节蓼属 Homalocladium

　　竹节蓼 Muehlenbeckia platyclada

　　45

　　蔷薇科 Rosaceae

　　涩石楠属 Aronia

　　红苦味果 Aronia arbutifolia

　　山楂属 Crataegus

　　意大利山楂 Crataegusazarolus

　　C. galbana

　　榅桲属 Cydonia

　　榅桲 Cydonia oblonga

　　枇杷属 Eriobotrya

　　枇杷 Eriobotryajaponica

　　草莓属 Fragaria

　　智利草莓 Fragaria chiloensis

　　苹果属 Malus

　　森林苹果 Malussylvestris

　　李属 Prunus

　　杏 Prunusarmeniaca

　　欧洲李 P. domestica

　　乌荆子李 P. insitita

　　桃 P. persica

　　李 P. salicinia

　　扁桃 P. communis

　　悬钩子属 Rubus

　　Rubus lucidus

　　火棘属 Pyracantha

　　欧亚火棘 Pyracantha coccinea

　　46

　　茜草科 Rubiaceae

　　咖啡属 Cofea

　　小粒咖啡 Cofea arabica

　　大粒咖啡 C. liberica

　　47

　　芸香科 Rutaceae

　　香肉果属 Casimiroa

　　香肉果 Casimiroaedulis

　　Citrofortunella

　　Citrofortunellamitis

　　10

　　GB/T 18084—2025

　　表 A. 1 地中海实蝇寄主 (续)

　　序号

　　科名

　　属名

　　种名

　　47

　　芸香科 Rutaceae

　　柑橘属 Citrus

　　酸橙 Citrusaurantium

　　来檬 C. × aurantiifolia

　　金柑 C. japonica

　　柠檬 C. limon

　　柚 C. maxima

　　香橼 C. medica

　　葡萄柚 C. paradist

　　印度酸橘 C. reshni

　　柑橘 C. reticulata

　　甜橙 C. sinensis

　　明尼橘柚 C. × tangelo

　　枳 C. trifoliata

　　Citrusburifolia

　　黄皮属 Clausena

　　黄皮 Clausena lansium

　　九里香属 Murraya

　　九里香 Murraya paniculata

　　48

　　杨柳科 Salicaceae

　　锡兰莓属 Dovyalis

　　南非醋栗 Dovyaliscafra

　　49

　　刺茉莉科 Salvadoraceae

　　刺茉莉属 Azima

　　四刺刺茉莉 Azima tetracantha

　　50

　　檀香科 Santalaceae

　　檀香属 Santalum

　　檀香 Santalum album

　　S. freycinetianum

　　51

　　无患子科 Sapindaceae

　　咸鱼果属 Blighia

　　西非荔枝果 Blighia sapida

　　龙眼属 Dimocarpus

　　龙眼 Dimocarpuslongan

　　荔枝属 Litchi

　　荔枝 Litchichinensis

　　52

　　山榄科 Sapotaceae

　　山羊榄属 Argania

　　阿甘树 Argania spinosa

　　Bumelia

　　Bumelia tenax

　　星苹果属 Chrysophyllum

　　星苹果 Chrysophyllum cainito

　　C. oliviforme

　　C. polynesicum

　　铁线子属 Manilkara

　　人心果 Manilkara zapota

　　香榄属 Mimusops

　　香榄 Mimusopselengi

　　桃榄属 Pouteria

　　美桃榄 Pouteriasapota

　　绿桃榄 P. viridis

　　蛋黄果 P. campechiana

　　久榄属 Sideroxylon

　　久榄 Sideroxyloninerme

　　53

　　苦木科 Simaroubaceae

　　鸦胆子属 Brucea

　　止痢鸦胆子 Bruceaantidysenterica

　　11

　　GB/T 18084—2025

　　表 A. 1 地中海实蝇寄主 (续)

　　序号

　　科名

　　属名

　　种名

　　54

　　茄科 Solanaceae

　　颠茄属 Atropa

　　颠茄 Atropa belladonna

　　辣椒属 Capsicum

　　辣椒 Capsicum annuum

　　小米辣 C. frutescens

　　夜香树属 Cestrum

　　夜香树 Cestrum noturnum

　　树番茄属 Cyphomandra

　　树番茄 Cyphomandra betacea

　　枸杞属 Lycium

　　欧洲枸杞 Lycium europaeum

　　茄属 Solanum

　　茄 Solanum melongena

　　番茄 S. lycopersicum

　　珊瑚樱 S. pseudocapsicum

　　香瓜茄 S. muricatum

　　龙葵 S. nigrum

　　南青杞 S. seaforthianum

　　洋酸浆属 Physalis

　　灯笼果 Physalisperuviana

　　55

　　瑞香科 Thymelaeaceae

　　Wikstroemia

　　Wikstroemiaphillyreifolia

　　56

　　葡萄科 Vitaceae

　　葡萄属 Vitis

　　美洲葡萄 Vitislabrusca

　　葡萄 V. vinifera

　　57

　　海檀木科 Ximeniaceae

　　海檀木属 Ximenia

　　海檀木 Ximenia americana

　　A.3 生物学特性

　　成虫羽化后 4 d~ 5 d 即可开始在果实内产卵 ,产卵高峰期为羽化后的第 40 d~ 80 d。雌虫通过产卵器刺入果皮 ,钻出 1个约 1 mm 深的卵腔 ,每个卵穴可产 1粒 ~ 10粒卵 。每天可产卵约 22粒 ,适宜条件下 ,一生可产卵 300粒 ~ 1200粒 。雌虫产卵后会在果实上释放标记信息素 ,避免其他雌虫重复产卵 ,但也会出现多头雌虫在同一产卵腔重复产卵的情况 ,可致卵粒数达数十至数百粒 。

　　卵的孵化和发育受温度和湿度影响很大 。卵的发育起始温度为 11 ℃ ,在 26 ℃下 2 d~ 3 d 即可孵化 ;而冬季低温下孵化期可延长至 16 d~ 18 d, 8 ℃ ~ 9 ℃保持 6 d 就不再孵化 。 卵适宜 孵 化 温 度 为25 ℃ ~ 27 ℃ ,最适孵化湿度是 70% 。

　　卵孵化后 ,幼虫迅速钻 入 果 实 取 食 , 并 在 果 实 内 发 育 , 幼 虫 共 3 个 龄 期 。 幼 虫 发 育 的 适 宜 温 度 为24 ℃ ~ 30 ℃ ,低于 10 ℃或高于 36 ℃时幼虫发育停止 。幼虫的发育时间在不同的寄主上有很大差异 ,通常在柑橘类寄主中的发育时间长于苹果 、梨和桃类寄主 。幼虫成熟后即离开寄主果实 ,幼虫脱果多发生在清晨 ,它能将身体拱成环状进行弹跳 ,一次弹跳高度可达 15 cm ,距离可达 12 cm。

　　老熟幼虫通过弹跳离开果实 ,钻入土中化蛹 ,深度为 2 cm~ 5 cm ,最深可达 10 cm。蛹期受温度影响显著 ,蛹的发育起点温度为 13 ℃ ,超过 35 ℃时蛹不能羽化 。

　　成虫寿命与温度密切相关 ,交配后寿命可显著延长 ,且亲代虫龄大时子代寿命更长 。野外成虫寿命通常不超过 2个 ~ 3个月 。羽化后若无食物 ,成虫在 2 d~4 d 内会死亡 ,羽化后前两个月约 50%的成虫会死亡 。在 25 ℃下 ,雄虫平均寿命约为 36. 1 d,雌虫约为 31 d;在 30 ℃下 ,雄虫约 25 d,雌虫 25. 5 d。低温和大雨会加速成虫死亡 ,5 ℃以下成虫寿命不超过两周 。

　　12

　　GB/T 18084—2025

　　地中海实蝇完成 1个世代 通 常 约 需 18 d~ 33 d, 在 具 备 寄 主 , 温 度 在 16 ℃ ~ 32 ℃ 、相 对 湿 度 在75% ~ 80%时 ,世代 可 连 续 发 生 。 其 年 发 生 代 数 主 要 受 温 度 影 响 , 通 常 在 温 暖 地 区 可 多 达 11 代 ~ 16代 ,较寒冷地区可发生 3代 ~4代 。一般第 1代虫口密度较小时 ,第 2代虫口密度会变大 。

　　A.4 危害

　　地中海实蝇寄主种类多 ,雌成虫在寄主果实的表皮下产卵并留下微小的产卵孔(见图 A. 4) ,卵孵化后 ,幼虫在寄主果实内取食(见图 A. 1~ 图 A. 3) ,并产生粪便污染果实 , 常造成果实腐烂或未熟先黄而脱落 。

　　[来源:https://gd. eppo. int] [来源:https://gd. eppo. int]

　　图 A. 1 幼虫为害金橘 图 A.2 幼虫为害辣椒

　　[来源:https://gd. eppo. int] [来源:https://gd. eppo. int]

　　图 A.3 幼虫为害苹果 图 A.4 雌虫在桃上产卵

　　13

　　GB/T 18084—2025

　　附 录 B

　　(资料性)

　　地中海实蝇的形态特征

　　地中海实蝇成虫形态特征图见图 B. 1~ 图 B. 8,幼虫形态特征图见图 B. 9~ 图 B. 13,蛹的形态特征图见图 B. 9。

　　[来源:https://naturdata. com] [来源:https://naturdata. com]

　　图 B. 1 头、胸部背面观(雄) 图 B.2 头部正面观(雄)

　　[来源:www. fruitflyidentification. org. au] [来源:www. fruitflyidentification. org. au]

　　图 B.3 侧面观(雌) 图 B.4 背面观(雌)

　　[来源:www. fruitflyidentification. org. au] [何旭诺摄]

　　图 B.5 示前中后足 图 B.6 翅

　　14

　　GB/T 18084—2025

　　[来源:www. cabidigitallibrary. org] [来源:www. cabidigitallibrary. org]

　　图 B.7 示雌虫产卵管末端 图 B. 8 示雄虫头部和额附器

　　[来源 :Giunti等 ,2023]

　　图 B.9 卵、幼虫和蛹(标尺为 1 mm)

　　[来源 :仿 Thomas] [来源 :仿 Thomas]

　　图 B. 10 示 3 龄幼虫头咽骨 图 B. 11 示 3 龄幼虫前气门

　　[来源 :仿 Thomas] [来源 :仿 Thomas]

　　图 B. 12 示 3 龄幼虫头部 图 B. 13 示 3 龄幼虫后气门

　　15

　　GB/T 18084—2025

　　附 录 C

　　(资料性)

　　地中海实蝇与近似种的区分

　　地中海实蝇与近似种的形态区分见表 C. 1 和图 C. 1~ 图 C. 4。

　　表 C. 1 地中海实蝇与近似种的形态特征比较

　　形态特征

　　地中海实蝇

　　Ceratitiscapitata

　　马斯卡林实蝇

　　C. catoirii

　　马达加斯加实蝇

　　C. malgassa

　　中马达加斯加实蝇C. manjakatompo

　　头部

　　头部不明显缩短

　　头部不明显缩短

　　头部不明显缩短

　　头部明显缩短

　　触角

　　触角芒长刚毛状

　　触角芒长刚毛状

　　触角芒柔毛状

　　触角芒短羽毛状

　　中胸背板

　　前盾 片 2 个 黑 色 的 大缘角与 两 侧 黑 纵 斑 融合 ,背 板 中 部 在 2 个 黑色圆 斑 之 间 有 1 个 近圆 形 小 黑 斑 , 胸 部 背 面淡色 区 背 覆 细 小 银 白色鬃带灰色光泽

　　前盾 片 有 2 个 黑 色 的大缘 角 、中 部 具 3 条 纵黑 斑 , 3 条 纵 黑 斑 不 达横缝 处 , 且 与 横 缝 3 个小黑斑彼此分离

　　前盾 片 中 部 黑 斑 与 缝后中 部 黑 斑 连 结 呈 一条纵 黑 斑 从 肩 板 延 伸至后盾片近中部

　　亮暗 红 色 , 具 “H”状 的 中斑 ,位于缝间 ,另有 1对缝后背侧 条 ; 具 有 清 晰 的 背侧斜带 横 于 中 胸 缝 ; 背 侧板胛黄 色 ; 肩 胛 白 色 其 中部具褐色中斑

　　小盾片

　　端 半 部 黑 色 , 基 部 呈 灰白色波纹

　　端 半 部 黑 色 , 基 部 呈 灰白色波纹

　　端 半 部 黑 色 , 基 带 为 灰白色波纹

　　暗红褐 色 , 具 1 条 狭 窄 的黄色带 , 雌 虫 小 盾 片 端 部两侧 黑 斑 与 小 盾 片 基 部缝后黑斑相连结

　　翅横带特点

　　无 后 端 横 带 ; 端 前 横 带与中横带分离

　　后端横带宽 、与前段横带 游 离 ; 端 前 横 带 通 过沿 M 脉 走 向 的 彩 色 斑纹与中横带连结

　　后端横带狭 、与前端横带 连 结 ; 端 前 横 带 宽 且直并与中横带分离

　　后端横 带 狭 、与 前 端 横 带连结 ;端 前 横 带 狭 且 稍 弯曲并与中横带分离

　　雄虫额附器

　　额 附 器 黑 色 , 其 表 面 常覆 银 灰 色 粉 被 、末 端尖锐

　　额 附 器 色 淡 , 末 端 平截 ,匙状部长宽约相等

　　匙状部呈狭窄状白色

　　未知

　　雌虫产卵管

　　产卵管在近中部加宽

　　产 卵 管 长 约 1. 5 mm ,产卵 管 末 端 顶 部 中 间突起

　　产卵管末端细尖长

　　产卵管末端宽尖

　　a) 地中海实蝇雄虫 b) 马斯卡林实蝇雄虫 c) 马达加斯加实蝇雄虫 d) 中马达加斯加实蝇雌虫

　　[来源 :a) ~ c)仿 White,d)仿 Hancock]

　　图 C. 1 背面观

　　16

　　GB/T 18084—2025

　　a) 地中海实蝇 b) 马斯卡林实蝇 c) 马达加斯加实蝇 d) 中马达加斯加实蝇

　　[来源 :仿 Meyer]

　　图 C.2 中胸背板

　　a) 地中海实蝇 b) 马斯卡林实蝇 c) 马达加斯加实蝇 d) 中马达加斯加实蝇

　　[来源 :仿 Meyer]

　　图 C.3 雌虫产卵管

　　a) 地中海实蝇 b) 马斯卡林实蝇 c) 马达加斯加实蝇 d) 中马达加斯加实蝇

　　[来源 :仿 Meyer]

　　图 C.4 雌虫产卵管末端

　　17

　　GB/T 18084—2025

　　附 录 D

　　(资料性)

　　形态分类检索表

　　D. 1 小条实蝇属及近似属的成虫形态分类检索表

　　小条实蝇属及近似属的成虫分类检索表见 GB/T 36772—2018的附录 C。

　　D.2 小条实蝇属重要亚属成虫形态分类检索表

　　1 额具银白或金黄色粉被区 ; 中侧鬃 2 根 ;翅斑大部褐色 ,前缘带与中横带连结 ,端前横带游离 ;腹

　　部具多个黑色斑点 二鬃小条实蝇亚属 Ceratitis (Pardalaspis) Bezzi

　　额无银白或金黄色粉被区 ; 中侧鬃 1 根 ,若有 2 根则翅斑大部黄色 ;前缘带与中横带 ,端前横带

　　与中横带彼此连结或分离 ;腹部大部黄褐至红褐色 ,一般第 3、4 背板或多或少具灰褐至黑色横

　　带 ,但均无点状斑纹 2

　　2 翅斑大部褐色 ;雄虫中足腿节或胫节具粗大而密集的黑色羽状鬃 ,如若性羽缺如 ,则前足腿节的

　　前内侧具黑 、白花斑 足羽小条实蝇亚属 C. (Pterandrus) Bezzi

　　翅斑大部黄色 ;雄虫的足无黑色羽状鬃或黑 、白花斑 3

　　3 中胸盾片具黑色大型斑纹 ,其黑斑与淡色区彼此镶嵌成复杂的花斑 ;小盾片端部的 3 个黑色斑点联合成为一黑色大斑 ,约占据端部的 1/2~ 2/3;雄虫头部前对上侧额鬃通常特化为一极长而端部扁阔的匙形额附器 ;翅前缘带与中横带分离 ,若与中横带连结 ,则雄虫头部匙形额附器较长 ,且末端平截 … … … … … … … … … … … … … … … … … 小条实蝇亚属 C. (Ceratitis) Macleay中胸盾片大部黄色或黄褐色 ,具黑色斑纹或斑点,其斑纹型式与上述不同 ;小盾片端部的 3个黑色斑点彼此分离 ;雄虫头部前对上侧额鬃正常 ;翅前缘带与中横带相互连结 … … … … … … … …

　　… … … … … … … … … … … … … … … … … … … 准小条实蝇亚属 C. (Ceratalaspis) Hancock注 : 检索表摘自汪兴鉴 ,1995。

　　D.3 小条实蝇亚属成虫形态分类检索表

　　1 翅具后端横带 2

　　翅无后端横带 5

　　2 中胸背板橙红色 ,小盾片端部 3个黑斑在虽有联合但被分割较深(但在雌性中较少) ;雄虫前对

　　上侧额鬃简单 ,不呈匙状 ; 中横带和后端横带分离 Ceratitiscornuta (Bezzi,1924)

　　中胸背板颜色更深 ,小盾片端部 3个黑斑融合为 1个大黑斑 ,分割较浅 ;端前横带和后端横带至

　　少有 1个色带与其他横带相连结 ;雄虫前对上侧额鬃特化成额附器末端通常呈匙状 3

　　3 端前横带与中横带相连结 ,后端横带通常游离 ;雄虫前对侧额鬃呈匙状 、端部平截 ,长宽约相等 ;

　　雌虫产卵管长约 1. 5 mm ,产卵管末端中突两侧较平截

　　马斯卡林实蝇 C. catoiriiGuérin-Méneville,1843

　　端前横带游离 ,后端横带和前缘带相连结 ;雄虫前对侧额鬃呈匙状 、匙状部狭窄(中马达加斯加

　　实蝇雄虫未知) ;雌虫产卵管末端尖长 4

　　4 体型较小(体长 ≤3. 7 mm) ;雌虫小盾片端部两侧黑斑与小盾片基部缝后黑斑相连结 ; 中胸背板

　　缝后黑斑明显 ;雌虫产卵管末端宽短尖

　　中马达加斯加实蝇 C. manjakatompo Hancock,1984

　　体型较大(体长 ≥4. 4 mm) ;雌虫小盾片端部两侧黑斑不与小盾片基部缝后黑斑相连结 ; 中胸背

　　18

　　GB/T 18084—2025

　　板缝后黑斑不明显 ;雌虫产卵管末端细长尖 ;雄虫额附器匙状部狭窄 、白色

　　马达加斯加实蝇 C. malgassa Munro,1939

　　5 中胸背板缝后斑点较弱 ,呈棕色 ;雄虫上侧额鬃末端没有明显加宽 ,呈带状或末端分叉 6

　　中胸背板缝后斑点明显 ,呈黑色 ;雄虫上侧额鬃末端有明显的加宽 7

　　6 前足腿节腹面具黑色的刺 ;雄虫上侧额鬃呈深色、长且呈带状 ;产卵管较短 ,近末端中部变宽

　　C. pinax Munro,1933

　　前足腿节腹面具淡色或深红色的刺 ;雄虫上侧额鬃短且末端分叉 ;产卵管近末端中部未变宽 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … C. brachychaeta Freidberg,1991

　　7 中胸背板浅橙色 ,具棕色斑点,背部覆银色微毛带橙色光泽 ;雄虫额部膨突 ,前对侧额鬃远长于触角芒 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … C. caetrata Munro,1949中胸背板黑色 ,背部覆银色微毛带灰色光泽 ;雄虫额部不膨突 ,前对侧额鬃短于触角芒 … … …

　　… … … … … … … … … … … … … … … … … … … 地中海实蝇 C. capitata (Wiedemann,1824)注 : 检索表译自 Meyer,2000。

　　19

　　GB/T 18084—2025

　　附 录 E

　　(规范性)

　　DNA条形码方法和实时荧光 PCR方法

　　E. 1 DNA提取

　　取待检样本(成虫 、卵 、幼虫或蛹的部分肌肉组织)于双蒸水中漂洗数次 , 吸水纸吸干 ,体视显微镜下剔除其表面的附着物 ,虫蛹去掉蛹壳 ,用于基因组 DNA提取 。

　　宜采用适用的商业动物基因组 DNA提取试剂盒 ,提取具体方法参照试剂盒说明书进行 。

　　洗脱后获得的 DNA 用核酸检测仪测定 DNA 浓度和纯度 ,将提取的基因组 DNA 于 -20 ℃保存备用 。

　　E.2 DNA质量检查

　　用核酸检测仪测定 DNA 的纯度与浓度 ,分别取得 260 nm 和 280 nm 处的吸光值 ,核酸的纯度和浓度计算见公式(E. 1) 、公式(E. 2) 。

　　P = OD260/OD280 …………………………( E. 1 )

　　C = OD260 × 50× N …………………………( E. 2 )

　　式中 :

　　P —DNA纯度 ;

　　OD260 — 核酸在 260 nm 的吸光值 ;

　　OD280 — 蛋白质在 280 nm 的吸光值 ;

　　C —DNA质量浓度 ,单位为纳克每微升(ng/μL) ;

　　N — 稀释倍数 。

　　当 DNA溶液的 OD260与 OD280 的比值范围为 1. 6≤OD260/OD280≤2. 0 时 ,DNA纯度适用于 PCR反应(最佳值为 1. 7~ 1. 9) ,若 DNA 浓度过高 , 应对提取的 DNA 进行稀 释 , 使 其 在 260 nm 的 吸 光 值 在0. 1~ 1 之间 。

　　E.3 DNA条形码方法

　　E.3. 1 引物

　　采用昆 虫 线 粒 体 COI基 因 DNA 条 形 码 通 用 引物 进 行 扩 增 , 上 游 引物 及 序 列 为 LCO-1490 (5'-GGTCAA-CAAATCATAAAGATATTGG-3') , 下 游 引 物 及 序 列 为 HCO-2198(5'-TAAACT- TCAGGGTGACCAAAA-AATCA-3') ,扩增产物大小 658bp(Folmer等 ,1994) 。

　　E.3.2 PCR扩增

　　反应体系(25μL) : 10× PCR Buffer 2. 5 μL, dNTP Mixture(10 mmol/L)2. 0 μL, 上游引物 LCO- 1490/下游引物 HCO-2198(10 μmol/L) 各 1. 0 μL,Taq 酶(5 U/μL) 0. 2 μL, DNA 模 板(10 ng/μL~ 100 ng/μL)1. 0 μL,ddH2 O 补足反应总体积为 25μL(反应体系中各试剂的量使用等效的 PCR 预混液时 ,具体情况根据使用的试剂进行调整) 。

　　PCR扩增反应条件 :预变性 95 ℃ 3 min;变性 95 ℃ 30 s,退火 50 ℃ 30 s,延伸 72 ℃ 1 min,35个循环;72 ℃ 10 min(当使用不同仪器和试剂时 ,可根据要求将反应体系和参数作适当调整) 。

　　上述反应中应同时设置空白对照(以灭菌蒸馏水代替 DNA模板) 。

　　20

　　GB/T 18084—2025

　　E.3.3 琼脂糖凝胶电泳

　　取 5 μLPCR产物与 1. 0 μL 6×loading buffer混合后 ,经 1. 5%琼脂糖凝胶(含荧光染料)进行电泳分析 ,用 DNA Marker(100bp~ 2000bp)作分子标量 ,在 1×TAE或 0. 5×TBE 中以 5 V/cm 的电压电泳 30 min,在凝胶成像系统上观察并拍摄记录结果 。

　　E.3.4 产物测序

　　经凝胶成像系统检测 ,若样品在 658 bp处有 目标条带 , 空白对照无条带 ,对符 合 目 标 条 带 大 小 的PCR扩增产物进行测序分析 。

　　E.3.5 DNA条形码参考序列

　　地中海实蝇 DNA条形码参考序列(658bp) :

　　AACTTTATATTTTATTTTTGGAGCATGAGCTGGTATAGTAGGAACATCCTTAAGAATTTT AATTCGAGCTGAATTAGGACATCCAGGAGCATTAATTGGAGATGATCAAATTTATAATGT AATTGTTACTGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTTTTCATAGTTATACCTATTATAATTGG AGGATTTGGTAATTGATTAGTACCTTTAATACTTGGAGCACCAGATATAGCATTTCCTCG AATAAATAATATAAGTTTTTGATTATTACCTCCTTCCCTTACATTATTATTAGTAAGTAG TATAGTAGAAAATGGAGCTGGAACAGGTTGAACAGTTTACCCTCCTCTTTCTTCTGTGAT TGCTCATGGAGGTGCTTCTGTTGACTTAGCAATTTTTTCTCTTCATTTAGCTGGAATTTCT TCTATTTTAGGGGCTGTAAATTTTATCACAACAGTAATTAATATACGATCTACCGGAATT TCATTCGACCGAATACCTTTATTTGTTTGAGCAGTAGTTCTTACTGCACTACTTCTATTAT TATCTTTACCAGTTTTAGCAGGAGCTATTACTATATTATTAACAGATCGAAATTTAAATA CTTCATTCTTTGACCCAGCTGGAGGAGGAGACCCTATTTTATACCAACATTTATTT

　　E.3.6 序列比对

　　将测序序列进行拼接 , 并 去 除 两 端 引 物 序 列 后 与 E. 3. 5 中 地 中 海 实 蝇 DNA 条 形 码 参 考 序 列 或GeneBank数据库中序列(登录号 :GQ154188)进行同源性比对 。

　　E.4 实时荧光 PCR方法

　　E.4. 1 引物及探针

　　采用地中海实蝇线粒体 COI基因的特异性引物进行扩增 , 上游引物及序列为 Ccap2F(5'-GCTG- TAAATTTTATCACAACA-3') ,下游引物及序列为 Ccap3R(5'-GTGCAGTAAGAACTACTG-3') ,探针及序列为 Ccap2P-probe(5'-(FAM)-CGGAATTTCATTCGACCGAATACCT-(BHQ-1)-3') (Dhami等 ,2016) 。

　　E.4.2 实时荧光 PCR扩增

　　反应体系(20μL) :2×TaqMan real-timePCR MasterMix 10.0 μL,上下游引物和探针(10μmol/L)各0. 5 μL,DNA模板(10ng/μL~ 100 ng/μL)1. 0 μL,ddH2 O 补足反应总体积为 20 μL(反应体系中各试剂的量可根据采用的商业化试剂盒的具体情况进行调整) 。

　　PCR 扩增反应条件 :95℃ 3 min;95℃ 15 s,60℃ 60 s,40个循环(当使用不同仪器和试剂时 ,可根据要求将反应参数作适当调整) 。

　　上述反应中应同时设置对照 , 以地中海实蝇的 DNA 作为阳性对照 , 以不含地中海实蝇的 DNA 作

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　　为阴性对照 , 以 ddH2 O作为空白对照 。

　　E.4.3 实时荧光 PCR扩增结果判定

　　在阳性对照 、阴性对照 、空白对照正常的情况 ,则有如下判定 :

　　— 样品无 Ct值或不具典型扩增曲线 ,判定为阴性 ;

　　— 样品 Ct值 ≤35. 0,且出现典型的扩增曲线 ,判定为阳性 ;

　　— 样品 Ct值在 35. 0~40. 0 之间 ,应重新提取样品 DNA进行扩增检测 ,若 Ct值 ≤35. 0 或者无 Ct值 ,判定同上 ;若检测结果 Ct值仍然 在 35. 0~ 40. 0 之 间 , 则 应 进 行 形 态 鉴 定 或 DNA 条 形 码鉴定 。

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　　参 考 文 献

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