DB43/T 3128-2024 饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵技术规程

以下为湖南省地方标准《饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵技术规程》（DB 43/T 3128-2024）的详细内容总结：

​​一、标准框架​​

1. ​​范围​​

   • 规定富铁酿酒酵母菌液体发酵的工艺、质量检测及档案管理要求。
   • 适用于饲用富铁酿酒酵母菌的工业化液体发酵生产。

2. ​​规范性引用文件​​
   关键引用标准包括：

   • GB 4789.15（酵母菌计数）
   • GB/T 13091（沙门氏菌检验）
   • GB/T 13092（霉菌检验）
   • GB/T 13885（铁含量测定）

3. ​​术语和定义​​

   • 无特殊术语界定。

​​二、核心工艺技术​​

​​4.1 工艺流程​​

菌种保藏 → 活化 → 液体菌种制备 → 发酵罐菌种制作 → 发酵培养 → 终止发酵

​​4.2 菌种保藏与活化​​

• ​​保藏​​：-80℃超低温冰箱，30%甘油管保存。
• ​​活化​​：
  • 麦芽汁琼脂平板划线（配方：麦芽浸粉20g、蛋白胨1g、葡萄糖20g、琼脂15g/L）。
  • 28℃培养24h，重复划线纯化2~3次。
  • 斜面培养24h后冷藏备用。

​​4.3 液体菌种制备（摇瓶阶段）​​

• ​​培养基​​：麦芽浸粉20g、蛋白胨1g、葡萄糖20g、氯霉素0.1g/L（抑菌）。
• ​​灭菌​​：121~126℃、0.14~0.16 MPa灭菌30分钟。
• ​​培养​​：接种2~3环菌种，28~30℃、180~220 r/min振荡培养24h。

​​4.4 发酵罐液体菌种制作​​

1. ​​设备准备​​：
   • 发酵罐及管道清洗后，用pH 9.0 NaOH溶液浸泡2h，蒸汽煮沸。
   • ​​空消​​：121℃、0.14~0.16 MPa灭菌30分钟，冷却至28℃。
2. ​​培养基配方​​（关键富铁设计）：

   蔗糖50g、尿素4g、酵母膏24g、KH₂PO₄ 2.5g、  MgSO₄·7H₂O 0.5g、FeSO₄·7H₂O 4.5g/L，pH 4.8  

3. ​​实消​​：
   • 装液量60~70%，121℃灭菌30分钟，冷却至28℃。
4. ​​接种​​：无菌操作，接种量0.5%~1%（V/V）。
5. ​​发酵参数​​：
   • 温度28~32℃ | 罐压0.05 MPa | 通气比1.08
   • 搅拌速度180~220 r/min | 培养时间36~48h
6. ​​终止条件​​：
   • pH ≤ 4.0 且溶氧值（DO）降至0 mg/L。

​​三、质量检测要求​​

1. ​​有效活菌数​​：按GB 4789.15（平板计数法）。
2. ​​Fe²⁺含量​​：按GB/T 13885（原子吸收光谱法）。
3. ​​卫生指标​​：
   • 沙门氏菌：GB/T 13091（不得检出）。
   • 霉菌：GB/T 13092（限值符合饲料卫生标准）。

​​四、档案管理​​

1. ​​记录内容​​（附录A）：
   • 基地信息、培养基配方、灭菌条件、接种参数、发酵实时数据（温度、转速、罐压等）。
2. ​​保存要求​​：
   • 一式两份，生产基地与技术指导单位各存1份。
   • 保存期限≥3年。

​​五、关键工艺特点​​

1. ​​铁强化设计​​：发酵培养基添加4.5g/L FeSO₄·7H₂O，实现酵母富铁。
2. ​​防染菌措施​​：
   • 摇瓶阶段添加氯霉素（0.1g/L）。
   • 发酵罐空消+实消双重灭菌。
3. ​​终止指标​​：pH和DO双参数控制，确保发酵终点精准。

此标准系统规范了从菌种活化到工业化发酵的全流程，强调铁元素强化、过程无菌控制及数据可追溯性，为饲用富铁酵母生产提供技术依据。