T/ZNZ 391-2025 黄酒中9种生物胺的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS 67.160.10 CCS X 62

T/ZNZ

浙江 省农 产品 质量 安全 学会 团体 标准

T/ZNZ 391—2025

黄酒中 9 种生物胺的测定

液相色谱-串联质谱法

Determination of 9 biogenic amines in Huangjiu—

Liquid chromatography—tandem mass spectrometry method

2025-11-06 发布 2025-12-06 实施

浙江省农产品 质量 安全 学会发 布

前言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。

本文件起草单位：浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所、绍兴市农业科学研究院、绿城农科检测技术有限公司、会稽山绍兴酒股份有限公司。

本文件主要起草人：胡桂仙、孙素玲、王森、章虎、倪娟桢、傅博、孙国昌、张玉、李雪、王昊、赖爱萍、智永祺、杨翊、徐嘉莹。

I

黄酒中 9 种生物胺的测定液相色谱-串联质谱法

1 范围

本文件规定了以糯米为原料酿制的黄酒中9种生物胺(腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、2-苯乙胺、亚精胺、色胺、精胺)的液相色谱-串联质谱的测定方法。

本文件适用于以糯米为原料酿制的黄酒中9种生物胺(腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、2-苯乙胺、亚精胺、色胺、精胺)的定性定量分析。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理

样品经混匀、净化，用甲酸水溶液稀释，样品中生物胺使用配电喷雾离子源的液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5 试剂和材料

5.1 试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯试剂，实验室用水符合GB/T 6682中一级水的规定。

5.1.1 甲酸(HCOOH)：色谱纯。

5.1.2 乙腈(CH3CN)：色谱纯。

5.1.3 移液管：5 mL。

5.1.4 离心管：10 mL。

5.1.5 尼龙微孔滤膜：0.22 μm，或相当者。

5.1.6 亲水亲脂平衡聚合物柱(PRiME HLB固相萃取柱)：200 mg，6 mL或相当者。

5.2 溶液配制

5.2.1 0. 1%甲酸水溶液(现配现用)：准确吸取1mL甲酸(5.1.1)加水定容至1000 mL容量瓶中，混匀。

5.2.2 0.2%甲酸水溶液(现配现用)：准确吸取2 mL甲酸(5.1.1)加水定容至1000 mL容量瓶中，混匀。

1

5.3 标准品

9种生物胺标准物质，见附录A，纯度≥97%。

5.4 标准溶液制备

5.4.1 标准储备液(1000 mg/L)：分别准确称取10 mg(精确到0.1 mg)标准物质(5.3)，用乙腈(5.1.2)溶解并定容到10 mL，避光-18 ℃及以下条件保存，有效期6个月。

5.4.2 混合标准溶液(10 mg/L)：分别移取适量的标准储备液(5.4. 1)于容量瓶中，用乙腈(5.1.2)定容至刻度，避光-18 ℃及以下条件保存，有效期3个月。

5.4.3 混合标准工作液：准确移取适量的混合标准溶液(5.4.2)，用0. 1%甲酸水溶液(5.2.1)配制成浓度系列为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.050 mg/L、0.200 mg/L、0.400 mg/L的混合标准工作溶液，现配现用。

6 仪器和设备

6.1 液相色谱三重四极杆质谱联用仪：配电喷雾离子源。

6.2 分析天平：感量 0.01 mg。

6.3 固相萃取装置。

6.4 涡旋混合器。

7 分析步骤

7.1 试样净化

将黄酒试样混匀，准确量取5.0 mL样品，过PRiME HLB固相萃取柱(5.1.6)，取0.5 mL滤出液，用0. 1%甲酸水溶液(5.2.1)稀释至10 mL，取1mL稀释液过0.22 μm尼龙微孔滤膜(5.1.5)，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.2 仪器条件

7.2.1 液相色谱参考条件

7.2.1.1 色谱柱：SIELC Obelisc R (2.1 mmx150 mm，5 μm)，或性能相当的分析柱;

7.2.1.2 柱温：35 ℃ ;

7.2.1.3 进样量：2 μL;

7.2.1.4 流速：0.25 mL/min;

7.2.1.5 流动相：A 相为 0.2%甲酸水，B 相为乙腈(5.1.2)，梯度洗脱程序见表 1。

表1 梯度洗脱程序

时间/min

流动相 A/%

流动相 B/%

0

90

10

2.50

100

4.10

2

7.00

7.2.2 质谱参考条件

7.2.2.1 离子源： 电喷雾离子源;

7.2.2.2 离子扫描方式：正离子扫描;

7.2.2.3 离子源温度：300 ℃ ;

7.2.2.4 毛细管电压：4 KV;

7.2.2.5 雾化气流速：3 L/min;

7.2.2.6 脱溶剂干燥气流速：氮气 10 L/min;

7.2.2.7 监测方式：多反应监测MRM。

7.2.2.8 定性离子对、定量离子对及碰撞能量参考值见表2。

表2 9种生物胺定性离子对、定量离子对和碰撞能量参考值

化合物

定性离子对/(m/z)

定量离子对/(m/z)

碰撞能量/eV

腐胺

89.0>72.1

-12

89.0>55.1

-21

尸胺

103.2>86.2

-13

103.2>69.2

-20

组胺

112.2>95.1

-15

112.2>68.1

-23

章鱼胺

154.2>91.2

154.2>107.1

-27

酪胺

138.2>121.1

-14

138.2>77.1

-29

2-苯乙胺

122.0>105.0

122.0>77.0

-28

亚精胺

146.3>72.3

-16

146.3>84.2

-22

色胺

161.1>144.0

161.1>127.0

-25

精胺

203.3>112.1

-19

203.3>129.1

3

7.3 定性与定量测定

7.3.1 定性测定

在相同测试条件下，试样中各生物胺的保留时间与标准溶液中各生物胺的保留时间相对偏差应在± 2.5%以内;且试样中生物胺定性离子对的相对离子丰度与浓度相当的标准溶液中生物胺对应的定性离子对的相对离子丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，可判定为试样中存在对应的待测物。

表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度(%)

>50

20~50

10~20(含)

<10

最大允许偏差(%)

±20

±25

±30

±50

7.3.2 定量测定

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法以色谱峰面积定量。标准溶液及试样溶液中生物胺响应值均应在仪器检测的线性范围内;超过或低于线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释或浓缩再进行分析。在上述色谱-质谱条件下，各生物胺标准溶液特征离子对质量色谱图见附录B。

7.3.3 空白实验

用水代替试样，采用完全相同的测定步骤进行操作。

7.3.4 平行实验

采用完全相同的测定步骤对同一试样进行平行试验测定。

8 结果计算和表述

试样中的生物胺含量按式(1)计算。

式中：

⑴——试样中生物胺含量，单位为毫克每升(mg/L);

p——样液中的生物胺浓度，单位为毫克每升(mg/L);

p0 ——空白试验中的生物胺浓度，单位为毫克每升(mg/L);

V1 ——吸取滤液体积，单位为(mL);

V2 ——稀释液总体积，单位为(mL)。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

9 检出限和定量限

9.1 检出限

本方法中2-苯乙胺、色胺的检出限为0.03mg/L，其他7种生物胺的检出限均为0.06mg/L。

9.2 定量限

本方法中2-苯乙胺、色胺的定量限为0.1mg/L，其他7种生物胺的定量限均为0.2mg/L。

10 精密度

4

在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的10%。

5

附录 A

(资料性)

标准物质中英文通用名称、化学分子式和 CAS 号标准物质中英文通用名称、化学分子式和 CAS 号见表 A. 1。

表 A.1 标准物质中英文通用名称、化学分子式和 CAS 号

中文名称

英文名称

化学分子式

CAS号

相对分子量

Tryptamine

C10H12N2

61-54-1

160.22

2-Phenethylamine

C8H11N

64-04-0

121.18

尸胺(1,5-戊二胺)

1,5-Pentanediamine

C5H14N2

462-94-2

102.18

腐胺(1,4-丁二胺)

1,4-Butanediamine

C4H12N2

110-60- 1

88.15

Histamine

C5H9N3

51-45-6

111.15

Octopamine

C8H11NO2

104- 14-3

153.18

Spermine

C10H26N4

71-44-3

202.34

Spermidine

C7H19N3

124-20-9

145.25

Tyramine

C8H11NO

51-67-2

137.18

6

附录 B

9种生物胺标准溶液特征离子对质量色谱图

9种生物胺标准溶液的特征离子对质量色谱图见图B. 1。

图 B.19 种生物胺标准溶液(浓度均为0.2 mg/L)特征离子对质量色谱图(第 1 页/共2 页)

7

图B.1 9种生物胺标准溶液(浓度均为0.2 mg/L)特征离子对质量色谱图(第2页/共2页)

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