DB1302/T 249-2008 自然发情母牛冷冻胚胎移植技术规范

​​DB1302/T 249-2008《自然发情母牛冷冻胚胎移植技术规范》主要内容总结​​

​​1. 适用范围​​

本标准规定了自然发情母牛接受细管冷冻胚胎移植的技术要求，包括受体牛选择、发情鉴定、排卵时间确定、黄体质量判定、胚胎解冻与移植操作等。适用于唐山地区奶牛的一步法解冻细管冷冻胚胎移植。

​​2. 受体牛选择标准​​

• ​​健康要求​​：无遗传病、传染病，体重≥350kg，中等膘情。
• ​​繁殖状态​​：
  • 青年牛：连续正常发情3次以上。
  • 经产牛：≤3胎，产后连续正常发情2次以上。
• ​​历史记录​​：无难产、助产、胎衣不下史。
• ​​药物限制​​：移植前60天内禁用疫苗、激素类及驱虫药物。

​​3. 发情鉴定方法​​

​​3.1 外部观察​​

• ​​发情前期​​：躁动、爬跨其他牛，外阴肿胀流透明粘液，不接受爬跨。
• ​​发情中期​​：接受爬跨，粘液粗长透明，持续4-6小时。
• ​​发情后期​​：粘液变浑浊短粗，外阴消肿，食欲恢复。

​​3.2 直肠检查​​

子宫颈松软，卵巢有卵泡发育。

​​3.3 阴道检查​​

阴道粘膜潮红，子宫颈松弛，多量透明粘液流出。

​​4. 排卵时间确定​​

• ​​外部观察​​：发情结束后8-12小时排卵。
• ​​直肠检查​​：卵泡部位凹陷或卵巢变形，排卵过程约1-2小时。

​​5. 移植时间与部位​​

• ​​移植时间​​：排卵后第7天。
• ​​移植部位​​：排卵侧子宫角小弯处。

​​6. 黄体质量判定​​

• ​​体积​​：直径1-1.5cm，占卵巢1/2-1/3。
• ​​形状​​：顶端有“火山口”凹陷，界限明显。
• ​​质感​​：凹凸不平，弹性如“肉样”。

​​7. 移植前准备​​

​​7.1 器械消毒​​

• 移植枪、细管剪等用75%酒精消毒，火焰二次消毒。
• 移植枪冷却后套一次性软外套。

​​7.2 受体牛处理​​

• ​​保定​​：六柱栏固定。
• ​​外阴消毒​​：高锰酸钾→温开水→酒精→生理盐水冲洗。

​​7.3 人员要求​​

• 移植人员与助手各1名，手臂消毒，指甲修剪光滑。

​​8. 胚胎解冻流程​​

1. 胚胎细管从液氮罐取出，空气中晃动5-8秒。
2. 35-38℃温水解冻20-30秒。
3. 擦干水珠，弹动细管使解冻液混合，核对标识。

​​9. 胚胎细管装入移植枪​​

​​9.1 卡苏式移植枪​​

• 枪芯插入细管棉塞端，剪开前端，套硬/软外套，推枪芯排气。

​​9.2 节段式移植枪​​

• 软外套预装，剪开细管压口端，枪芯插入棉塞端，组装枪体。

​​10. 移植操作步骤​​

1. ​​阴道插入​​：移植枪插入阴道深部，拉出软外套。
2. ​​子宫定位​​：直肠握子宫颈，枪头达黄体侧子宫角小弯。
3. ​​胚胎释放​​：推枪芯注入胚胎，旋转1-2圈后抽出。
4. ​​复位​​：子宫角摆回生理位置，解除保定。

​​11. 记录要求​​

填写两表：

• ​​表1 受体牛发情登记​​：包括发情时间、卵泡发育、粘液状态等。
• ​​表2 移植情况记录​​：黄体状态、胚胎来源、移植部位、孕检及产犊结果。

​​12. 技术核心要点​​

• ​​精准同步​​：排卵后7天移植，确保子宫环境适宜。
• ​​黄体质量​​：直接关联胚胎着床成功率。
• ​​无菌操作​​：器械消毒与受体牛清洁防止感染。
• ​​解冻控制​​：快速解冻避免冰晶损伤胚胎。

本标准通过系统化流程设计，旨在提高唐山地区奶牛冷冻胚胎移植的效率和成功率。