T/HBZMXH 00001-2025 白桦组织培养育苗技术规程

​​白桦组织培养育苗技术规程（T/HBZMXH 000012025）主要内容总结​​

​​1. 范围​​

本文件规定了白桦（Betula platyphylla）组培育苗的技术要求，包括培养基制备、组培苗生产等环节，适用于白桦的组培育苗。

​​2. 规范性引用文件​​

• 主要引用LY/T 1882—2010《林木组织培养育苗技术规程》，其术语和定义（如植物组织培养、外植体、培养基等）适用于本文件。

​​3. 培养基制备​​

​​3.1 基本培养基类型​​

• ​​初代培养​​：
  • 叶片外植体：WPM培养基 + 6-BA 0.5 mg/L + IBA 0.1 mg/L + 蔗糖20 g/L + 琼脂5.5~6.5 g/L。
  • 茎段外植体：MS培养基 + 6-BA 1 mg/L + IBA 0.1 mg/L + 蔗糖30 g/L + 琼脂5.5~6.5 g/L。
• ​​继代培养​​：WPM + 6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.1 mg/L + 蔗糖20 g/L + 琼脂5.0~6.5 g/L。
• ​​生根培养​​：1/2MS + IBA 0.2 mg/L + 蔗糖20 g/L + 琼脂5.5~6.5 g/L。

​​3.2 母液配制与保存​​

• 母液浓度：大量元素50×、钙元素50×、铁元素100×、有机物100×、微量元素1000×（具体配方见附录A、B）。
• 激素母液浓度：0.5~1.0 mg/mL。
• 保存：4℃冷藏，标签注明名称、倍数、日期。

​​3.3 培养基配制流程​​

1. ​​计算用量​​：根据配方和配制体积计算母液及其他成分用量。
2. ​​煮制​​：溶解琼脂和蔗糖，加入母液后定容。
3. ​​调节pH​​：用盐酸或氢氧化钠调至5.8~6.0。
4. ​​分装灭菌​​：分装后121℃高压灭菌20分钟，保存不超过1周。

​​4. 组培苗生产​​

​​4.1 消毒处理​​

• ​​超净工作台​​：紫外消毒30分钟，酒精擦拭台面。
• ​​工具灭菌​​：接种器械用酒精擦拭后灼烧（280~320℃）或高压灭菌。

​​4.2 培养条件​​

• 温度：(25±2)℃；湿度：70%~80%；光照：3000~5000 lx，14~16 h/天。

​​4.3 外植体初代培养​​

1. ​​采集与预处理​​：半木质化枝条洗净后切取嫩梢（2 cm）或叶片（0.5~1.0 cm方块）。
2. ​​消毒​​：75%酒精30秒 + 2%次氯酸钠10分钟，无菌水冲洗。
3. ​​接种​​：茎段（1.0~1.5 cm）或叶片平铺于培养基，每容器1个外植体。

​​4.4 继代培养​​

• 不定芽长至1~2 cm时转接继代培养基，每3~4周循环培养。

​​4.5 生根培养​​

• 继代3~4代后，切取健壮不定芽（1.5~2.0 cm）接种至生根培养基，约7天生根。

​​4.6 炼苗与移栽​​

1. ​​炼苗​​：闭口炼苗7天，开口炼苗3~5天。
2. ​​移栽​​：洗去培养基，多菌灵浸泡后移栽至基质（草炭:蛭石:珍珠岩=3:2:1）。
3. ​​环境控制​​：温度(25±2)℃，湿度80%~90%逐渐降低。

​​4.7 育苗管理​​

• ​​水肥​​：移栽7天后喷施营养液（N-P-K=1:1:2，浓度≤0.5%）。
• ​​病虫害防治​​：温室消毒（硫磺熏蒸），定期喷广谱杀菌剂。

​​5. 附录​​

• ​​附录A​​：MS培养基配方（含大量元素、微量元素、有机物等母液配制表）。
• ​​附录B​​：WPM培养基配方（成分与MS类似，但氮源为NH₄NO₃和Ca(NO₃)₂）。

​​核心要点​​

1. ​​培养基差异化​​：初代培养根据外植体类型选择MS或WPM，生根阶段用1/2MS。
2. ​​严格灭菌​​：外植体消毒、工具灭菌、培养基高压灭菌缺一不可。
3. ​​环境控制​​：温湿度、光照、炼苗阶段需逐步适应外界条件。
4. ​​标准化操作​​：母液配制、pH调节、继代周期等均有明确参数要求。

本规程通过详细的技术参数和流程，确保白桦组培苗的高效、标准化生产。