资料介绍
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF2307—2025
微生物计数标准物质研制 (生产)
技术要求
2025-09-08发布 2026-03-08实施
国家 市场 监督 管理 总局 发布
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归口 单位 : 全国标准物质计量技术委员会
主要起草单位 : 中国计量科学研究院
参加起草单位 : 中国食品药品检定研究院
国家粮食和物资储备局科学研究院
广东省科学院微生物研究所
杭州微球科技有限公司
本规范委托全国标准物质计量技术委员会负责解释
本规范主要起草人 :
隋志伟 (中国计量科学研究院)
刘思渊 (中国计量科学研究院)
参加起草人 :
崔生辉 (中国食品药品检定研究院)
王松雪 (国家粮食和物资储备局科学研究院)张玲 (中国计量科学研究院)
代京莎 (广东省科学院微生物研究所)
冯广青 (杭州微球科技有限公司)
引言
微生物计数标准物质广泛应用于食品、药品、化妆品、环境样品、消毒产品等微生物检测、仪器校准、质量控制、方法开发等活动中。本规范的目的是规范微生物计数标准物质的研制过程 , 为微生物测量活动提供符合质量要求的标准物质。
本规范以 JJF 1342《标准物质研制 (生产) 机构通用要求》、JJF 1343《标准物质的定值及均匀性、稳定性评估》 和 JJF 1218《标准物质研制报告编写规则》 为指导原则。 “Reference Material (RM) ”对应的中文包括 “标准物质 ” “参考 物质 ” 或 “标准 样品 ”, 本规范中统一使用 “标准物质”。
本规范为首次发布。
1 范围
本规范规定了细菌、真菌等可定量测量的微生物计数标准物质的研制策划、制备、均匀性评估、稳定性评估、定值、不确定度评定、研制报告和证书、保存和运输等 要求 , 适用于指导国家一级、二级标准物质的研制 , 也可为其他类型标准物质和微生物测量质量控制样品的研制提供参考。
2 引用文件
本规范引用了下列文件 :
JJF 1001 通用计量术语及定义
JJF 1005 标准物质通用术语和定义
JJF 1059.1 测量不确定度评定与表示
JJF 1135 化学分析测量不确定度评定
JJF 1186 标准物质证书和标签要求
JJF 1218 标准物质研制报告编写规则
JJF 1265 生物计量术语及定义
JJF 1342 标准物质研制 (生产) 机构通用要求
JJF 1343 标准物质的定值及均匀性、稳定性评估
JJF 1854 标准物质计量溯源性的建立、评估与表达
JJF 2308 标准物质研制 (生产) 实验室病原微生物生物安全通用要求
GB 4789.28 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27025 检测和校准实验室能力的通用要求
GB/T 27405 实验室质量控制规范食品微生物检测
WS233 病原微生物实验室生物安全通用准则
凡是注日期的引用文件 , 仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 凡是不注日期的引用文件 , 其最新版本 (包括所有的修改单) 适用于本文件。
3 术语和定义
JJF 1001、JJF 1005和 JJF 1265界定的以及以下术语和定义适用于本规范。
3.1 微生物计数标准物质 microbial countreference material
具有足够均匀和稳定的特性 , 并确定了菌落或菌体数等微生物测量特性 (量) 值 ,适合于特定用途的标准物质。
3.2 标准菌株 referencestrain
由国内或国际菌种保藏机构保藏的 , 至少定义到属或种水平的菌株。其特性能得到确认和保证 , 并可以追溯。
【来源 : GB/T 27405—2008, 3.10, 有修改】
3.3 标称特性 nominal property
不以大小区分的现象、物体或物质的特性。
注 : 微生物的标称特性包括全基因组序 列信息、特异 性分子标记、 携带的毒 力基因 或耐 药基因、特
征生化反应、特征蛋白等。
【来源 : JJF 1001—2011, 3.32】
3.4 培养基 culture media
液体、半固体或固体形式的、含天然或合成成分 , 用于保证微生物繁殖、鉴定或保持其活力的物质。
【来源 : GB 4789.28—2024, 2.4】
3.5 平板计数 plate counting
用经过梯度稀释的样品某一稀释度液接种平板 , 生长后通过菌落数换算出样品中微生物活细胞数量的方法。
【来源 :《微生物学名词》 (第二版) 2012, 有修改】
3.6 流式计数 flow cytometry counting
液流中排成单列的特定生物颗粒在逐个穿越流动室的过程中受激光照射 , 通过检测其散射光或者特异性荧光 , 来测定生物颗粒特性和数量的方法。
4 通用性原则
4.1 基本要求
应符合 JJF 1342、JJF 1343等对标准物质研制的相关要求。
4.2 生物安全要求
4.2.1 微生物计数标准物质的研制场所、设施设备、操作活动、废物处理等 , 须符合《中华人民共和 国生 物安 全法》 等法 律法 规的 规定 , 并应 符合 GB 19489、 WS 233、 JJF 2308等相关安全防护水平对生物安全管理的要求。
4.2.2 应根据标准物质原料的危害程度 , 选择和采取相应级别的生物安全防护措施。
5 研制策划
5.1 需求及预期性能要求
5.1.1 标准物质研制机构应根据市场和客户需求 , 承担微生物计数标准物质研制 (生产) 项目策划和管理、特性值及不确定度的赋予、特性值的认定和报批 , 不能分包。
5.1.2 微生物计数标准物质的类型、特性值和不确定度水平应适用于其在食品、药品、化妆品、环境样品、消毒产品等微生物检测、仪器校准、质量控制、方法开发等领域的预期用途。
5.2 研制的可行性评估
5.2.1 应评估微生物计数标准物质原料的可获得性。
注 : 原料包括目标微生物、 背景微生物 (需要时)、基体、保护剂等。
5.2.2 应对微生物进行风险评估 , 核实实验室生物安全屏障是否满足 , 并制定和实施必要的实验室生物安全控制措施。
5.2.3 应评估微生物计数标准物质定值方法的计量溯源性和测量不确定度。
5.2.4 应评估保证微生物计数标准物质均匀性、稳定性、互换性 (需要时) 等技术的可获得性和确认方法。
5.2.5 必要时 (如缺乏标准物质均匀性或稳定性先验信息时) , 微生物计数标准物质研制宜进行预试验 , 评估策划方案的可操作性。
6 制备
6.1 原料要求
6.1.1 应使用微生物菌种保藏专门机构或同行认可机构保存的、标称特性可追溯的标准菌株。
6.1.2 微生物应信息完整 , 包括名称、菌株号、批号、保藏机构、有效期、保存条件、标称特性等。
6.1.3 应根据标准物质的预期用途选择合适的微生物 , 应满足适用性、代表性 , 以及容易培养或复制的原则。
6.1.4 应根据预期使用范围或用途 , 确定标准物质是否添加基体 ; 如需添加基体 , 应与实际分析样品的基体尽可能保持一致 ; 基体应进行验证试验 , 以确保不含有影响标准物质特性值的微生物以及抑菌剂等。
注 : 若基体的原料为临床样本 , 其来源应符合有关法律法规、安全要求和伦理学要求。
6.2 制备要求
6.2.1 微生物在购入、传代、保藏和标准物质研制过程中 , 应进行验证试验 , 以确保标称特性 (生化反应、基因序列、特征蛋白等) 不发生变化。必要时 , 定值前对标称特性进行确认。
注 : 微生物传代次数通常控制在 5 代之内。
6.2.2 微生物鉴定应科学合理 , 根据微生物的不同类型进行鉴定。如培养物纯度鉴定、形态学鉴定、生化鉴定、分子生物学鉴定、免疫学鉴定等。
6.2.3 如使用可培养计数的微生物 , 应根据标准物质预期用途 , 采用适当的工艺措施保证微生物的活性。
注 :
1. 微生物计数标准物质可以冻干粉等形式存在来保证活性 , 冻干粉通常需要进行水分含量控制。 制备过程可添加一定量保护剂 (如脱脂奶粉、谷氨酸钠等) 来保证候选物的活性。
2. 所用微生物培养基的生长率应满足 GB 4789.28等相 关标准 的要 求 , 并尽可 能使用效果最佳的培养基。
6.2.4 应采用适当的工艺措施保证微生物计数标准物质的稳定性和均匀性。
7 均匀性评估
7.1 基本要求
JJF 1343对标准物质均匀性评估的要求适用于微生物计数标准物质。
7.2 评估方案
7.2.1 应根据微生物计数标准物质的类型、状态、预期用途等制定均匀性评估方案 ,一般选择不低于定值测量程序精密度、具有足够灵敏度且能够溯源的测量程序 , 在实验室重复性测量条件下做均匀性评估。
7.2.2 微生物计数标准物质通常以 “单元 ” 的形式批量制备 , 应充分考虑单元内和单元间的均匀性。
7.2.3 鉴于微生物计数标准物质是不易均匀的标准物质 , 当总体单元数 ≤500时 , 抽取单元数至少为 15个单元 ; 当总体单元数 >500时 , 抽取单元数至少为 30个单元 ; 每个单元的重复测量次数不应少于 3次。
7.2.4 应充分研究并确定微生物计数标准物质的最小取样量。
8 稳定性评估
8.1 基本要求
JJF 1343对标准物质稳定性评估的要求适用于微生物计数标准物质。
8.2 评估方案
8.2.1 应根据微生物计数标准物质的类型、状态、预期用途等制定稳定性评估方案 ,一般选择不低于定值测量程序精密度、具有足够灵敏度且能够溯源的测量程序做稳定性评估。
8.2.2 通常标准物质开瓶后应一次性完全使用 , 必要时可对开瓶后的稳定性进行评估。
8.2.3 应确保微生物计数标准物质在运输过程中的稳定。要充分考虑到恶劣运输情况或极限温度运输情况对稳定性的影响。
注 : 通常在运输微生物计数标准物质的容器中添加干冰来保持低温条件。
8.2.4 当标准物质的稳定性先验信息较少时 , 建议设计多个温度点进行评估 , 观测间隔可以按先密后疏的原则安排。
9 定值
9.1 基本要求
JJF 1342和 JJF 1343对标准物质定值的要求适用于微生物计数标准物质。
9.2 微生物计数标准物质的特性值
微生物计数标准物质的特性值是指微生物菌落或菌体数等。
9.3 定值方法的选择
9.3.1 一家实验室采用一种原级或权威机构认定参考测量程序定值。
9.3.1.1 测量时 , 要求有两个或两个以上有能力执行操作程序的熟练分析者独立进行操作 , 每个分析者提供至少 6个独立数据。
9.3.1.2 除了采用参考测量程序 , 应采用另一种独立测量程序开展确认测量。
9.3.1.3 该定值模式下 , 实验室应定期参加国际计量比对并取得国际等效。
9.3.2 一家实验室采用多种不同原理的测量程序开展研究 , 如平板计数法、流式计数法、显微镜检计数法等。
9.3.2.1 不同测量程序在测量原理上应有足够的差异 , 且独立数据组的数量不应少于6个。采用两种测量程序定值时 , 一种测量程序需要提供至少 6个独立数据方可作为一个独立数据组 ; 采用三种或三种以上测量程序定值时 , 一种测量程序需要提供至少 5个独立数据方可作为一个独立数据组。
9.3.2.2 测量程序的计量控制应接近参考测量程序的水平 , 并经过有效证实 , 包括 :
a) 研制 (生产) 机构应根据 GB/T 27025进行适当的测量程序确认研究 , 并评估测量不确定度 ;
b) 研制 (生产) 机构应与具备国际等效测量能力的实验室比对 , 以进行测量程序性能验证。有条件的情况下 , 应参加国际比对 , 以确保国际等效。
9.3.2.3 该定值模式用于一级标准物质的定值时 , 应经由至少另外三家实验室开展确认测量 , 且确认测量所采用的测量程序应覆盖定值所用全部测量程序。确认测量应选择能力获得证明的实验室 , 能力证明包括 :
a) 以往实验室比对、能力验证、测量审核结果 , 或针对相同被测量的、GB/T 27025或其他相关标准的第三方符合性评估结果 ;
b) 方法确认数据 ;
c) 全面可靠的不确定度评估记录 ;
d) 采用有证标准物质开展质控的结果 , 如果有同类标准物质则优先使用。
9.3.3 由多家具有能力的实验室合作定值
注 : “能力” 是指能够按照 JJF 1342、JJF 1343及本规范要求参与定值活动 , 测量结果能够满足特定的计量溯源性和准确度要求。
9.3.3.1 采用两种或两种以上可证明准确度的测量程序合作定值时 , 应满足如下要求 :
a) 主导实验室应具备全部测量程序的评估能力 ;
b) 应尽可能选择能较好代表不同测量原理的测量程序 , 实质不同的测量原理不应少于两个 ;
注 : 倾注平板计数法和涂布平板计数法可视为测量原理相同的测量程序。
c) 独立数据组的数量不应少于 8个。
注 : 该定值模式下 , 一家实验室采用一种测量程序所得结果可作为一个独立数据组。
d) 各测量程序的独立数据组数应均衡 , 至少两种测量程序能够各提供不少于 3 个独立数据组。
e) 每个独立数据组应至少包含 2个单元的测定结果 , 且不少于 6个独立数据。
9.3.3.2 使用一种可证明准确度的测量程序时 , 应经由不少于 9 个实验室合作定值。每个参加定值的实验室至少测定 3个单元 , 提供不少于 9个独立数据。
注 : 该定值模式仅适用于二级标准物质的定值。
9.3.3.3 采用合作定值方式时 , 主导实验室应定期参加基于国际等效测量能力开展的计量比对、能力验证、测量审核并取得满意结果。
9.3.3.4 采用合作定值方式时 , 应选择在实验室能力方面具有代表性且能力获得证明的参加者。能力证明包括 :
a) 以往实验室比对、能力验证、测量审核结果 , 或之前参与相同被测量标准物质定值的结果 , 或针对相同被测量的、GB/T 27025或其他相关标准的第三方符合性评估结果 ;
b) 方法确认数据。
9.3.3.5 采用合作定值方式时 , 应满足如下要求 :
a) 合作定值实验室采用有证标准物质开展质控 , 如果有同类标准物质则优先使用 ;
b) 合作定值实验室应通过主导实验室组织的盲样考核 ;
c) 主导实验室与合作定值实验室签订定值协议 , 协议中应包括质量控制要求和方案 , 根据方案发放定值样品和试剂 , 明确实验方法和实验条件 , 规定实验重复次数和结果报告方式 , 按照统一要求汇总定值数据 ;
d) 根据定值合同的要求实施测量活动 , 包括测量的单元数、重复次数等 ;
e) 提供定值所用仪器设备和校准物的计量溯源性证明 ;
f) 保证每次测量的独立性 , 如不同的操作人员、不同测量时间、不同的实验装置等 ;
g) 应记录所有与标准物质定值相关的重要活动和数据并保证可追溯 ;
h) 应记录所用试剂的种类、 品牌、批号 , 并对试剂进行必要的质量评价 , 如评价培养基的生长率等 ;
i) 按照 JJF 1059.1、JJF 1135的原则识别、控制不确定度来源 , 并在需要时评定测量不确定度。
9.4 数据评估
定值数据审核、数据评估和统计处理应按 JJF 1343、JJF 1059.1 的要求进行。
9.5 定值结果及不确定度
9.5.1 标准物 质的 定值 结果 及不 确定 度应 由研 制机 构按 照 JJF 1343、JJF 1059.1、 JJF 1135进行评定和表示 , 不能分包。
9.5.2 定值结果及不确定度必须建立在合理的均匀性、稳定性评估及定值测量的基础上。
9.5.3 数值修约规则按 GB/T 8170进行。
10 计量溯源性
10.1 基本要求
应依据 JJF 1854的要求 , 对微生物计数标准物质特性值的计量溯源性进行评估。
例如 : 通过使用满足计量学特性要求、经确认的 计数 测量 程序和经检定校准 的计 量器具 , 微生 物计
数标准物质的特性 值通 常可溯源至 单位 “一 ” ( 符号 : 1) , 以及 国际 单位 制基本 单位 千克(kg) 或国家法定计量单位升 (L)。
10.2 支持性信息
应在研制报告中提供计量溯源性相关的支持性信息 , 包括但不限于 :
a) 被测量的充分说明 , 包括必要的确证 ;
b) 有关测量程序的确认过程、结果的信息 ;
c) 定值模式 ;
d) 量值及不确定度的规范表述 ;
e) 所采用定值测量程序的理论基础、测量模型 ;
f) 量值及不确定度评估方法及过程 ;
g) 质量、容量等计量器具的检定或校准证书。
11 研制报告和证书
11.1 研制报告
11.1.1 应依据 JJF 1218的要求以及标准物质管理部门的规定 , 编制微生物计数标准物质研制报告。
11.1.2 研制报告应描述标准物质的研制策划、方法确认及溯源性、标准菌株确认、制备与质量控制、均匀性评估、稳定性评估、定值、不确定度评定、包装和保存等信息 ,并提供充分的数据及分析信息 ; 应说明影响标准物质使用的任何信息 , 包括生物安全信息。
11.2 证书和标签
11.2.1 微生物计数标准物质证书的编写和标签的内容应符合 JJF 1186的要求。
11.2.2 微生物计数标准物质证书的内容应包含使用过程中防护装备的穿戴、剩余样品的处理等生物安全注意事项。
11.2.3 应充分考虑储存温度对标签的影响 , 必要时可采用防冻标签。
12 保存、包装和运输
12.1 基本要求
JJF 1342对标准物质包装、保存和运输的要求适用于微生物计数标准物质。
12.2 保存要求
微生物计数标准物质研制及贮存环境条件应有明确的规定和相应的监控记录。
12.3 包装和运输要求
12.3.1 包装应满足微生物计数标准物质的预期用途。宜选用免吸附、无抑菌效果的包装材料。
12.3.2 复制批标准物质生产时 , 包装形式和材质的更换应经过适当的评估。
12.3.3 涉及病原微生物或感染性物质的标准物质 , 其包装和运输应满足 《病原微生物实验室安全管理条例》、世界卫生组织 《感染性物质运输指南》 及国际民航组织 《危险性物品航空安全运输技术细则》 等要求。
12.3.4 涉及病原微生物或感染物质的标准物质 , 包装材料和运输容器通常应符合防水、防破损、防外泄、耐高 (低) 温、耐高压 , 能承受在 -40 ℃ ~ +55 ℃温度范围内95kPa的内部压力而无渗漏的要求。标签、包装及运输容器上通常印有国务院卫生主管部门或者兽医主管部门规定的生物危险标识、警示语和提示语。
参考文献
[1] 中华人民共和国生物安全法
[2] 中华人民共和国国务院令第 424号 : 病原微生物实验室生物安全管理条例
[3] 世界卫生组织 : 感染性物质运输指南 (WHO: Guidance on regulations for the transportofinfectious substances)
[4] 国际民 用航 空组 织 : 危险 物品 航空 安全 运输 技术 细则 (International Civil Aviation Organization: Technical instructions for the safe transport of dangerous goods by air)
