GB/T 18397-2014 预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法

　　ICS 65. 120 B 46

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 18397—2014代替 GB/T 18397—2001

　　预混合饲料中泛酸的测定

　　高效液相色谱法

　　Determination ofpantothenicacid in premix—

　　High performanceliquid chromatography

　　2014-07-08发布 2015-01-10实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　发

　　布

　　中 华 人 民 共 和 国

　　国 家 标 准

　　预混合饲料中泛酸的测定

　　高效液相色谱法

　　GB/T 18397—2014

　　*

　　中 国 标 准 出 版 社 出 版 发 行

　　北京市朝阳区和平里西街甲 2 号(100029)

　　北京市西城区三里河北街 16号(100045)

　　网址:www. gb168. cn

　　服务热线 :400-168-0010

　　010-68522006

　　2014年 11月第一版

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　　书号 : 155066 · 1-50142

　　版权专有 侵权必究

　　GB/T 18397—2014

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1. 1—2009给出的规则起草 。

　　本标准代替 GB/T 18397—2001《复合预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》。

　　本标准与 GB/T 18397—2001相比主要变化如下 :

　　— 标准名称由《复合预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》改为《预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》;

　　— 范围中删除了 “也 适 用 于 浓 缩 饲 料 中 泛 酸 的 测 定 ”; 将 “测 量 范 围 为 每 千 克 样 品 中 含 泛 酸 在50 mg以上 ”修改为“本标准测定泛酸的检出限为 5 mg/kg,定量限为 20 mg/kg”;

　　— 样品提取剂不加 EDTA,直接采用流动相进行提取 ;

　　— 流动相用乙腈与 0. 05%磷酸溶液的混合液代替磷酸缓冲液 ;

　　— 结果计算中 ,用外标法多点校正或单点校正代替原来的 “单点校正 ”。

　　本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归 口 。

　　本标准起草单位 :江西省兽药饲料监察所 、通威股份有限公司 。

　　本标准主要起草人 :符金华 、杨发树 、文虹 、饶辉 、刘耀敏 、张凤枰 、樊晶 、赵艳 。

　　本标准所代替标准的历次版本发布情况为 :

　　—GB/T 18397—2001。

　　预混合饲料中泛酸的测定

　　高效液相色谱法

　　1 范围

　　本标准规定了用高效液相色谱仪测定预混合饲料中泛酸含量的方法 。

　　本标准适用于复合预混合饲料 、维生素预混合饲料中泛酸的测定 。

　　本标准测定泛酸的检出限为 5 mg/kg,定量限为 20 mg/kg。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注 日期的引用文件 ,仅注 日期的版本适用于本文件 。凡是不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 14699. 1 饲料 采样

　　3 原理

　　试样中的泛酸经乙腈磷 酸 水 溶 液 提 取 , 离 心 , 过 滤 , 用 C18 色 谱 柱 分 离 , 紫 外 检 测 器 检 测 , 外 标 法定量 。

　　4 试剂和溶液

　　除特殊注明外 ,本标准所使用试剂均为分析纯 ,水符合 GB/T 6682中规定的二级用水 。

　　4. 1 磷酸 :含量 ≥85% 。

　　4.2 乙腈 :色谱纯 。

　　4.3 0. 05%磷酸溶液 :将 0. 5 mL磷酸(4. 1)加入容量瓶中 ,并定容至 1 000 mL。

　　4.4 D-泛酸(或 D-泛酸钙)标准溶液 。

　　4.4. 1 标准贮备液 :准确称取纯度大于 99. 0%的 D-泛酸或 D-泛酸钙标准纯品适量于 100 mL容量瓶中 ,用流动相溶解 ,定容 ,使该标准贮备液的浓度含泛酸为 1 000 μg/mL。此标准溶液在 4 ℃可保存三

　　。-泛:.。备液(4. 4. 1)0. 5 mL, 1. 0 mL, 2. 0 mL, 5. 0 mL, 10. 0 mL 于

　　100 mL容 量 瓶 中 , 用 流 动 相 定 容 至 刻 度 , 得 到 浓 度 分 别 为 5. 0 μg/mL, 10. 0 μg/mL, 20. 0 μg/mL, 50. 0 μg/mL,100. 0 μg/mL 的泛酸标准工作液 。现用现配 。

　　5 仪器和设备

　　5. 1 分析天平 :感量 0. 000 1 g。

　　5.2 离心机 :转速 3 000 r/min。

　　5.3 摇床 。

　　GB/T 18397—2014

　　5.4 超声波清洗器 。

　　5.5 样品筛 :孔径 0. 28 mm。

　　5.6 高效液相色谱仪 ,配有紫外检测器(或二极管矩阵检测器) 。

　　6 试样的制备

　　按 GB/T 14699. 1规定 ,取有代表性饲料样品至少 500 g,四分法缩减至少 100 g,磨碎 ,过 0. 28 mm孔径样品筛 ,混匀装入密闭容器中 ,避光低温保存备用 。

　　7 分析步骤

　　7. 1 提取

　　称取维生素预混合饲料 0. 25 g~0. 5 g,复合预混合饲料 1 g~ 2 g,精确至 0. 000 1 g,置于 150 mL具塞锥形瓶中 。准确加入 50mL流动相 ,于超声波水浴提取 15min,或置于摇床上振摇提取 20min,静置 。取适量溶液 3 000 r/min离心 5 min,离心后上清液经过 0. 45 μm 滤膜过滤 ,滤液供高效液相色谱仪分析用 。

　　7.2 测定

　　7.2. 1 液相色谱参考条件

　　色谱柱 :C18柱 ,柱长 150 mm , 内径 4. 6 mm ,粒度 5 μm ,或具有相同性能的色谱柱 ;

　　流动相 :将 50 mL 的乙腈加入到 950 mL磷酸溶液(4. 3)中混匀 ;

　　流速 :1. 0 mL/min;

　　进样量 :10 μL;

　　柱温 :30 ℃ ;

　　检测器 :紫外检测器(或二极管矩阵检测器 PDA)使用波长 200 nm。

　　7.2.2 液相色谱测定

　　分别取适量的标准工作液(4. 4. 2)和试样溶液(7. 1) ,按 7. 2. 1 列出的条件进行液相色谱分析测定 。按照保留时间进行定性 , 以标准工作液作单点或多点校准 ,并用色谱峰面积定量 。待测样液中泛酸的响应值应在标准曲线范围内 ,超过线性范围则应稀释后再进样分析 。泛酸色谱图参见附录 A。

　　8 结果计算与表示

　　8. 1 结果计算

　　试样中泛酸的含量(X) , 以质量分数表示 ,按式(1)计算 。

　　X ……………………………( 1 )

　　式中 :

　　X — 试样中泛酸的含量 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　c — 试样溶液中泛酸的质量浓度 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;

　　V — 提取时加入的流动相总体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　m — 试样质量 ,单位为克(g) ;

　　n — 稀释倍数 。

　　8.2 结果表示

　　测定结果用平行测定的算术平均值表示 ,计算结果保留三位有效数字 。

　　9 重复性

　　在重复性条件下获得的两次独立测试结果的相对偏差不大于 10% 。

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　泛酸色谱图

　　泛酸色谱图见图 A. 1。

　　图 A. 1 20μg/mL 泛酸色谱图

　　版权专有 侵权必究

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