GB/T 21826-2025 化学品 急性经口毒性试验方法 上下增减剂量法（UDP）

　　ICS 13.300 CCS A 80

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 21826—2025代替 GB/T21826—2008

　　化学品 急性经口毒性试验方法

　　上下增减剂量法(UDP)

　　Chemicals—Testmethod ofacuteoraltoxicity—

　　Up-and-down-procedure(UDP)

　　2025-10-05发布 2026-02-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 21826—2025

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　引言 Ⅳ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 1

　　4 试验原则 2

　　4. 1 一般原则 2

　　4. 2 限度试验原理 2

　　4. 3 正式试验原理 3

　　5 试验方法 3

　　5. 1 试验动物 3

　　5. 2 受试物配制 3

　　5. 3 试验步骤 4

　　5. 4 观察 6

　　6 数据和报告 6

　　6. 1 数据 6

　　6. 2 正式试验 LD50计算 7

　　6. 3 置信区间的估算 8

　　6. 4 试验报告 8

　　附录 A (规范性) 2 000 mg/kg剂量的分类要求 10

　　A. 1 LD50大于 2 000 mg/kg无需试验的受试物的分类标准 10

　　A. 2 大于 2 000 mg/kg剂量 10

　　附录 B (资料性) 染毒过程 11

　　B. 1 主要试验的染毒剂量序列的设计原则 11

　　B. 2 主要试验的染毒剂量序列 11

　　附录 C (资料性) 似然比终止规则的估算 13

　　参考文献 21

　　Ⅰ

　　GB/T 21826—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件代替 GB/T 21826—2008《化学品 急性经口毒性试验方法 上下增减剂量法(UDP)》, 与GB/T 21826—2008相比 ,除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　a) 更改了动物选择的要求(见 5. 1. 1. 1,2008年版的 5. 1. 1. 1) ;

　　b) 更改了饲养条件(见 5. 1. 2,2008年版的 5. 1. 2) ;

　　c) 更改了 2 000 mg/kg剂量的分类要求(见附录 A,2008年版的附录 C) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归 口 。

　　本文件起草单位 :深圳海关工业品检测技术中心 、宁波检验检疫科学技术研究院(宁波国际贸易便利化服务中心) 、宁波海关技术中心 。

　　本文件主要起草人 :吴景 武 、禹 伟 腾 、刘 冬 、孙 运 、陈 俊 彬 、吴 树 颖 、张 孝 先 、卢 瑜 、刘 汉 伟 、李 滢 舟 、冯均利 、陈有为 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　— 2008年首次发布为 GB/T 21826—2008;

　　— 本次为第一次修订 。

　　Ⅲ

　　GB/T 21826—2025

　　引 言

　　上下增减剂量法最初是由 Dixon和 Mood 提出 。 1985年 ,Bruce建议使用上下增减剂量法(UDP)测定化学品的急性毒性 。上下增减剂量法中估算 LD50 的实验设计有几次变更 。本文件是基于 Bruce提 出 的 测 试 方 法 , 该 测 试 方 法 于 1987 年 被 美 国 材 料 实 验 协 会 ( American Society of Testing Materials,ASTM)采纳 ,并于 1990年进行了修订 。在 1995年发表了使用 UDP、传统 LD50测试方法和固定剂量法三种方法得到的研究结果 。从 Dixon和 Mood早期的论文开始 ,很多使用这些方法进行条件优化的研究相继出现在生物和应用论文里 。 1999年举行的多次专家会议对该方法给予如下建议 : 国际上在统一使用 LD50对化学品进行分级的问题上已达成共识 ; 一般认为对模式生物的一种性别(通常是雌性)进行测试就足够了 ;为了使估计值更有意义 ,需估算出置信区间(CI) 。

　　Ⅳ

　　GB/T 21826—2025

　　化学品 急性经口毒性试验方法

　　上下增减剂量法(UDP)

　　1 范围

　　本文件描述了化学品急性经口毒性试验方法的上下增减剂量法(UDP) 。

　　本文件适用于使用 UDP对化学品急性经口毒性进行试验 。本方法更适用于染毒后一天或两天内就引起死亡的物质 。

　　本文件不适用于染毒后可能造成预期死亡时间显著延迟(5天或以上)的物质 。

　　2 规范性引用文件

　　本文件没有规范性引用文件 。

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　3. 1

　　剂量 dose

　　给予实验动物受试物的量 。

　　注 : 以质量(g或 mg)来表示 ,或以每单位体重试验动物所接受的受试物质量来表示(如 mg/kg) 。

　　3.2

　　剂量级数因子 doseprogression factor

　　当一只动物存活时 ,下一只动物剂量增加(即剂量级数)的倍数 ; 或当一只动物死亡时 ,下一只动物剂量减少的除数 。

　　注 : 又称剂量间距因子 。剂量级数因子建议为 1/(剂量-效 应 曲 线 的 斜 率 估 值) 的 反 对 数 。 默 认 的 剂 量 级 数 因 子 为

　　3. 2, 即 0. 5 或 1/2的反对数 。

　　3.3

　　限度剂量 limitdose

　　受试物给予的剂量上限 。

　　注 : 2 000 mg/kg或 5 000 mg/kg。

　　3.4

　　名义试验动物量 nominalsamplesize

　　试验动物的总数量按以下规则之一减去一定量的动物数 :

　　— 减去染毒序列开始时出现相同反应的最后一只动物之前的受试动物数量 ;

　　— 减去第一次发生逆转的一对动物之前受试动物的数量 。

　　示例 1: 一个序列的模式为“OOOXXOXO”(X表示死亡 ,O 表示存活) ,则此时受试动物的总数量(或常规意义的样本量)为 8,名义试验动物量为 6。

　　注 : 在这个例子中 ,发生逆转之后有 4 只动物 。注意本 文 件 其 他 章 条 中 的 “数 量 ”是 指 名 义 试 验 动 物 量 还 是 试 验 动物总数 。

　　示例 2: 最大试验动物数量是 15。 当以最大试验动物数量终止试验时 ,名义试验动物量 将 小 于 或 等 于 15。名 义 试验动物量是从第(r-1)个动物开始(出现逆转对的第 2 只动物前的那一只 ,见 3. 5) 。

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　　3.5

　　逆转 reversal

　　某个染毒剂量下没有观测出试验动物的毒性效应 ,在下一个染毒剂量下试验动物表现出效应 ;反之亦然(也就是前一个动物表现出效应 ,后一个动物无效应) 。

　　注 1: 逆转是由一对试验动物组成 。

　　注 2: 发生第一次逆转的动物以“r-1”和“r”编号 。

　　3.6

　　斜率 slope

　　剂量-效应曲线 dose-responsecurve

　　剂量-效应曲线与剂量主轴所形成的角度值 。

　　注 : 如果以概率作为度量尺度与染毒剂量对数进行概率分析时是正态分布 ,那么剂量-效应曲线将会是一条直线 ,且斜率是 σ(试验动物染毒承受力的标准偏差) 。

　　3.7

　　终止规则 stopping rule

　　通过比率与临界值的比较结果来决定是否终止试验 。

　　注 1: 本文件中所用的终止规则在以下情况是同义的 :

　　— 一个具体的终止判定依据 ;

　　— 用来确定测试序列何时终止的规则的汇集 。

　　注 2: 进行正式试验时 ,终止规则作为一个快速判定依据使用 。

　　4 试验原则

　　4. 1 一般原则

　　4. 1. 1 试验之前需综合考虑可获得的受试物所有可用信息 ,包括受试物的名称和化学结构 , 物理化学性质 ,受试物的任何体外或体内毒性试验结果 ;结构相似物质或混合物的毒理学数据 , 以及受试物的预期用途 。这些信息有助于推断毒性试验在人体健康和环境保护方面的相关性 ,也有助于选择合适的起始剂量 。

　　4. 1.2 本方法允许使用置信区间对 LD50进行评估 ,依据 GB 30000. 18给出的化学品分类和试验结果对具有急性毒性的物质进行定级和分类 。

　　4. 1.3 计算机模拟结果表明 , 当无数据可用于 LD50和剂量-效应曲线斜率的初步估算时 , 以 175 mg/kg剂量附近开始 ,利用剂量的半对数单位[对应剂量级数因子(3. 2)]估算 , 可以得到最好的结果 。 如果受试物是高毒性 ,则需要对该起始剂量进行修正 。采用半对数间距可以更高效地使用动物 ,也可以增加预测 LD50 的准确性 。 由于本方法对起始剂量有偏差 ,故初始剂量的选取需要低于 LD50 的估值 。然而 , 与其他急性毒性测试方法相似 ,对可变性大的受试物(即剂量-效应曲线斜率小)致死剂量的估算还是会引入偏差 ,且 LD50会有一个大的统计误差 。 针对估算值的特性 ,本文件在主要试验部分介绍了一项停止规则以对其进行校正(见 5. 3. 2. 3. 3) 。计算机可确立试验顺序并提供估值 ,这简化了逐个动物间的计算 。

　　4. 1.4 如果已知受试物在某个剂量下因腐蚀或严重刺激而导致明显疼痛 ,则不需要对其进行试验 。濒临死亡的动物 、明显疼痛的动物或表现出严重且持久痛苦的动物 ,予以人道处死 ,在分析试验结果时将其视为于试验中死亡的动物 。

　　4. 1.5 限度试验可有效识别可能具有低毒性的化学品 。

　　4.2 限度试验原理

　　限度试验是一种序贯试验 ,最多使用 5 只动物 。试验剂量通常为 2 000 mg/kg,在特殊情况下可使

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　　用 5 000 mg/kg。2 000 mg/kg和 5 000 mg/kg的试验程序略有不同(见 5. 3. 2. 1. 1 和 5. 3. 2. 1. 2) 。序贯试验可提高统计功效 ,并使试验程序偏向于拒绝 LD50接近限度剂量的受试物 , 即更倾向于确保安全性 。与任何限度试验方案一样 , 当受试物的实际 LD50接近限度剂量时 ,正确分类受试物的概率会降低 。

　　4.3 正式试验原理

　　4.3. 1 正式试验是由一个单一次序的剂量级数组成 ,一次使用一只动物 ,每次至少要间隔 48 h。按照低于最佳估算 LD50一级的剂量给第一只动物染毒 。如果试验动物存活 ,便使用最初剂量 3. 2 倍的剂量给第二只动物染毒 ;如果第一只试验动物死亡 ,第二只动物就要接受较低的剂量 ,剂量级数同上面相似(3. 2是一个默认的剂量级数因子 ,对应于一个半对数单位的剂量级数 , 5. 3. 2. 3. 2 提供了剂量级数因子的选择) 。对每只动物都需要认真观察至 48 h 后 ,才能决定是否对下一只动物染毒及确定染毒剂量 。该决定取决于 48h观察期满时动物的生存状况(见 5. 3. 2. 3. 1 和 5. 3. 2. 3. 5 中剂量间隔的选择) 。使用停止原则可以使试验动物数量维持在较低水平(见 5. 3. 2. 3. 4) ,调整染毒剂量模式可以降低较差的起始剂量值或较低的斜率造成的影响 。 当满足这些停止原则时 ,停止染毒(见 5. 3. 2. 3. 3 和 6. 2. 1) ,这时 ,基于终止时所有动物的试验情况 ,就可以对 LD50 和置信区间进行评估 。 在大多数情况下 , 动物实验结果中出现第一对逆转后 ,试验仅需 4 只动物就可完成 。采用最大似然法对 LD50进行计算(见 6. 2. 1 和 6. 2. 3) 。

　　4.3.2 计算的过程以主要试验得到的结果作为起点,给出一个可信的置信区间评估 。置信区间的介绍见 6. 3. 1。

　　5 试验方法

　　5. 1 试验动物

　　5. 1. 1 动物选择

　　5. 1. 1. 1 啮齿类动物首选大鼠 ,但也可选用其他啮齿类动物 。通常选用雌性大鼠 , 因为在传统 LD50试验相关的文献中 ,性别间的敏感性几乎不存在差异 ; 即使观测出性别差异 ,雌性大鼠通常也是较敏感的 。但是 ,若结构特性相关化学品的毒理学或毒代动力学数据显示雄性动物可能更敏感 ,则应选用雄性动物进行试验 。 当用雄性动物做试验时 ,应提供充分的理由 。

　　5. 1. 1.2 试验应选用年轻的健康成年动物 ,雌性动物应非经产 、未受孕 。在试验开始时 ,每只动物应在8周龄 ~ 12周龄 ,其体重差异不应超过试验前试验动物平均体重的 20% 。

　　5. 1.2 饲养条件

　　动物房的温度应控制在 22 ℃ ( ±3 ℃) 。动物房清洁期间除外 ,相对湿度应控制在 30% ~ 70% ,最好控制在 50% ~ 60% 。应釆用人工照明 ,保持 12h光照和 12h黑暗交替 。染毒 48h后 ,除非同笼动物接触会因毒性反应增加动物应激反应 ,否则动物不应单笼饲养 , 即使单笼饲养 , 出于动物福利的考虑 ,宜适时减少单 笼 饲 养 时 长 。 采 用 常 规 啮 齿 类 动 物 饲 料 喂 食 , 自 由 饮 水 。 试 验 动 物 的 环 境 与 设 施 参 照GB 14925的要求准备 。

　　5. 1.3 动物准备

　　随机选择动物并进行标号 , 以便于个体识别 ,染毒前至少提前 5 d将动物置于试验笼中饲养 ,使其适应试验条件 。如果进行连续的试验 ,应确保整个研究中动物体重和周龄的适用性 。

　　5.2 受试物配制

　　一般情况下 ,不同剂量应使用相同的受试物给予体积 ,通过调节受试物浓度配制所需剂量的试验溶

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　　液 ,但如果受试物是液体或混合物 ,应使用不稀释的受试物(即恒定浓度) , 因其既适用于后续的风险评估 ,又满足一些监管机构的要求 。在任何情况下 ,都不能超过最大染毒体积 。液体的每次最大染毒体积取决于试验动物的大小 。对啮齿类动物而言 ,体积一般不超过 1 mL/100 g;如果是水 溶 液 , 可 以 使 用2 mL/100 g。建议受试物尽可能溶解在水中 ,或制成悬浮液或乳状液 ,其次考虑用油(如玉米油) ,最后再选择其他赋形剂 。 当选用非水赋形剂时 ,应了解所用赋形剂的毒理特性 。受试物应在毒性试验前现用现配 ,除非已知在配制过程中受试物在赋形剂中的稳定性 ,且可以接受其状态 。

　　5.3 试验步骤

　　5.3. 1 染毒

　　5.3. 1. 1 使用胃管或合适的插管对动物进行灌喂染毒 。 如果非正常情况下未能一次染毒 ,也可在24h内分段多次染毒 。

　　5.3. 1.2 动物在染毒前应禁食(如大鼠应禁食过夜不禁水 ;小鼠在染毒前禁食 3 h~ 4 h 不禁水) 。禁食后对动物称重 ,然后再进行染毒 。根据禁食后的动物体重来计算染毒剂量 。染毒 后 大 鼠 要 禁 食3h~ 4 h,小鼠为 1 h~ 2 h。 当染毒分多次进行时 ,根据染毒时间段的长短来保障动物饲料和水供应 。

　　5.3.2 限度试验和正式试验

　　5.3.2. 1 通则

　　如果相关的资料表明受试物可能无毒 , 即低于管控限度剂量 ,则可以进行限度试验 。受试物的毒性信息可以通过结构相 似 化 合 物 、混 合 物 及 产 品 的 毒 性 信 息 来 获 得 。 当 缺 少 或 者 无 受 试 物 的 毒 性 信 息时 ,或推测出受试物有毒时 ,应进行正式试验 。

　　5.3.2.2 限度试验

　　5.3.2.2. 1 2000mg/kg剂量限度试验

　　— 当 3 只或 3 只以上动物出现死亡 ,LD50低于限量剂量(2 000 mg/kg) 。

　　先对一只动物进行染毒 。如果动物出现死亡 ,则进行正式试验并计算 LD50 。如果动物存活 ,依次对另外 4 只动物进行染毒 ,共对 5 只动物进行试验 。如果有 3 只动物出现死亡 , 限度试验停止 ,进行正式试验 。如果 3 只或 3 只以上动物存活 ,那么 LD50大于 2 000 mg/kg。如果试验中 1 只动物出现非预期延迟死亡 ,而其他动物存活 ,此时要停止染毒并观察所有的动物 ,看其他动物在相同的观察周期是否也会出现死亡(见 5. 3. 2. 3 中初始观察期) 。延迟死亡的动物应同其他死亡的动物一样记入死亡数量 。结果评估如下(O=存活 ,X=死亡) 。

　　O XO XX

　　O OX XX

　　O XX OX

　　O XX X

　　如果有 3 只动物出现死亡 ,则进行正式试验 。

　　— 测试 5 只动物 。 当 3 只或 3 只以上动物存活 ,则 LD50高于限度剂量(2 000 mg/kg) 。

　　O OO OO

　　O OO XO

　　O OO OX

　　O OO XX

　　O XO XO

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　　O XO OO/X

　　O OX XO

　　O OX OO/X

　　O XX OO

　　5.3.2.2.2 5000mg/kg剂量限度试验

　　若管理特殊要 求 , 则 按 附 录 A 进 行 5 000 mg/kg 限 度 试 验 。 出 于 动 物 福 利 的 考 虑 , 不 鼓 励 对GHS第 5类(2000 mg/kg~ 5000 mg/kg)中的物质进行动物试验 ,只有当试验结果极可能涉及人类或动物健康以及环境保护等时 ,方考虑进行该试验 。

　　对一只动物用 5 000 mg/kg剂量进行染毒 ,如果动物死亡 ,就进行正式试验来确定 LD50 。如果动物存活 ,继续对另外两只动物进行染毒 。 如果两只动物 都 存 活 , 则 LD50 高 于 限 度 剂 量 , 限 度 试 验 结 束(即持续观察 14 d,不对另外的动物进行染毒) 。

　　如果 1 只或者 2 只动物出现死亡 ,那么再给另外 2 只动物依次染毒 。如果试验中有 1 只动物出现意外的延迟死亡且有其他动物存活 ,此时应停止染毒并观察所有的动物 ,看其他动物在相同的观察周期

　　— 当 3 只或更多的动物死亡 ,LD50低于限量剂量(5 000 mg/kg) 。

　　亡(是)否,不(会)必(死)要(亡)。) 。延迟死亡的动物应同其他死亡的一样记入死亡数量 。结果评估如下(O= 存活 ,X= 死

　　O XO XX

　　O OX XX

　　O XX OX

　　O XX X

　　— 当 3 只或更多的动物存活 ,LD50高于限量剂量(5 000 mg/kg) 。

　　O OO

　　O XO XO

　　O XO O

　　O OX XO

　　O OX O

　　O XX OO

　　5.3.2.3 正式试验

　　5.3.2.3. 1 通常每间隔 48 h对动物染毒一次 ,一次染毒 1 只动物 。然而 ,染毒间隔的设置是由发作 、持续时长和中毒症状的严重性共同决定的 。应当确认先前染毒的动物仍然存活 ,方可进行下一个剂量的染毒 。不确定会产生何种效应时 ,染毒间隔时间可做适当的调整 。 当连续染毒过程中的染毒间隔固定时 ,试验较易进行 。如果试验中的染毒间隔时间是变化的 ,则不必要重新计算染毒剂量和概率比率 。为了选择起始剂量 ,所有可得到的资料 ,包括受试物结构相似物质的信息以及受试物的所有毒性测试结果 ,都应用于估算 LD50和剂量-效应曲线的斜率 。

　　5.3.2.3.2 第一只动物的染毒剂量要比 LD50 的最佳预测值低一级 。如果这只动物存活 ,便使用较高的剂量给第二只动物染毒 。如果第一只动物出现死亡或者垂死的状况 ,那么就用较低的剂量对第二只动物进行染毒 。剂量级数因子应选择为 1/(剂量-效应曲线斜率的估计值) 的反对数 , 而且在整个测试中应保持不变(级数 3. 2 对应的斜率为 2) 。 当没有受试物的斜率信息时 ,使用的剂量级数因子为 3. 2。使用默认的级 数 因 子 , 染 毒 剂 量 依 次 为 1. 75 mg/kg、5. 5 mg/kg、17. 5 mg/kg、55 mg/kg、175 mg/kg、 550 mg/kg和 2 000 mg/kg(或 者 特 殊 情 况 下 使 用 1. 75 mg/kg、5. 5 mg/kg、17. 5 mg/kg、55 mg/kg、 175 mg/kg、550 mg/kg、1 750 mg/kg和 5 000 mg/kg的序列进行试验) 。如果无法预测受试物的致死

　　5

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　　量信息 ,染毒剂量应当从 175 mg/kg开始 。大多数的情况下 ,这个剂量是亚致死量 ,所以釆用此剂量可以减少动物的疼痛和痛 苦 程 度 。 如 果 动 物 对 化 学 品 的 耐 受 程 度 存 在 较 大 可 变 性(即 斜 率 估 计 值 低 于2. 0) ,在开始测试前应考虑在剂量对数值上增加 0. 5(即 3. 2 级数因子) 。类似地 ,对于已知斜率很陡的受试物 ,应选取比默认值小的剂量级数因子(附录 B包含了一个剂量级数表 ,起始剂量为 175mg/kg,斜率范围在 1~ 8之间) 。

　　5.3.2.3.3 是否继续进行染毒 ,取决于固定时间间隔(如 48 h) 后所有动物的试验结果 。 当符合以下任一项时 ,试验终止 。

　　a) 在上限剂量时有连续 3 只动物存活 。

　　b) 在连续测试的任意 6 只动物中有 5个逆转现象发生 。

　　c) 至少有 4 只动物跟随第一个逆转现象 ,并且确定的概率比率超过临界值(见 6. 2. 4 和附录 C。在试验进行到第一个逆转现象后的第 4 只动物时 ,要对每一次染毒剂量进行计算) 。

　　对于 LD50和斜率变化很大的受试物 ,试验出现逆转后有 4 只 ~ 6 只动物跟随第一个逆转现象即可满足终止规则 c) 。在一些情况下 ,对于剂量-效应曲线斜率较小的受试物 ,可能需要更多的动物(试验动物总数最多可达 15只) 。

　　5.3.2.3.4 当符合终止规则时 ,根据 6. 1 和 6. 2. 1 的试验结果计算 LD50 。

　　5.3.2. 3. 5 人道处死的垂死动物视同试验中死亡 。如果试验中一只动物发生延迟死亡 ,并且其他服用同等或更多剂量的动物仍存活 ,应停止染毒 ,并观察所有动物 ,看其他动物是否会在相似的观察期内死亡 。如果后来存活的动物同样死亡 ,且所有剂量水平可能都超过 LD50,则此时建议重新开始试验 ,所用起始剂量至少低于最低的死亡剂量的两级(并延长观察时间) , 因为当起始剂量低于 LD50 时 ,方法是最准确的 。如果后续服用与之前死亡的动物同等或更多剂量的动物能够存活 ,就不需要改变剂量级数 , 因为死亡动物的信息将会 作 为 比 存 活 动 物 更 低 剂 量 的 死 亡 率 包 含 到 计 算 中 去 , 而 不 是 后 来 的 存 活 动 物里 ,这会使 LD50 降低 。

　　5.4 观察

　　5.4. 1 染毒后 30 min内至少观察一次实验动物 ,前 24h 内要定期观察(染毒后 4 h 内要特别注意) ,之后 14 d 内每天观察 1 次 ,除非发现动物死亡或者进行人道处死 。但观察期限并非固定不变 ,应根据动物毒性反应大小 、毒性反应时间以及恢复期时长等因素来决定 ,如有必要可延长观察期 。毒性体征出现和消失的时间应重点观察 ,尤其是迟发性毒性体征 。 系统记录每只动物的观察结果 。

　　5.4.2 如果动物连续出现毒性体征 ,需进行额外观察 。 临床观察包括皮肤 、被毛 、眼 、黏膜 、呼吸 、循环 、植物神经和中枢神经系统 ,活动和行为特征的改变 。应重点观察震颤 、惊厥 、流涎 、腹泻 、嗜睡和昏迷等症状 。如发现动物处于垂死状态 ,或动物表现出剧烈疼痛或持续严重痛苦症状 ,应对其进行人道处死 。当动物被人道处死或者被发现死亡时 ,应精确地记录死亡时间 。

　　5.4.3 应在给予受试物前对动物个体称重 ,之后应至少每周称重 1 次 。记录和计算体重的变化 。在试验结束时存活动物应在称重后人道处死 。

　　5.4.4 所有的动物(包括在试验期死亡及人道处死) 都应进行大体剖检 。记录每只动物的大体病理变化 。在首次染毒后存活 24h或更长时间的动物可以考虑对其进行组织病理学检查 , 以获得更多有用的信息 。

　　6 数据和报告

　　6. 1 数据

　　应提供动物个体数据 。 以表格汇总所有试验数据 ,包括每个剂量组使用的动物数量 、出现毒性体征的动物数量 、试验中死亡或人道处死的动物数量 ,动物个体的死亡时间 ,毒性效应及逆转效应的描述和

　　6

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　　过程 , 以及大体解剖结果 。 同时提供选择起始剂量和剂量级数的依据 。

　　6.2 正式试验 LD50计算

　　6.2. 1 除了 6. 2. 2 描述的特殊情况以外 ,采用最大似然法计算 LD50 。下列统计学详细资料有助于最大似然法计算(用假设 σ) 。无论是直接死亡 、延迟性死亡或人道处死 ,都包含在最大似然法分析的 目标函数中 。似然函数见公式(1) ~公式(3) :

　　L =L1L2 …Ln …………………………( 1 )

　　如果第 i个动物存活 ,Li = 1-F(Zi) ,或 …………………………( 2 )

　　如果第 i个动物死亡 ,Li = F(Zi) …………………………( 3 )

　　式中 :

　　L — 试验结果的似然值 ;

　　n — 试验动物的总数 ;

　　F — 标准累积正态分布 ;

　　di — 第 i个动物的染毒剂量 ;

　　μ — 给定值 ;

　　σ — 剂量对数单位的标准偏差 。

　　真实 LD50 的估算值由似然值 L 取最大值时的 μ 计算得到(见 6. 2. 3) 。

　　σ 的估计值为 0. 5,除非能够得到一个较好的一般性或特殊情况的数据 。

　　6.2.2 在某些情况下 ,不能进行统计计算或有可能得出错误结果 。 出现以下情况时可以通过特殊方法确定 LD50 的估算值 。

　　Zi = [log(di) - μ]/σ …………………………( 4 )

　　a) 如果试验基于 5. 3. 2. 3. 3 中 的 a)(即 重 复 进 行 上 限 剂 量 试 验) 停 止 , 或 者 因 上 限 剂 量 停 止 试验 ,LD50则高于上限剂量值 。分类也在此基础上完成 。

　　b) 如果所有死亡动物的染毒剂量都比所有存活动物高(或者所有存活动物的染毒剂量比所有死亡动物的高 ,虽然这几乎是不可能的) ,则 LD50介于存活动物染毒剂量和死亡动物染毒剂量之间 。这些观察结果不能进一步给出 LD50 的准确信息 。尽管如此 ,假设给定 σ 值 ,则可以计算出最大似然 LD50 。5. 3. 2. 3. 3 的 b)对这种情况进行了描述 。

　　c) 如果存活和死亡的动物所使用的染毒剂量只有一个是相同的 ,并且其他的死亡动物都使用更高的染毒剂量而其他存活动物都使用更低的染毒剂量 ,或者出现逆转的情况 ,则 LD50 等于相同的那个染毒剂量 。如果受试物是一个与之非常接近的相关物质 ,应使用一个较小的染毒剂量级数进行试验 。

　　如果上述情况都不出现 ,则 LD50应用最大似然法进行计算 。

　　6.2.3 最大似然计算可以釆用非线性回归分析统计程序 PROC NLIN 或统计学 AR 程序的计算程序包(计算程序包见参考文献[6]的附录 1D) 。或使用其他的计算软件 。程序的特殊说明见参考文献[3] (BASIC程序使用的 σ 值需要进行校正) 。程序得到的结果是 log(LD50)估算值及其标准误差 。

　　6.2.4 5. 3. 2. 3. 3 中的 c)是基于试验程序的 3 次试验 , 以表格的形式列出不同 μ 值时 6. 2. 1 的似然性结果 。 当第 6 只动物已经不能满足 5. 3. 2. 3. 3 中 a)或 b)时 ,对之后的每个动物试验进行对比 。标准似然性比率方程列于附录 C 中 。这些对比以 自动化方式利用电子数据表软件很容易完成并可以重复进行 ,如附录 C 中提到计算机软件 。如果符合标准规则 ,试验停止 ,可用最大似然性方法即可计算出 LD50 。

　　7

　　GB/T 21826—2025

　　6.3 置信区间的估算

　　6.3. 1 根据正式试验和 LD50估计值的计算 ,可以得出 LD50 的置信区间 。任何一个置信区间都可以在正式试验的可靠性和实用性方面提供有价值的信息 。 一个宽的置信区间表明 LD50估计值有较多的不确定性 。LD50估计值的可靠性低时 ,其有效性也就低 。一个窄的置信区间表明 LD50估计值有较小的不确定性 。LD50估计值可靠性高 ,其有效性也就高 。这就意味着 ,如果重复进行正式试验 ,那么新的 LD50估计值应与原来的 LD50估计值接近 ,并且这两个 LD50估计值都会接近真实 LD50 。

　　6.3.2 根据正式试验结果 ,计算出真实 LD50 的两个不同类型置信区间中的其中一个 。

　　— 当至少采用 3种染毒剂量进行试验 ,且以中间剂量染毒时至少有一个动物存活和一个动物死亡 ,此条件下 ,可以用一个似然性的计算机程序得到一个置信区间 , 即真实 LD50 的 95%置信区间 。但由于希望使用少量的动物进行试验 ,实际置信水平一般不准确 。使用随机停止规则改善了应对条件发生变化的能力 ,但同时会导致报道的置信水平与真实置信水平存在稍许差别 。

　　— 如果所有动物在某一染毒剂量或低于该剂量水平时存活 ,且所有动物在下一个较高染毒剂量下死亡 ,则可以计算出一个区间 ,下限为所有动物存活时的最高染毒剂量 ,上限为所有动物死亡时的染毒剂量 。这个区间标注为 “大约 ”, 即这个区间的准确置信水平不能明确确定 。 由于这种类型的效应仅发生在剂量-效应曲线斜率陡峭的情况下 ,而在大多数情况下 ,真实的 LD50应落在所得置信区间内或与置信区间非常接近 。这个区间可能相对较窄 ,且在大多数的实际使用中十分准确 。

　　6.3.3 在某些情况下 ,所得置信区间为无穷大 ,此时以零作为它的下限 ,无穷大作为它的上限 , 或两者兼而有之 。例如 , 当所有动物死亡或所有动物存活时 ,可能会得到此类置信区间 。本流程需要专门的计算方法 ,可 使 用 美 国 环 保 局 (USEPA) 或 经 合 组 织 (OECD) 提 供 的 专 门 程 序 , 或 者 使 用 美 国 环 保 局(USEPA)或经合组织(OECD)提供的技术性细节资料(程序和资料相关网址详见参考文献[5]) 。 资料中描述的这些置信区间的覆盖情况和专用程序的性能 , 同样也可以通过美国环保局(USEPA)获得 。

　　6.4 试验报告

　　报告的内容应包括以下信息 。

　　a) 受试物 :

　　1) 物理性质 、纯度等相关的物理化学性质(包括异构体) ;

　　2) 标识资料 ,包括 CAS号 。

　　b) 赋形剂 :如果赋形剂不是水 ,注明赋形剂的选择理由 。

　　c) 试验动物 :

　　1) 所用动物品系 ;

　　2) 动物的微生物状况(如已知) ;

　　3) 动物数量 、鼠龄和性别(包括使用雄性代替雌性的理由) ;

　　4) 供应商 、饲养条件与饲料等 。

　　d) 试验条件 :

　　1) 起始剂量选择的依据 、剂量级数因子以及后续的剂量水平 ;

　　2) 受试物的配制描述 ,包括染毒时物理形态 ;

　　3) 受试物的染毒体积和染毒时间 ;

　　4) 饲料和水质的详细资料(包括饲料类型 、饲料来源和水源) 。

　　e) 结果 :

　　1) 体重及体重变化 ;

　　2) 以表格的形式列出每只动物的剂量水平和效应数据(即动物出现的毒性体征 ,包括特征 、

　　8

　　GB/T 21826—2025

　　严重程度 、效应持续时间和死亡率) ;

　　3) 染毒时的动物个体的体重 ,每周体重 , 以及死亡及处死时的体重 ;

　　4) 每只动物出现毒性体征的时间进程及体征是否可逆 ;

　　5) 每只动物的大体解剖发现和组织病理学结果(如果有) ;

　　6) LD50值 ;

　　7) 统计学结果(使用的计算机程序描述和电子数据表格的计算) 。

　　f) 结果的讨论和分析 。

　　g) 结论 。

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　　GB/T 21826—2025

　　附 录 A

　　(规范性)

　　2000mg/kg剂量的分类要求

　　A. 1 LD50大于 2000mg/kg无需试验的受试物的分类标准

　　A. 1. 1 《全球化学品统一分类和标签制度》分类急性毒性危险类别为 5 的物质具有相对较低的急性毒性 ,在某些特定的 情 况 下 可 能 对 某 些 比 较 脆 弱 的 人 群 带 来 危 险 。 这 类 物 质 经 口 或 经 皮 LD50 预 计 在2 000 mg/kg~ 5 000 mg/kg。或其他染毒途径获得的类似结果 。

　　A. 1.2 在下列情况下 ,受试物可以划为 2000mg/kg

　　a) 有确定的证据表明受试物的 LD50在第 5类范围内 ;或其他动物试验以及人类毒性反应表明该物质对人体健康具有急性毒性 。

　　b) 具有下列任意一种情况 ,且通过对数据的外推 、预测或衡量不能将该物质划分到更为严重的毒性物质 :

　　— 有可靠资料表明该物质对人类具有严重的毒性效应 ;

　　— 在急性毒性类别 4 的经口毒性试验中具有致死性 ;

　　— 在按照急性毒性类别 4试验时 ,专家判断出现了较为严重的毒性反应 , 除了腹泻 、毛发竖立或不太明显的症状 ;

　　— 通过专家对其他动物试验的判断认为有足够的证据表明该物质有比较明显的潜在急性毒性 。

　　A.2 大于 2000mg/kg剂量

　　如果无明确的资料可以证明进行此类试验对人类 、动物健康和环境保护有重大意义 , 出于保护动物的需要 ,不应进行第 5类范围内的动物试验 。

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　　GB/T 21826—2025

　　附 录 B (资料性)染毒过程

　　B. 1 主要试验的染毒剂量序列的设计原则

　　B. 1. 1 上下增减剂量法 :对每一序列 ,给动物逐只染毒 ,通常间隔 48h。第一只动物接受的剂量比 LD50最佳估计值低一个级数 。这个选择反映了一个调整趋势 ,使偏差朝着偏向初始剂量 、偏离 LD50 的方向移动 。为之后的每只动物调整剂量 , 以确保全部试验的结果稳定 。本附录内容为剂量范围的选取提供了更多的指导 。

　　B. 1.2 默认剂 量 级 数 : 一 旦 确 定 了 初 始 剂 量 和 剂 量 间 隔 , 列 出 所 有 可 能 的 剂 量 , 包 括 上 限 (通 常 是2 000 mg/kg或 5 000 mg/kg) 。接近上限的剂量从剂量级数中剔除 。本文件提供初始的几个剂量 ,形成可自我 调 整 的 剂 量 序 列 。 鉴 于 试 验 易 出 现 正 偏 差 , 所 以 在 对 物 质 毫 无 所 知 的 情 况 下 , 建 议 以175mg/kg为初始剂量 。如果主要试验中采用了默认流程 ,测初始剂量为 175 mg/kg,剂量级数因子取对数计算 的 默 认 值 0. 5。 剂 量 的 使 用 包 含 1. 75 mg/kg、5. 5 mg/kg、17. 5 mg/kg、55 mg/kg、175 mg/kg、 550mg/kg和 2 000 mg/kg或 有 特 殊 需 要 时 包 含 1. 75 mg/kg、5. 5 mg/kg、17. 5 mg/kg、55 mg/kg、 175mg/kg、550mg/kg、1750mg/kg和 5000mg/kg。对于某些高毒性的物质 ,染毒剂量要向低值移动 。

　　B.2 主要试验的染毒剂量序列

　　表 B. 1 提供了剂量级数为整数倍数的斜率(1~ 8) ,此时的剂量级数因子不是默认值 。

　　表 B. 1 剂量序列

　　单位为毫克每千克

　　斜率= 1

　　2

　　3

　　4

　　5

　　6

　　7

　　8

　　0. 175a

　　0. 175a

　　0. 175a

　　0. 175a

　　0. 31

　　0. 175a

　　0. 275

　　0. 175a

　　0. 26

　　0. 175a

　　0. 24

　　0. 34

　　0. 175a

　　0. 23

　　0. 31

　　0. 55

　　0. 375

　　0. 55

　　0. 44

　　0. 69

　　0. 375

　　0. 55

　　0. 47

　　0. 65

　　0. 41

　　0. 55

　　0. 73

　　1. 75

　　1. 75

　　0. 81

　　1. 75

　　3. 75

　　0. 99

　　1. 75

　　3. 1

　　1. 09

　　1. 75

　　2. 75

　　4. 4

　　0. 82

　　1. 2

　　1. 75

　　2. 6

　　3. 75

　　0. 91

　　1. 26

　　1. 75

　　2. 4

　　3. 4

　　4. 7

　　0. 97

　　1. 29

　　1. 75

　　2. 3

　　3. 1

　　4. 1

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　　GB/T 21826—2025

　　表 B. 1 剂量序列 (续)

　　单位为毫克每千克

　　斜率= 1

　　2

　　3

　　4

　　5

　　6

　　7

　　8

　　17. 5

　　5. 5

　　8. 1

　　5. 5

　　6. 9

　　5. 5

　　8. 2

　　6. 5

　　5. 5

　　7. 3

　　17. 5

　　17. 5

　　9. 9

　　17. 5

　　31

　　1. 09

　　17. 5

　　27. 5

　　12

　　17. 5

　　26

　　9. 1

　　12. 6

　　17. 5

　　24

　　34

　　9. 7

　　12. 9

　　17. 5

　　23

　　31

　　55

　　37. 5

　　55

　　44

　　69

　　37. 5

　　55

　　47

　　65

　　41

　　55

　　73

　　175

　　175

　　81

　　99

　　109

　　82

　　120

　　91

　　97

　　175

　　175

　　310

　　175

　　275

　　175

　　260

　　126

　　175

　　240

　　340

　　129

　　175

　　230

　　310

　　550

　　375

　　550

　　440

　　690

　　375

　　550

　　470

　　650

　　410

　　550

　　730

　　1 750

　　1 750

　　810

　　1 750

　　990

　　1 750

　　3 100

　　1 090

　　1 750

　　2 750

　　820

　　1 200

　　1 750

　　2 600

　　910

　　1 260

　　1 750

　　2 400

　　970

　　1 290

　　1 750

　　2 300

　　3 100

　　5 000

　　5 000

　　5 000

　　5 000

　　5 000

　　3 750

　　5 000

　　3 400

　　5 000

　　4 100

　　5 000

　　a 如果需要较低的剂量 ,将序列延续至较低的剂量 。

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　　GB/T 21826—2025

　　附 录 C

　　(资料性)

　　似然比终止规则的估算

　　C. 1 正式试验可能以终止规则[见 5. 3. 2. 3. 3a)]为基础完成 。但无论如何 , 即使不满足任意一项停止规则 , 只要已对 15个动物进行了有效染毒 ,染毒也应当停止 。 图 C. 1~ 图 C. 4 给出了缺失受试物信息的例子 ,此情况下推荐使用默认的起始剂量为 175 mg/kg,默认的剂量级数因子为 3. 2 或一个半对数 。请注意这些表格的内容仅是作为例证 。

　　C.2 图 C. 1 显示 ,在限度剂量 2 000 mg/kg下 ,如果 3 个动物存活 ,正式试验将如何停止 。 图 C. 2 显示 ,在限度剂量为 5 000 mg/kg下的类似情形(这些都是限度试验不适用的情况) 。 图 C. 3 举出了一个特殊的序列 ,其中 6个试验动物中出现了 5个逆转 ,然后结束试验 。最后 , 图 C. 4 举例说明这样一个情况 : 当试验结果既不满足 5. 3. 2. 3. 3a) ,也不满足 5. 3. 2. 3. 3b) ,且连续 4 个试验动物出现了逆转 ,则评估5. 3. 2. 3. 3c) 。

　　C.3 5. 3. 2. 3. 3c)需要在每个动物测试后用似然比终止规则对其进行评估 ,从出现逆转后的第 4个动物开始 。推测出 3个 “试验程序方法 ”。技术上来说 ,这些程序方法是可能的 ,如推荐的 LD50 的最大似然评估方法 。这个程序接近于以概率为基础的置信区间的计算 。

　　C.4 程序的基础是 : 当已经收集到了足够的数据时 ,LD50点估计比偏离点估计的值更加可靠 ,此时需要用概率对点估计的可靠性进行量化 。 因此要计算 3 个概率值 : 一 个 是 数 值 刚 好 为 LD50 点 估 计 的 概 率(例子中称为粗略估值或平均剂量估值) ; 一个是数值低于点估计的概率 ; 一个是数值高于点估计的概率 。具体地 ,低数值为点估计除以 2. 5 的商 ,高数值为点估计的 2. 5倍 。

　　C.5 通过似然性比率的计算来比较似然值 ,然后判断这些似然性比率(LR) 是否超过一个临界值 。 当点估计的似然性比率超过其他每个似然性 2. 5 步进因子时 ,停止试验 ,该因子可表示点估计在统计学上有相对强的可靠性 。 因此计算两个似然比率 ,一个是点估计与点估计除以 2. 5 的商的似然比率 ,一个是点估计与点估计乘 2. 5 的积的似然比率 。

　　C.6 LD50值的计算用任何带有正态概率函数功能的电子制表软件均可完成 。 图 C. 4 所举的 LD50 的例子就是模仿电子制表软件构建出来的 。 图 C. 4 以极限剂量上限 5 000 mg/kg为例介绍了计算步骤 ,上限剂量为 2 000 mg/kg时计算步骤相同 。或者 ,使用具有数据输入 、公式运算功能的软件 ,从 OECD 和USEPA 网站上直接下载动物数据 ,输入 LD50估算公式和置信区间计算公式后进行计算 。 图 C. 5 给岀了这类软件的截图 。

　　C.7 上限剂量为 5000mg/kg的虚拟范例(见图 C. 4) 。在这个虚拟例子中 , 限度剂量为 5 000 mg/kg,在试验完 9 只动物后满足了似然比停止规则 。第 3 只动物试验时出现了第 1次 “逆转”。当试验完 “逆转”后的 4 只动物时要检查似然比终止规则是否满足 。在这个例子中 ,逆转后的第 4 只动物即为实际试验中的第 7 只动物 。 因此 ,对于这个例子来说 , 电子制表软件的计算仅需要从第 7 只动物进行试验后开始 , 同时进行数据输入 。随后 ,在第 7 只动物、第 8 只动物和第 9 只动物试验后也要进行似然比终止规则的检查 。此例中 ,在第 9 只动物试验完后首次满足了似然比终止规则 。制表规则参考以下 。

　　a) 依次输入每只动物的剂量-效应信息 。

　　1) 第 1列步骤编号为 1~ 15。试验动物最多为 15只 。

　　2) 第 2列每一只接受试验的动物在该列标记为 I。

　　3) 第 3列输入第 i只动物的染毒剂量 。

　　4) 第 4列注明动物反应状况 :有效应(标记为 X) ,无效应(标记为 O) 。

　　b) 名义和实际试验动物量 。

　　1) 名义试验动物量由第一次逆转的 2 只动物(这里是第 2 只和第 3 只动物)加上后来接受试

　　13

　　GB/T 21826—2025

　　验的所有动物组成 。第 5列列出了每只动物是否计入名义试验动物量中 。

　　2) 第 16行给出了名义试验动物量(n) 。这是名义试验动物的数量 。在这个例子里 ,n 为 8。

　　3) 第 17行为实际试验动物的数量 。

　　c) LD50 的粗略估值 。

　　1) 记入名义试验动物量中的动物 ,其染毒剂量几何平均值用于 LD50粗略估值的计算 。在表中 ,称之为 “平均剂量估值 ”。它随着每只接受试验的动物而更新 。 为了允许选择一个较差的初始测试剂量 ,该平均值要限于名义动物数量中 ,它可以产生一个初始的效应群和 一个初始的非效应群 。 (但是 ,下面最终 LD50 的似然性计算中用到的是所有的动物数量) 。回忆一下 ,n个数量的几何平均数是 n 个数量的 1/n 次方的产物 。

　　3) 第 19行为第 18行值的对数(10为底)(例如 log10 1 292. 8= 3. 112) 。

　　2) 第 18行为平均剂量估计值[例如 , (175× 550× … × 1 750) 1/8 = 1 292. 78] 。

　　d) LD50粗略估值似然性 。

　　1) 似然性是一个统计学方法 ,用来量度数据对 LD50或其他参数的估计值的支持程度 。似然性比率可用于比较数据对于不同的 LD50估计值的可靠程度 。

　　2) 第 8列按 LD50 的粗略估值计算 LD50平均估计值的似然性 。该似然性(第 21行)是分布到各只动物上的似然性的总和(见 6. 2. 1) 。每只动物上的似然性分布用 Li 表示 。

　　3) 在第 7列中输入各反应剂量 di 的概率估计值 ,记作 Pi 。Pi从剂量-效应曲线计算得出 。注意 :概率积分变换剂量-效应曲线的参数是斜率和 LD50,所以需要这些参数的数值 。第18行的平均剂量估值用于 LD50 的估算 。这个例子中的斜率使用默认值 2。 利用下面列出的步骤计算反应概率 Pi。

　　计算 lgdi (第 6列) 。

　　计算每个动物的 z-score,记作 Zi (不列入表中) ,用公式 :

　　例如 ,第一只动物(第 1列) ,

　　Z(σ)/(斜lgd(率)i,-lg LD50)/σ

　　第剂(/)(2量(2).的估(243)-计(3).反(11)应(2))概(/0)率.5为(00)=:-1.738

　　这里 ,F 表示标准正态分布的累积分布函数(即平均值为 0、标准差为 1 的正态分布) 。

　　Pi=F(Zi)

　　布(例)如,但:是(该函数(第 1行))做,P为1子(F)(制- 表(1).软(738)件)0也(41)同(2)样得到广泛的应(统计表中的函数)用(F)。(可看到该函(或相似函数)) 数(用)有(于)不(正)同(态)的(分)

　　名字 ,如 Lotus1-2-3正态函数和 Excel中的 @NORMDIST 函数 。 为确 保 你 已 经 正 确 使用了软件中的函数 ,你可以用常见的值进行检验 ,如 F(1. 96) H 0. 975或 F(1. 64) H 0. 95。

　　4) 第 8列 :计算了似然性分布的自然对数 In Li 。Li 仅仅是实际观察到的每只动物的效应

　　的概率 :

　　表现出效应的动物 :In Li=ln Pi

　　注意这里用的(无效应的动物)是:Il数(n)(In(-))P,而i)其他地方(通常)用的是以 10为底的对数 。这些选择通

　　常是由上下文来预测的 。

　　5) 每只动物都要完成上述步骤 。最后 :

　　第 20行 :第 8列对数-似然性分布求和 。

　　第 21行 : 对 第 20行 的 可 能 性 贡 献 的 log值 进 行 exp 函 数 计 算 。 [如 exp( - 3. 389) = 14

　　e-3.389 =0. 033 7] 。

　　e) 计算 LD50 的粗略估值的上下两种剂量的似然性 :如果可以精确估计数据 ,对偏离估计值 LD50较远的值的似然性而言 ,合理的 LD50估计值将会有高的似然性 。 比较平均剂量估值的似然性(1 292. 8,第 18行)和以2. 5阶数因子发生变化的值(即到 1 292. 8×2. 5和1 292. 8/2. 5) 。计算同

　　12928(上面描)2(的)5类)替代(似)( 129(列于)28(第)用于 L(9列 ~)D(第)50 的估(12)计(列)中。) , 除 了 517. 1( = 1 292. 8/2. 5) 和 3 232. 0( =

　　f) 计算似然性比率 :用 3个似然值(21行)来计算两个似然比(22行) 。似然比是用于比较统计学对估计值1 292. 8的支持和对其他每个估计值的支持 ,其他估计值指的是517. 1和3232. 0。两个似然比计算如下 。

　　=0. 033 7/0. 0080

　　LR1= [1 292. 8的似然值]/[517. 1的似然值]

　　=0. 033 7/0. 0098

　　R(4)2.2[1 292. 8的似然值]/[3232. 0的似然值]

　　= 3. 44

　　g) 确定似然比是否超过临界值 :高似然比意味着对 LD50估计值的高度可靠性 。上述两个似然比计算结果(4. 21和 3. 44)都超出临界似然比 , 即 2. 5。 因此满足了似然比停止规则 ,试验停止 。这种情况在 24行以“TRUE”来表示 ,在这个例子中 , 电子数据表头备注了其满足似然比规则 。

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　　图 C. 1 剂 量 为 2 0 0 0 mg/ kg 时 9 终 止 规 则 a) 示例 图

　　16

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　　图 C. 2 剂 量 为 5 0 0 0 mg/ kg 时 9 终 止 规 则 a) 示例 图

　　17

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　　图 C. 3 终 止 规 则 b ) 示例 图

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　　图 C. 4 终 止 规 则 c) 示例 图

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　　图 C.5 计算机软件执行终止规则 c)的示例图

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　　参 考 文 献

　　[1] GB 14925 实验动物 环境及设施

　　[2] GB 30000. 18 化学品分类和标签规范 第 18部分 :急性毒性

　　[3] ASTM E 1163-1987 Standard TestMethod for Estimating Acute OralToxicity in Rats

　　[4] OECD TestGuideline No. 425(2022) Acute OralToxicity:Up-and-Down Procedure

　　[5] Acute OralToxicity(OECD Test Guideline425)StatisticalProgramme(AOT 425 StatPgm) . Ver- sion:1.0,2001.[http://www. oecd. org/oecd/;ages/home/displaygeneral/0,3880, EN-document-524-nodirec- torate-no-24-6775-8,FF. html] .

　　[6] Dixon W. J. (1991) . Staircase Bioassay: The Up-and-Down Method. Neurosci. Biobehav. Rev. ,12,47-50.

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