T/CVMA 248-2025 牛病毒性腹泻病毒阻断磁微粒CLIA抗体检测方法

​​团体标准 T/CVMA 248-2025《牛病毒性腹泻病毒阻断磁微粒 CLIA抗体检测方法》主要内容总结​​

​​1. 标准概述​​

• ​​标准名称​​：牛病毒性腹泻病毒（BVDV）阻断磁微粒化学发光免疫分析法（CLIA）抗体检测方法。
• ​​适用范围​​：适用于血清中BVDV抗体的检测。
• ​​发布与实施​​：2025年5月19日发布并实施，由中国兽医协会归口。

​​2. 技术原理​​

采用​​磁微粒化学发光阻断法​​：

1. ​​第一次免疫反应​​：待检血清与生物素标记的BVDV抗原、链霉亲和素磁微粒混合孵育，形成抗原-抗体复合物。
2. ​​第二次免疫反应​​：加入吖啶酯（AE）标记的BVDV单抗，与未结合的抗原结合。
3. ​​检测​​：通过化学发光底物激发发光，RLU（相对光单位）值与抗体含量成反比。

​​3. 试剂与耗材​​

• ​​关键试剂​​：
  • 20×浓缩洗液（含磷酸盐、NaCl、吐温-20）。
  • 磁微粒工作液（链霉亲和素磁微粒）。
  • 抗原工作液（生物素标记的BVDV重组蛋白）。
  • AE抗体工作液（吖啶酯标记的单抗）。
  • 校准品（6个梯度：3.125~3200 U）和质控品（2个水平）。
• ​​耗材​​：离心管、反应杯、采血器等。

​​4. 仪器设备​​

• ​​核心设备​​：全自动化学发光免疫分析仪。
• ​​辅助设备​​：电子天平、离心机、移液器等。

​​5. 检测流程​​

1. ​​样本处理​​：
   • 采集静脉血，分离血清（避免溶血或污染），-20℃保存。
   • 检测前离心去除杂质。
2. ​​试剂准备​​：稀释洗涤液，装载磁微粒、抗原、抗体工作液。
3. ​​操作步骤​​：
   • 第一次孵育（37℃ 10min）→清洗（磁分离去上清）→第二次孵育（加AE抗体，37℃ 5min）→化学发光检测。
4. ​​结果计算​​：
   • 用6点校准品拟合四参数标准曲线（R²≥0.99）。
   • 质控品验证（质控1≤20 U，质控2 140~260 U）。

​​6. 结果判定​​

• ​​阳性​​：抗体含量≥10 U。
• ​​阴性​​：抗体含量<10 U。

​​7. 附录内容​​

• ​​附录A​​：试剂配方（如洗液、PBS、CB缓冲液）。
• ​​附录B​​：工作液制备（磁微粒、抗原、AE抗体的偶联与纯化）。
• ​​附录C​​：校准品制备（高免血清梯度稀释，中和试验标定）。
• ​​附录D​​：质控品制备（稀释高免血清，设定Mean±3SD范围）。

​​8. 其他关键点​​

• ​​质量控制​​：每批检测需验证质控品，试剂更换或校准后需重新校准曲线。
• ​​专利声明​​：部分内容可能涉及专利，发布机构不承担识别责任。
• ​​起草单位​​：涵盖天津、内蒙古、辽宁等十余家省级动物疫控中心及企业。

​​9. 创新性与应用价值​​

• ​​高灵敏度​​：磁微粒化学发光法提升检测精度。
• ​​标准化​​：明确试剂制备、操作流程和判定标准，适用于大规模疫病监测。
• ​​兼容性​​：与GB/T 18637（BVD诊断规范）和NY/T 541（采样标准）衔接。

该标准为BVDV抗体检测提供了自动化、标准化的解决方案，适用于兽医诊断和流行病学调查。