GB/T 21608-2025 化学品 皮肤致敏试验方法

　　ICS 13.300 CCS A 80

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 21608—2025代替 GB/T21608—2008

　　化学品 皮肤致敏试验方法

　　Chemicals—Testmethod ofskin sensitization

　　2025-08-29发布 2025-12-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 21608—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件代替 GB/T 21608—2008《化学品皮肤致敏试验方法》, 与 GB/T 21608—2008相比 , 除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　— 增加了 “缩略语 ”一章(见第 4章) ;

　　— 更改了动物饲养环境应符合的标准(见 6. 1. 2,2008年版的 6. 1. 2) ;

　　— 增加了 “试验前和试验结束时 ,称量动物体重 ”(见 6. 1. 2) ;

　　— 更改了 “试验方法可靠性的检查 ”的常用阳性物种类及可靠性检查阳性率标准(见 6. 2,2008年版的 6. 2) ;

　　— 更改了“局部封闭敷贴法 ”的诱导接触时间(见 6. 4. 1. 3, 2008年版的 6. 4. 1. 3) 和激发接触时间(见 6. 4. 1. 4,2008年版的 6. 4. 1. 4) ;

　　— 更改了“豚鼠最大反应试验 ”的诱导接触受试物浓度(见 6. 4. 2. 2,2008年版的 6. 4. 2. 2) ;

　　— 更改了“豚鼠最大反应试验 ”的诱导接触时间(见 6. 4. 2. 4,2008年版的 6. 4. 2. 3. 2)和激发接触时间(见 6. 4. 2. 5,2008年版的 6. 4. 2. 3. 3) ;

　　— 更改了表 2 中致敏率的定义描述(见表 2,2008年版的表 2) ;

　　— 更改了 “试验报告和结果解释 ”(见第 7章 ,2008年版的第 7章和第 8章) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归 口 。

　　本文件起草单位 : 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所 、山东省职业卫生与职业病防治研究院 、宁德市标准化科学技术研究院 。

　　本文件主要起草人 :薄存香 、肖经纬 、贾强 、李斌 、陈宵 、张意 、卫海燕 、缪仙玉 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　— 2008年首次发布为 GB/T 21608—2008;

　　— 本次为第一次修订 。

　　Ⅰ

　　GB/T 21608—2025

　　引 言

　　机体在皮肤接触某些化学物质后可能会产生变态反应 ,通过皮肤致敏试验检测化学物潜在皮肤致敏作用 , 以便采取必要的防护措施 。本文件中的试验通过实验动物反复接触受试物后出现的过敏反应来预测和判断受试物对皮肤的致敏性 。

　　检测皮肤致敏性最常选用的动物是豚鼠 ,在以往的数十年间建立了两种类型的试验 ,一种是加弗氏完全佐剂(FCA)的方法 ,另一种是不加佐剂的方法 。 在经济合作与发展组织(OECD) 化学品测试准则中 , 曾经收录过 4个加佐剂和 3个不加佐剂的方法 。本文件详细介绍了 FCA增强皮肤致敏性的豚鼠最大反应试验(guinea pig maximisation test,GPMT) 和不加佐剂的局部封闭敷贴法(buehler test,BT) 。 BT 和 GPMT试验需要用到动物 , 出于动物福利的原因 , 当其他皮肤致敏试验方法不适用时才进行 。

　　BT测试的敏感性低于 GPMT,两种试验均提供了潜在致敏性数据及有限的所选剂量的定量反应信息 ,如果需要更多关于定量反应的信息 ,使用其他测试方法 ,如局部淋巴结测定法(LLNA)等 。

　　Ⅱ

　　GB/T 21608—2025

　　化学品 皮肤致敏试验方法

　　1 范围

　　本文件确立了动物皮肤致敏试验的试验基本原则 ,描述了试验方法 ,规定了试验报告的内容要求 。本文件适用于检测化学品对皮肤变态反应性的试验 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB 14925 实验动物 环境及设施

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　3. 1

　　皮肤致敏反应 skin sensitization

　　过敏性接触性皮炎 allergiccontactdermatitis

　　皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反应 。

　　注 : 对于人类这种反应可能以瘙痒 、红斑 、水肿 、丘疹 、小水疱 ,融合水疱为特征 。动物的反应不同 ,可能只见到皮肤红斑和水肿 。

　　3.2

　　诱导接触 induction exposure

　　机体通过接触受试物以达到诱导产生致敏状态目的的试验性暴露 。

　　3.3

　　激发接触 challengeexposure

　　机体接受诱导接触后 ,再次接触受试物的试验性接触 , 以确定皮肤是否会出现过敏反应 。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件 。

　　BT:局部封闭敷贴法(Buehler Test)

　　GPMT:豚鼠最大反应试验(Guinea Pig Maximisation Test)

　　FCA:弗氏完全佐剂(Freund’s Complete Adjuvant)

　　SDS:十二烷基硫酸钠(Sodium DodecylSulfate)

　　5 试验基本原则

　　实验动物通过皮内注射和/或多次皮肤涂抹诱导剂量受试物 10 d~ 14 d后 , 动物再次接触激发剂

　　1

　　GB/T 21608—2025

　　量的受试物 。通过比较染毒组和对照组动物对激发接触产生的皮肤反应程度 ,判断受试物是否可以诱发过敏反应 ,确定重复接触化学品对哺乳动物是否可引起皮肤变态反应及其程度 。

　　6 试验方法

　　6. 1 实验动物和饲养环境

　　6. 1. 1 动物选择

　　首选健康 、成年雄性和/或雌性豚鼠 ,雌性应该是未生育过和未怀孕的 。

　　6. 1.2 动物饲养和环境

　　动物饲养环境应符合 GB 14925的规定 ,动物自由饮食和饮水 ,豚鼠应补充足量维生素 C。试验前 ,动物应在实验室环境下适应至少 5 d。试验前和试验结束时 ,称量动物体重 。

　　6.2 试验方法可靠性的检查

　　使用已知的能引起轻度/中度致敏的阳性物每隔 6个月做一次阳性对照 。使用佐剂(如 GPMT) 测试至少有 30%的动物出现皮肤过敏反应 ; 不使用佐剂(如 BT) 至少有 15%的动物出现皮肤过敏反应 。阳性物一般选用下列任意一种 :

　　a) α-己基肉桂醛(hexylcinnamic aldehyde,CAS No. 101-86-0) ;

　　b) 巯基苯并噻唑(2-mercaptobenzothiazole,CAS No. 149-30-4) ;

　　c) 苯佐卡因(ethyl-4-aminobenzoate,CAS No. 94-09-7) ;

　　d) 2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,CAS No. 97-00-7) 。

　　用于可靠性检查的致敏物浓度应接近致敏阈值 。使用满足上述致敏率的其他阳性物质时应说明理由 。

　　6.3 剂量设计

　　试验剂量水平通过少量动物 (2只 ~ 3 只)的预试验获得 。

　　赋形剂中固体受试物应经过研磨并与适宜的赋形剂混合 ,水溶性受试物用水或无刺激性表面活性剂作为赋形剂 ,其他受试物用 80%乙醇(诱导接触)或丙酮(激发接触)作赋形剂 。液体也可不稀释直接使用原溶液 。

　　6.4 试验步骤

　　6.4. 1 BT

　　6.4. 1. 1 动物数

　　试验组至少 20只 ,对照组至少 10只 。

　　6.4. 1.2 剂量水平

　　诱导接触的受试物浓度是能够引起轻度皮肤刺激反应的最高浓度 ,激发接触的受试物浓度应是不引起皮肤刺激性的最高浓度 。

　　在试验中设阴性对照组 ,在诱导接触时该组仅涂以溶剂作为对照 ;在激发接触时该组涂以受试物 。对照组动物应与受试物组动物为同一批 。在实验室开展致敏反应试验初期 ,使用新的动物种属或品系

　　2

　　GB/T 21608—2025

　　时 ,需同时设阳性对照组 。

　　6.4. 1.3 诱导接触

　　第 0 天试验 前 24 h 实 验 动 物 背 部 一 侧 去 毛 。将 新 配 制 的 受 试 物 0. 5 g(或 0. 5 mL) 涂 布 在 背 部4 cm2 ~ 6 cm2 的区域 , 以两层纱布和一层玻璃纸覆盖 ,再以无刺激胶带封闭 固 定 6 h。对 照 组 仅 使 用溶剂 。

　　第 6 天 ~第 8 天和第 13天 ~第 15天在背部同一区域相同方法分别再重复一次 。

　　6.4. 1.4 激发接触

　　第 27天 ~第 29天 在 染 毒 组 和 对 照 组 动 物 另 一 侧 背 部 皮 肤 脱 毛 。 以 最 大 无 刺 激 浓 度 的 受 试 物0. 5 g(或 0. 5 mL)贴敷于豚鼠背部去毛区(试验前 24h去毛) ,然后用两层纱布和一层玻璃纸覆盖 ,再以无刺激胶带封闭固定 6 h后及时清洗 。如激发接触结果可疑 ,该动物可以 7 d后重新激发 ,用最初的对照组或新的对照组进行比较 。

　　6.4. 1.5 观察与结果评价

　　激发接触结束 ,除去涂有受试物的敷贴物后 24 h 和 48 h 观 察 皮 肤 反 应(激 发 区 在 除 去 贴 片 大 约21 h 可进行清洗和去毛 ,清除受试残留物可用水或选用不改变皮肤已有反应和不损伤皮肤的溶剂) ,用盲法观察对照组和试验组 。对所有皮肤反应和异常 ,包括全身性反应 、诱导和激发过程所产生的结果均进行观察和记录(为确定可疑反应 ,也可进行组织病理学检查 、测量皮肤皱褶厚度等) 。对局部皮肤反应评分标准 ,应符合表 1 的要求 。 当受试物组动物出现皮肤反应积分不小于 2 时 ,判为该动物出现皮肤致敏反应阳性 ,并计算致敏率 ,判定受试物的致敏强度的评分标准 ,应符合表 2 的要求 。

　　表 1 BT皮肤致敏反应试验评分标准

　　皮肤致敏反应的表现

　　评 分

　　红斑和焦痂形成

　　无反应

　　0

　　轻微的红斑(勉强可见)

　　1

　　明显红斑(分散存在或小块红斑)

　　2

　　中度-重度红斑

　　3

　　严重红斑(紫红色)至轻微焦痂形成

　　4

　　水肿形成

　　无水肿

　　0

　　轻微水肿(勉强可见)

　　1

　　中度水肿(皮肤隆起轮廓清楚)

　　2

　　严重水肿(皮肤隆起约 1 cm 或以上)

　　3

　　最高积分

　　7

　　3

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　　表 2 皮肤致敏反应试验分级标准

　　致敏率/%

　　等级

　　致敏程度

　　0~ 8

　　Ⅰ

　　弱

　　9~ 28

　　Ⅱ

　　轻度

　　29~ 64

　　Ⅲ

　　中度

　　65~ 80

　　Ⅳ

　　强

　　81~ 100

　　Ⅴ

　　极强

　　注 : 致敏率是致敏阳性动物数占该组动物总数的百分比 , Ⅰ 级致敏度没有意义 ,在实际使用下无致敏危险 。

　　6.4.2 GPMT

　　采用 FCA皮内注射方法检测致敏性 。

　　6.4.2. 1 动物数

　　试验组至少 10只 ,对照组至少 5 只 ,如果试验结果难以确定受试物的致敏性 ,应增加动物数 ,试验组至少 20只 ,对照组至少 10只 。

　　6.4.2.2 剂量水平

　　诱导接触的受试物浓度为能引起轻度至中度皮肤刺激反应而不表现全身反应的最高浓度 ,激发接触的受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度 。试验中应考虑使用 FCA 处理动物对染毒剂量的影响 。

　　6.4.2.3 皮内注射诱导

　　第 0 天试验组动物颈背部去毛区中线两侧做三对皮内注射点,每一个点皮内注射 0. 1 mL溶液的配比内容如下 :

　　a) 第一对注射点 :1 ∶ 1(体积比)FCA/水或生理盐水的混合物 ;

　　b) 第二对注射点:适当赋形剂所选的受试物 ;

　　c) 第三对注射点:用 1 ∶ 1(体积比)FCA/水或生理盐水配制的受试物 ,浓度与第 2 点相同 。

　　在第三对注射点,水溶性受 试 物 先 溶 于 水 中 后 再 与 FCA 混 合 , 脂 溶 性 或 不 溶 受 试 物 则 先 混 悬 于FCA 中再与水混合 ,其浓度与第二对注射点浓度相同 。第一和第二对注射点彼此接近且靠近头部 , 而第三对注射点在靠近尾端的试验部位 。

　　对照组应注射部位同受试物 ,每一个点皮内注射 0. 1 mL溶液的配比内容如下 :

　　a) 第一对注射点 :1 ∶ 1(体积比)FCA/水或生理盐水的混合物 ;

　　b) 第二对注射点:未稀释赋形剂 ;

　　c) 第三对注射点:用 1 ∶ 1(体积比)FCA/水或生理盐水配制的浓度为 50%(质量分数)的赋形剂 。

　　6.4.2.4 表皮接触诱导

　　第 6 天 ~第 8 天将涂有 0. 5 g(或 0. 5 mL)受试物的 2 cm×4 cm 滤纸敷贴在上述再次去毛的注射部位 ,然后用两层纱布 ,一层玻璃纸覆盖 ,无刺激胶布封闭固定 48 h。对无皮肤刺激作用的受试物 , 可加强致敏 ,在第二次诱导接触前 24h在注射部位涂抹 10% SDS0. 5 mL, 目的是引起局部刺激作用 。对照组仅用赋形剂作诱导处理 。

　　4

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　　6.4.2.5 表皮接触激发

　　第 20天 ~第 22天 ,动物背部再次脱毛 ,将涂有 0. 5 g(或 0. 5 mL)受试物的滤纸片敷贴在去毛区 ,然后再用两层纱布 ,一层玻璃纸覆盖 ,无刺激胶布封闭固定 24 h。对照组动物作同样处理 。 如激发接触所得结果不能确定 ,可在第一次激发接触 7 d后进行第二次激发接触 。对照组做同步处理 。

　　6.4.2.6 观察与结果评价

　　激发接触结束 , 除去涂有受试物的滤纸后 24 h 和 48 h 观察皮肤反应(激发区可进行清洗和去毛 ,清除受试残留物可用水或选用不改变皮肤已有反应和不损伤皮肤的溶剂) , 用盲法观察对照组和试验组 。对所有皮肤反应和异常 ,包括全身性反应 、诱导和激发过程所产生的结果均进行观察和记录(为确定可疑反应 ,也可进行组织病理学检查 、测量皮肤皱褶厚度等) 。按表 3 对局部皮肤反应评分 。 当受试物组动物皮肤反应积分不小于 1 时 ,应判为皮肤致敏反应阳性 ,对受试物进行致敏强度分级(见表 2) 。

　　表 3 GPMT皮肤致敏反应试验评分标准

　　反 应

　　评 分

　　无反应

　　0

　　分散存在或小块红斑

　　1

　　中度弥漫的红斑 、轻度水肿

　　2

　　严重的红斑 、水肿

　　3

　　7 试验报告和结果解释

　　7. 1 试验报告

　　试验报告应包括以下内容 。

　　— 受试物 :

　　● 化学标识 ,如 IUPAC 或 CAS、分 子 式 、批 号 和 有 效 期 等 , 多 组 分 物 质 尽 量 提 供 每 种 成 分信息 ;

　　● 外观 、水溶性 、二甲基亚砜(DMSO)溶解度 、分子量等理化性质 ;

　　● 溶剂中的溶解度或分散度 ;

　　● 纯度 、杂质的化学特性 ;

　　● 测试前处理 ,如加热 、研磨等 ;

　　● 受试物浓度 ;

　　● 储存条件和稳定性 。

　　— 溶剂 :

　　● 标识数据 :纯度 、浓度 、所用体积 ;

　　● 溶剂选择的理由 。

　　— 实验动物 :

　　● 豚鼠品系 ;

　　● 性别 、鼠龄 、数量 ;

　　● 来源 、饲养条件 ;

　　● 试验开始和结束时动物的体重 。

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　　— 试验条件 :

　　● 斑贴位置的准备方法 ;

　　● 所用的斑贴材料和斑贴技术的详细描述 ;

　　● 剂量水平选择(诱导和激发)的理由 ;

　　● 受试物的配制 、贴敷和移除的详细描述 ;

　　● 用于诱导和激发的溶剂和受试物的浓度及使用量 ;

　　● 饲料和水质的详细信息(包括饲料类型及来源 、水来源) ;

　　● 处理和取样时间的详细信息 ;

　　● 毒性检测方法 ;

　　● 判断阳性或阴性结果的标准 ;

　　● 试验方案偏差的详细信息 、解释试验偏差如何影响研究设计和结果 。

　　— 可靠性检查 :

　　● 最近一次可信性检查试验结果的摘要 ,包括所用的阳性物质 、浓度和溶剂等相关信息 。

　　— 结果 :

　　● 过敏反应及其他反应出现 、消失时间和反应特点的文字描述 ;

　　● 过敏反应强度分级方法 ;

　　● 染毒组及对照组皮肤过敏反应的发生率 ;

　　● 组织病理学发现 ;

　　● 统计分析 。

　　7.2 结果解释

　　如果在豚鼠试验之前进行了筛选试验 ,应提供试验的描述或参考 ,包括试验步骤 、可靠性和灵敏度检查所用的化学物及试验结果 。

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　　参 考 文 献

　　[1] 环 境 保 护 部 化 学 品 登 记 中 心 . 化 学 品 测 试 方 法 : 健 康 效 应 卷 [ M] . 北 京 : 中 国 环 境 出 版社 ,2013.

　　[2] OECD Guidelines fortheTesting ofChemicalsNo. 406SkinSensitisationGuineaPigMaximisa- tion Test and BuehlerTest(2021)

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