资料介绍
中华人民共和国国家计量检定规程
JJG 861—2007
酶标 分析 仪
2007-11-21发布 2008-05-21 实施
国家 质量 监督 检验 检疫 总局 发布
酶标分析仪检定规程Verification Regulation of
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代替 JJG 861—1994
本规程经国家质量监督检验检疫总局于 2007年 11月 21 日批准 , 并自2008年 5月 21 日起施行。
归口 单位 : 全国物理化学计量技术委员会
起草 单位 : 中国计量科学研究院
参加起草单位 : 吉林省计量科学研究院
本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释
本规程主要起草人 :
谢宝民 (中国计量科学研究院)
参加起草人 :
屈媛玉 (吉林省计量科学研究院)
目录
酶标分析仪检定规程
1 范围
本规程适用于酶标分析仪的首次检定、后续检定和使用中检验。酶标分析仪型式评价和样机试验中有关计量性能试验可参照执行。
2 概述
酶标分析仪 (以下简称仪器) 是依据酶标记的免疫复合物与酶的相应底物能够产生显色反应 , 显色程度与被检测样品中待测抗体 (或抗原) 的含量相关 , 根据显色物吸光度值确定待测物质含量 , 不同待测显色物质有其各自的特征吸收谱线 , 并遵守郎伯-比尔 (Lambert-Beer) 定律 , 对待测物质进行定量分析的仪器。Lambert-Beer定律的表达式如下 :
A=-lgT=abc式中 : A— 物质的吸光度 ;
T— 物质的透射比 ;
a— 物质的吸光系数 ;
b— 光路长度 ;
c— 物质的浓度。
仪器主要由光源系统、单色器系统、样品室、检测器等组成。
仪器类别 :
Ⅰ — 单波长/双波长、多通道 ;
Ⅱ — 单波长、单通道 ;
Ⅲ — 波长连续可调式、单通道/多通道。
3 计量性能要求
仪器的计量性能要求如表 1所示。
表 1 仪器计量性能要求
4 通用技术要求
4.1 外观与初步检查
4.1.1 仪器应有下列标志 : 名称、型号、编号、制造厂名、 出厂日期。
4.1.2 仪器应平稳置于水平无震动的工作台上。各调节旋钮、按键和开关均能正常工作。 电缆线的接插件应接触良好。
4.1.3 样品室应密封良好 , 无漏光现象。
4.1.4 指示器应正常工作 , 数字显示清晰、完整。
4.1.5 运动部分应平稳 , 不应有卡滞、突跳及显著的空回。
4.2 绝缘电阻
仪器在不接地的状态下 , 试验电压 500V 时 , 电源进线与壳体之间的绝缘电阻不小于 20 MΩ。
5 计量器具控制
计量器具控制包括首次检定、后续检定和使用中检验。
5.1 检定条件
5.1.1 环境条件
仪器检定时环境条件要求如表 2所示。
表 2 环境条件要求
检定时不得有强气流影响 , 周围不应有易燃、易爆和腐蚀性气体。
5.1.2 检定设备
仪器检定用设备如表 3所示。
表 3 仪器检定用设备
5.1.3 标准物质
5.1.3.1 标准干涉滤光片
有证标准物质证书中峰值波长标称值为 (405, 450, 492 (或 490) , 620 (或 630) ±2) nm 的标准干涉滤光片 , 或在仪器使用波长范围内均匀选取的 4块标准滤光片。
5.1.3.2 光谱中性滤光片
吸光度标称值分别为 0.2, 0.5, 1.0, 1.5 (不确定度 ≤0.01) ②。
5.1.3.3 酶标分析仪用灵敏度溶液标准物质 (不确定度 ≤5%) ②。
5.2 检定项目
表 4 检定项目
5.3 检定方法
5.3.1 外观与初步检查按 4.1 的要求进行。检定前仪器应预热 20 min。
5.3.2 示值稳定性的检定
选用 492 nm 波长或仪器特有的专一波长 , 将吸光度标称值 1.0 的光谱中性滤光片 ,平放在微孔酶标板的空板架上 , 以空气为参比 , 测量并记录仪器的初始示值 , 5 min后记录仪器示值一 次 , 10 min后再 次记 录仪 器示 值。求出 后两 次吸 光度 示值 的最 大值 ,各类仪器按公式 (1) 计算示值稳定性 r:
r=A最大 -A初始 (1)
式中 : A初始和 A最大 — 仪器吸光度初始值和最大值。
5.3.3 波长示值误差和波长重复性的检定
5.3.3.1 对 Ⅲ类仪器 , 用峰值波长为 405, 450, 492, 620 nm 的 4 片标准干涉滤光片或在仪器使用波长范围内均匀选取的 4块标准滤光片 , 分别置于仪器出光孔前或平放在微孔酶标板的某一位置 (标准干涉滤光片平面需与入射光束垂直) , 自短波向长波逐点测出滤光片的波长— 吸光度示值 (例如 : 测量峰值波长 405 nm 标准干涉滤光片时 ,将波长调到低于标准波长 20 nm 即 385 nm, 然后 , 以 1 nm 的改变幅度测量至高于标准
① 标准干涉滤光片需在波长示值误差优于 ±0.5 nm 的分光光度计上定值。
② 应使用经国家计量行政部门批准颁布的标准物质。
波长 20 nm 即 425nm) , 求出相应的峰值波长 λi。重复测量 3次 , 取其平均值。测得波长平均值与标准波长之差为波长示值误差 , 按公式 (2) 计算波长示值误差 Δλ, 其最大值与最小值之差为波长重复性δλ。用同样的方法检定其他 3点。仪器波长示值误差和波长重复性结果的报告 , 应以每个波长 (405, 450, 492, 620 nm) 或仪器特有的专一波长下 , 通过测量、计算得到的波长示值误差和波长重复性给出。
式中 : λi— 第i次波峰测量值 ;
λs— 波长标准值。
δλ =λmax -λmin (3)
式中 : λmax— 测得波长示值的最大值 ;
λmin— 测得波长示值的最小值。
5.3.3.2 对 Ⅰ、 Ⅱ类仪器使用波长示值误差优于 ±0.5nm 的分光光度计检定仪器所附干涉滤光片在各标称波长下的透射比 (干涉滤光片平面需与入射光束垂直) , 绘制波长透射比特性曲线 (如图 1所示)。干涉滤光片峰值波长误差计算公式为 :
Δλ=λm - λ (4)
式中 : λ— 滤光片峰值波长标称值 ;
λm — 峰值透射比 Tm 对应的波长。
图 1 波长透射比特性曲线
5.3.4 吸光度示值误差的检定
5.3.4.1 依次选用 405, 450, 492, 620 nm 波长或仪器特有的专一波长 , 将吸光度标称值分别为 0.2, 0.5, 1.0, 1.5 的四块光谱中性滤光片同时平放在微孔酶标板的空板架上 , 以空气为参比 , 连续测量 3次 , 依次记录仪器示值 , 并计算平均值。
5.3.4.2 对于吸收池固定的仪器 , 先用空吸收池调整仪器零点 , 再将光谱中性滤光片放入样品室中 , 连续测量 3次 , 记录仪器示值 , 并计算平均值。
5.3.4.3 吸光度示值误差 ΔA按公式 (5) 计算 :
式中 : Ai— 第i次测量的吸光度值 ;
As— 吸光度标准值。
仪器吸光度示值误差结果的报告 , 以每个波长 (405, 450, 492, 620 nm) 或仪器特有的专一波长下 , 通过测量、计算得到的吸光度示值误差最大值给出。
5.3.5 吸光度重复性的检定
选用 450 nm 波长或仪器特有的专一波长 , 将吸光度标称值为 0.5 或 1.0 的光谱中性滤光片平放在微孔酶标板的空板架上 , 以空气为参比 , 于固定的某一孔位重复测量 6次 , 记录仪器示值 , 并计算平均值 , 按公式 (6) 计算 RSD值 , 以实验结果的相对标准偏差值 (RSD值) 表示仪器的吸光度重复性 :
式中 : xi— 第 i次测量的结果 ;
x—n次测量结果的吸光度平均值 ;
n— 测量次数。
5.3.6 灵敏度的检定
选用 450 nm 波长或仪器特有的专一波长 , 使用量程适合并经检定合格的 A级加样器 , 在未包被抗原或抗体的微孔酶标板的某一孔中加入 350 μL浓度值为 5 mg/L的酶标分析仪用灵敏度溶液标准物质 , 测量吸光度值。
5.3.7 通道差异的检定
对 Ⅰ、 Ⅲ类仪器 , 选用 450 nm 波长 或仪 器特 有的 专一 波长 , 将吸 光度 标称 值为
1.0 的光谱中性滤光片平放在微孔酶标板 的空 板架 上 , 先后 置于 多个 通道 的相 应位 置(例如 : 对于 8通道仪器可从 A1~ H1或 A2~ H2作为起始位置) , 以空气为参比 , 测量并记录每一通道的至少 6次吸光度值 (例如 A 通道可测量 A1~A6或 A2~A7) , 多个通道的差异结果报告用全部测量数据的极差值表示 , 按公式 (7) 计算通道差异 δA :
δA =Amax -Amin (7)
式中 : Amax— 多个通道中测量结果的吸光度最大值 ;
Amin— 多个通道中测量结果的吸光度最小值 ; δA— 通道差异。
5.3.8 绝缘电阻的检定
用 500V兆欧表 , 测量仪器电源进线端与机壳 (或接地端子) 间的绝缘电阻。
5.4 检定结果的处理
5.4.1 以上检定的各项数据均需记录在检定记录纸上 , 其中有关项目 的结果应填写完整或注明在检定证书或检定结果通知书上。
5.4.2 按本规程检定合格的仪器 , 发给检定证书 ; 不合格的仪器 , 发给检定结果通知书 , 并注明不合格项目的数据。
5.5 检定周期
检定周期一般不超过 1年 , 在此期间仪器经修理或对测量结果有疑问时 , 应及时检定。
附录 A
酶标仪灵敏度溶液标准物质制备方法
酶标仪灵敏度溶液标准物质采用重铬酸钾纯物质配制成质量浓度为 5 mg/L的溶液标准物质 , 以 0.05 mol/L硫酸为基体。
A.1 0.05 mol/L硫酸溶液的配制
在 500 mL烧杯中加入 400 mL蒸馏水 , 用移液管吸取 2.7 mL浓硫酸加入烧杯中 ,搅拌均匀后放入 1000 mL容量瓶中 , 用蒸馏水稀释至刻度线 , 摇匀备用。
A.2 含铬量 5 mg/L重铬酸钾溶液标准物质的配制
A.2.1 在分析天平上准确称取 0.2829g重铬酸钾 , 置于 100mL烧杯中 , 用0.05 mol/L硫酸溶液溶解后 , 移入 500 mL容量瓶中 , 用少量 0.05 mol/L硫酸溶液洗烧杯若干次 ,洗液放入容量瓶中 , 用 0.05 mol/L硫酸溶液稀释至刻度线 , 摇匀备用 , 此溶液浓度为200 mg/L。
A.2.2 用移液管吸取质量浓度为 200mg/L的重铬酸钾溶液 2.5 mL放入 100mL容量瓶中 , 用 0.05 mol/L硫酸溶液稀释至刻度线 , 摇匀 , 此溶液质量浓度为 5 mg/L, 即检定酶标仪灵敏度的溶液标准物质。
附录 B
检定记录格式
一、外观 :
二、示值稳定性 :
三、波长示值误差和波长重复性 :
四、吸光度示值误差 :
表 (续)
五、吸光度重复性 :
六、灵敏度 : L/mg
七、通道差异 :
八、绝缘电阻 : MΩ
附录 C
检定证书内页格式
